《螺内酯对醛固酮诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及NF-κB、MCP-1表达的影响（毕业设计-内科学专业）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《螺内酯对醛固酮诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及NF-κB、MCP-1表达的影响（毕业设计-内科学专业）（63页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 目 录中英文缩略词表2 中文摘要4 英文摘要7 引言11 材料与方法12 结果24 讨论32 结论39 参考文献40 附录 个人简历45 致谢47 综述48 1 中英文及缩写对照表缩写ACEIACRAGEsALDAngAP-1AR英文名称 中文名称angiotensin converting enzyme inhibitoralbumin-to-creatinine ratioadvanced glycosylation end productsaldosterone血管紧张素转换酶抑制剂尿白蛋白/肌酐比值糖基化终末产物醛固酮angiotensin 血管紧张素activator protei
2、n-1 活化蛋白-1aldose reductase 醛糖还原酶ARBCATCCR2CTGFangiotension receptor blockercatalase血管紧张素受体拮抗剂过氧化氢酶C-C chemokine receptor-2connective tissue growth factorCC类趋化因子受体 2结缔组织生长因子2,7-二氯双氢荧光素二乙酸酯糖尿病DCFH-DA 2,7- dichlorofluorescein diacetateDM diabetes mellitusDN diabetic nephropathy 糖尿病肾病ECMERKFDAFNextracel
3、lular matrix 细胞外基质extracellular signal-regulated kinasefood and drug administrationfibronectin细胞外信号调节激酶（美国）食品和药物管理局纤维连接蛋白GAPDHGBMGly-AlbGPxglyceraldehyde phosphate dehydrogenaseglomerular basement membraneglycosylation-albuminglutathione peroxidaseglucocorticoid receptorglutathione磷酸甘油醛脱氢酶肾小球基底膜糖基化白
4、蛋白谷胱甘肽过氧化物酶糖皮质激素受体还原型谷胱甘肽细胞间黏附分子-1GRGSHICAM-1 intercellular adhesion molecule-12 IL-6 interleukin-6 白介素-6MAPKMCP-1MCsmitogen-activated protein kinasesmonocyte chemoattractant protein-1mesangial cells丝裂原活化蛋白激酶单核细胞趋化蛋白-1系膜细胞MDAMIFmalondialdehyde 丙二醛macrophage migration inhibitory factormineralocortico
5、id receptorN-acetylcysteine巨噬细胞游走抑制因子醛固酮受体MRNAC N-乙 酰 半胱氨酸核因子-BNF-BOx-LDLPAI-1PKCnuclear factor-Boxidized low density lipoproteinplasminogen activator inhibitor-1protein kinase C氧化低密度脂蛋白纤溶酶原激活物抑制物-1蛋白激酶 CRAASROSrenin-angiotensin-aldosterone systemreactive oxygen species肾素-血管 紧张素- 醛固酮系统活性氧RT-PCR reve
6、rse transcription-polymerase chain 逆转录聚合酶链反应reactionSOD superoxide dismutase 超氧化物歧化酶螺内酯SPI spironolactoneSPSSTGF-1statistical package for social sciencetransforming growth factor-1社会科学统计软件包转化生长因子- 111-羟类 固醇脱氢酶 211-HSD2 11-hydroxysteroid dehydrogenase 23 螺内酯对醛固酮诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及NF-B、MCP-1表达的影响摘 要目的 观
7、察螺内酯(SPI)对醛固酮(ALD) 诱导的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)氧化应激和核因子-B(NF- B)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响，探讨其肾脏保护机制。方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞，随机分组如下： CG组：正常对照组(低糖 DMEM培养液葡萄糖浓度为 5.6 mmol/L)； ALD 组：醛固酮刺激组，ALD 1组：低糖 DMEM培养液中加入醛固酮（10-5 mol/L）刺激；ALD 2组：低糖 DMEM培养液中加入醛固酮（10-7 mol/L）刺激；ALD 3组：低糖 DMEM培养液中加入醛固酮（10-9 mol/L）刺激； SPI组：螺内酯干预组，SPI 1组：醛
8、固酮（10-7 mol/L）刺激的同时加入螺内酯（10-7 mol/L）干预；SPI 2组：醛固酮（10-7 mol/L）刺激的同时加入螺内酯（10-8 mol/L）干预；SPI 3组：醛固酮（10-7 mol/L）刺激的同时加入螺内酯（10-9 mol/L）干预各组标本培养 48 h后收集各组细胞及上清液。每组实验细胞培养重复 6次，不同浓度螺内酯预先 3 h干预。采用流式细胞仪法检测系膜细胞内活性氧（ROS）水平；以反转录-PCR 法(RT-RCR)检测核因子-B （ NF-B）、单核细胞趋化蛋白-1（ MCP-1）醛固酮合成酶（CYP 11 B 2）、醛固酮受体（MR）和保护其配体特异性
9、的 11 - 羟类固醇脱氢酶 2（11 -HSD 2）的 mRNA表达。4 结果1 RT-PCR检测结果显示MCs表达CYP 11 B 2、MR和11 -HSD 2mRNA。2 ALD对MCs内ROS产生的影响不同浓度ALD刺激MCs 48 h后，细胞内ROS 水平明显增加，ALD 1，2，3组分别为 21.770.87，17.330.49，15.250.63，组间差异显著， P 0.01；与 CG组（4.280.50）相比，差异显著（P0.01）。3 ALD对MCs NF- B及MCP-1 mRNA表达的影响经半定量 RT-PCR检测发现， CG 组 MCs可低水平表达 NF-B mRNA（
10、0.440.11）、MCP-1 mRNA（0.380.14）。ALD作用 48 h后，NF-B mRNA表达明显增强，ALD 1，2，3组分别为0.930.09、0.720.10、0.630.13，组间差异显著（P0.05），且均 显著高于CG组，差异显著（P0.01）。ALD作用 48 h后，MCP-1 mRNA表达明显增强，ALD 1，2，3组分别为0.950.14、0.770.17、0.650.07，组间差异显著（P0.05），且均 显著高于CG组，差异显著（P0.01）。4 SPI对ALD 诱导的MCs内ROS产生的影响ALD(10-7 mol/L)刺激的同时加入SPI 干预后，SPI
11、 1，2，3组细胞内ROS水平分别为7.340.89、9.250.65、10.90.97，组间差异显著，P 0.01；与ALD 2组（17.330.49）相比，差异显著（P0.01 ）。5 SPI对ALD 诱导的MCs内NF-B及MCP-1 mRNA 表达的影响ALD(10-7 mol/L)刺激的同时加入SPI 干预后，SPI 1，2，3组MCs内NF-B mRNA的表达分别为0.410.05、0.450.09、0.580.14，组间差异显著，P 0.05；与ALD 2组（0.640.19）相比，差异显著（P0.05）。SPI 1，2，3组MCs内MCP-1 mRNA的表达分别为0.500.1
12、8、0.520.20、0.690.16，组间差异显著，P 0.05；与ALD 2组（0.760.11）相比，差异显著（P0.05）。5 6 MCs内ROS产生和NF-B mRNA表达的相关性分析MCs内ROS 水平与NF-B mRNA表达量可能呈显著正相关(r=0.929 ，P 0.01)。7 MCs内NF-B 及MCP-1 mRNA表达量的相关性分析MCs内NF-B及MCP-1 mRNA表达量也可能呈显著正相关(r=0.682 ，P 0.01)。结论 MCs可表达CYP 11 B 2、MR及其保护性配体11 -HSD 2 mRNA；ALD可与MCs内MR特异性 结合，促进MCs内ROS产生增
13、多、NF-B及MCP-1 mRNA表达增加，并具有浓度依赖性；MCs细胞内氧化应激可能与NF-B及MCP-1 mRNA表达增加有关；SPI呈浓度依赖性地抑制ALD诱导的MCs内ROS产生增多、NF-B及MCP-1mRNA表达增加，该作用可能是其肾脏保护的机制之一。关键词 氧化应激 核因子-B 单核细胞趋化蛋白-1 螺内酯 醛固酮6 Effects of Spironolactone on Aldosterone Mediated OxidativeStress and NF-B、MCP-1 Expressions in Cultured RatGlomerular Mesangial Cell
14、sAbstract0bjective To observe the effects of spironolactone(SPI) on aldosterone(ALD)mediated oxidative stress, nuclear factor-B(NF-B) and monocyte chemoattractantprotein-1(MCP-1) expressions in cultured rat glomerular mesangial cells(MCs) in orderto explore its mechanisms of reno-protection.Methods The MCs were cultured in the medium with nomal glucose and then dividedinto groups as follows: Control Group: the control group (Low glucose 5.6 mmol/L DMEM media); Group ALD: the aldosterone-stimulated group,Group ALD 1：Low glucose DMEM media containing
