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1、采用液相色谱电雾式检测器柱后 补偿分析测定饮料中的三氯蔗糖刘绿叶 金燕赛默飞世尔科技（中国）有限公司Application Notes C_LC-48 关键词三氯蔗糖；液相色谱；电雾式检测器；柱后补偿；饮料引言三氯蔗糖(4,1,6-三氯半乳蔗糖， 结构式见图1)又名蔗糖素，英文名称为：sucralose，1976 年由英国 Tate&Lyle 公司和美国 Johnson 公司的子公司开发。三氯蔗糖是一种白色粉末状产品，极易溶于水 ( 溶解度 28.2 g，20 )，甜度为蔗糖的 600 倍，且甜味纯正，甜味特性曲线几乎与蔗糖重叠。它是以蔗糖等为原料经脱氧、氯化衍生而得到的半天然半合成产品，属非
2、营养型强力甜味剂，在人体内几乎不被吸收，热量值为零。80 年代中期，国际上 16 位知名专家组成的专门小组对三氯蔗糖的安全性问题进行了权威评价，确认三氯蔗糖对于广泛用途来说是安全的。1990年联合国粮农组织和世界卫生组织 (FAO/WHO) 的食品添加剂专业委员 (JECFA) 会经过 140 多次安全和环境的研究来确定三氯蔗糖的安全性，于 1990 年确定其 ADL 值为 15 mg/kg，即每天允许摄入量为 0-15 mg/kg 体重。但也必须指出，三氯蔗糖毕竟不是天然成分，就目前的安全性评价来看，在规定的剂量范围内使用可能对人无害，但若超量使用，仍可能引起各种形式的毒性表现。因此必须加强
3、对三氯蔗糖的含量控制， 发挥其有利作用，防止不利影响。国内对于饮料中三氯蔗糖含量检测的文献资料较少，有 GB/T 22255 标准中采用蒸发光散射检测器1进行食品中三氯蔗糖含量检测的报道，也有采用示差检测器来进行测定2，对更低含量的三氯蔗糖其定性分析有采用液相色谱串联质谱进行分析3。本文主要研究了电雾式检测器测定饮料中三氯蔗糖含量的分析方法，考察该方法的定量重现性，检测限等能否达到标准要求。图 1. 三氯蔗糖分子结构式测试条件仪器：Ultimate3000 高效液相色谱仪，包括有带在线脱气单元的双三元梯度泵、自动进样器、柱温箱和电雾式检测器。分析柱：Acclaim 120 C18 3.0m 2
4、.1150mm P/N: 059130 S/N:001230柱温：30检测器参数：采集频率：10Hz，雾化温度：35.0进样量：10.0L流动相组成：分析泵（左泵）：A: 水 B: 乙腈，0-6min，B 从 10%-30%,6-10min,B 升至 50%, 然后平衡5min。流速：0.3ml/min；补偿泵（右泵）：0.7ml/min，100% 乙腈。由于三氯蔗糖的极性较强，色谱分离条件中水相较高，因此，在色谱柱分离后，添加了一路纯有机相 - 乙腈进行补偿，增加了雾化效率，提高检测器的响应值，与不加柱后补偿相比，约增加了 30% 的峰高值。2结果与讨论标准溶液分析结果液相色谱应用 - 2
5、- 检测器参数：采集频率：10Hz，雾化温度：35.0 进样量：10.0L 流动相组成：分析泵（左泵） ：A:水 B:乙腈，0-6min，B 从 10%-30%,6-10min,B 升至 50%, 然后平衡 5min。流速：0.3ml/min；补偿泵（右泵） ：0.7ml/min，100% 乙腈。 由于三氯蔗糖的极性较强，色谱分离条件中水相较高，因此，在色谱柱分离后，添加了 一路纯有机相-乙腈进行补偿，增加了雾化效率，提高检测器的响应值，与不加柱后补偿相 比，约增加了 30%的峰高值。 结果与讨论 2.1 标准溶液分析结果 图 2 标准溶液谱图 图 2. 标准溶液谱图图 3. 标准溶液线性回归
6、图液相色谱应用 - 2 - 检测器参数：采集频率：10Hz，雾化温度：35.0 进样量：10.0L 流动相组成：分析泵（左泵） ：A:水 B:乙腈，0-6min，B 从 10%-30%,6-10min,B 升至 50%, 然后平衡 5min。流速：0.3ml/min；补偿泵（右泵） ：0.7ml/min，100% 乙腈。 由于三氯蔗糖的极性较强，色谱分离条件中水相较高，因此，在色谱柱分离后，添加了 一路纯有机相-乙腈进行补偿，增加了雾化效率，提高检测器的响应值，与不加柱后补偿相 比，约增加了 30%的峰高值。 结果与讨论 2.1 标准溶液分析结果 图 2 标准溶液谱图 3标准溶液的浓度为 1、
7、5、10、20、50、100 g/ml，空白溶剂为去离子水，根据峰面积（pA*min）为 Y 值，浓度为X(g/ml) 值，经工作站自动计算得方程为：Y= 0.0631X 0.0811，相关系数 99.9%。重现性分析结果对标准溶液 10.0 g/ml，连续进样 5 针，保留时间和峰面积的 RSD 值分别为 0.08% 和 1.50%，因此，该方法的重现性较好。线性范围与检出限分析本方法的线性范围为 1-100 g/ml，根据最低标准溶液浓图 4. 样品溶液分析谱图（以某功能型饮料为例）度点 1.0 g/ml 的响应值，按照方法检出限计算公式（S/N=3），得出 LOD 约为 0.2 g/ml
8、。样品回收率分析在样品中分别添加了三个不同浓度值的标准溶液，分别为 1.0、2.0、10.0 g/ml，计算得回收率值分别为 81.3%、87.9% 和 108.8%。样品分析结果样品均为水溶液，经过超声脱气后，直接用 0.22m 滤膜过滤后，进样。液相色谱应用 - 3 - 图 3 标准溶液线性回归图 标准溶液的浓度为 1、5、10、20、50、100 g/ml，空白溶剂为去离子水， 根据峰面积（pA*min）为 Y 值，浓度为 X(g/ml)值，经工作站自动计算得方程 为：Y= 0.0631X+ 0.0811，相关系数 99.9%。 2.2 重现性分析结果 对标准溶液 10.0 g/ml，连
9、续进样 5 针，保留时间和峰面积的 RSD 值分别 为 0.08 和 1.50%，因此，该方法的重现性较好。 2.3 线性范围与检出限分析 本方法的线性范围为 1-100 g/ml，根据最低标准溶液浓度点 1.0 g/ml 的响应值，按照方法检出限计算公式（S/N=3） ，得出 LOD 约为 0.2 g/ml。 2.4 样品回收率分析 在样品中分别添加了三个不同浓度值的标准溶液，分别为 1.0、2.0、10.0 g/ml，计算得回收率值分别为 81.3%、87.9%和 108.8%。 2.5 样品分析结果 样品均为水溶液，经过超声脱气后，直接用 0.22m 滤膜过滤后，进样。 图 4 样品溶液
10、分析谱图（以某功能型饮料为例） 表 2 样品分析结果 Sample Name Ret.Time min Peak Name Area pA*min Amount g/mL 某可乐 5.87 三氯蔗糖 0 未检出 某植物饮料 5.87 三氯蔗糖 0 未检出 某功能饮料 5.90 三氯蔗糖 4.384 68.411 该功能型饮料配方中注明了含有三氯蔗糖，但未标示含量值。 结论 上述研究结果表明，采用 C18 色谱柱分离，柱后加有机相补偿，电雾式检测器检测，获 得了较好的分离度与重现性，因此是一个较好的饮料中的三氯蔗糖的分离与检测方法。 表 2. 样品分析结果Sample NameRet.Time
11、minPeak NameArea pA*minAmount g/mL某可乐5.87三氯蔗糖0未检出某植物饮料5.87三氯蔗糖0未检出某功能饮料5.90三氯蔗糖4.38468.411该功能型饮料配方中注明了含有三氯蔗糖，但未标示含量值。免费服务热线： 800 810 5118400 650 5118 ( 支持手机用户 )赛默飞世尔科技（中国）有限公司Application Notes C_LC-48 AN_C_LC-48 结论上述研究结果表明，采用 C18 色谱柱分离，柱后加有机相补偿，电雾式检测器检测，获得了较好的分离度与重现性，因此是一个较好的饮料中的三氯蔗糖的分离与检测方法。参考文献：1 食品中的三氯蔗糖的测定， GB/T 22255-20082 张莉 . 高效液相色谱法测定饮料中三氯蔗糖的含量 J, 中国卫生检验杂志 2007,17(10):1784-1786.3 周莉莉 ，杨 颖，刘艳明 , 等 . 超高效液相色谱 - 串联质谱法测定食品中的三氯蔗糖 J, 分析测试学报 ,2011,30(10):1175-1178.
