《蓝萼甲素对人肺癌A549细胞的抑制作用及其机制（毕业设计-药理学专业）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蓝萼甲素对人肺癌A549细胞的抑制作用及其机制（毕业设计-药理学专业）（63页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、硕士学位论文论 文 题 目 蓝 萼 甲 素 对 人 肺 癌 A549 细 胞 的 抑 制作 用 及 其 机 制研究生姓名 李 梦 姣指导教师姓名 顾 振 纶 教 授 蒋 小 岗 副 教 授专 业 名 称 药 理 学研 究 方 向 肿 瘤 药 理 学论文提交日期 2013 年 5 月蓝萼甲素对人肺癌 A549 细胞的抑制作用及其机制 中文摘要蓝 萼 甲 素 对 人 肺 癌 A549 细 胞 的 抑 制 作 用 及 其 机 制中 文 摘 要目的：探讨蓝萼甲素（G laucocalyxin A,GLA）对人肺癌 A549 细 胞 的 抑 制 作 用及 其 作 用 机 制 ， 为 GLA 的抗肿瘤作用
2、及用于临床提供进一步的实验依据。方法：以不同浓度的 GLA 干 预 体 外 培 养 人 肺 癌 A549 细 胞 ,用 MTT 法 观 察 其 对A549 细胞增殖的影响, 流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化 ; Hoechst33258染 色 观 察 给 药 后 A549 细 胞 核 形 态 的 变 化 ， 透 射 电 镜 （ TEM） 观 察 A549 细 胞 超 微 结构 的 改 变 ,扫 描 电 镜 (SEM)观 察 A549 细 胞 表 面 结 构 改 变 ;western blot 法 检 测 GLA 对caspase-3、 8 和 PARP 蛋 白 表 达 的 改 变 。 R
3、T-PCR 方 法 检 测 GLA 对 A549 细 胞 内caspase-3、 8 和 PARP 基因表达的影响。实时定量( Real time )PCR 检 测 A549 细 胞内 microRNA 30a 的 表 达 情 况 。结果：G LA 对体外培养 A549 细 胞 具 有 增 殖 抑 制 作 用 （ P 0.05， P 0.01） ，并呈剂量和时间依赖趋势；Hoechst33258 染 色 后 ， 荧 光 显 微 镜 下 可 见 A549 细 胞 胞 核致 密 浓 染 ;TEM 观 察 可 见 A549 细胞核皱缩、染色质边集等细胞凋亡的特征性改变；SEM 观 察 可 见 A54
4、9 细 胞 微 绒 毛 减 少 ， 部 分 细 胞 膜 表 面 出 现 一 些 大 小 不 一 的 凹 陷 或孔 洞 。 流 式 细 胞 仪 PI 单 染 结 果 显 示 不 同 浓 度 GLA 作 用 A549 细 胞 48h 后 ， S 期 细胞 比 例 增 加 （ P 0.05） ； Annexin -FITC 双染结果显示不同浓度 GLA 作 用 于 A549细 胞 48h 后 ,细 胞 凋 亡 率 逐 渐 增 加 （ P 0.01） ， 3-甲 基 腺 嘌 呤 (3-MA)与 GLA 联 合 应用可使细胞凋亡率增加（P 0.05） ； GLA 干 预 A549 细 胞 后 Weste
5、rn blot 检 测 结 果 :caspase3、 caspase8、 PARP 蛋白表达上调，且均呈剂量依赖趋势；R T-PCR 结 果 ：caspase-3mRNA、 caspase-8mRNA、 PARPmRNA 的 表 达 上 调 （ P 0.05） ， Real time PCR结 果 表 明 ， microRNA30a 表达下调（P 0.05） 。结 论：蓝萼甲素( GLA)对体外培养人肺癌 A549 细胞的增殖具有一定的抑制作 用 ,并 可 诱 导 细 胞 凋 亡 和 自 噬 ， 且 可 使 A549 细 胞 阻 滞 在 S 期 ， 其 诱 导 细 胞 凋 亡 的I中文摘要 蓝
6、萼甲素对人肺癌 A549 细胞的抑制作用及其机制机制可能与激活 caspase-8 信号通路和下调 microRNA 30a 有 关 。关键词：G LA；肺癌；A 549 细胞；凋亡；自噬作 者：李梦姣指导老师：顾振纶 教 授蒋 小 岗 副 教 授IIThe inhibitory Effect of Glaucocalyxin A on human lung cancer A549 cell and its mechanism AbstractThe inhibitory Effect of Glaucocalyxin A on human lung cancerA549 cell and i
7、ts mechanismAbstractObjective ： To investigate the antiprolifrative effect and the mechanism ofGlaucocalyxin A on human lung cancer A549 cells.Methods: Human lung carcinoma A549 cell was treated with differentconcentrations of GLA（ 0,5,10,20mol/L） , investigate the cytoxicity of GLA by MTTassay. Mor
8、phological and biochemical changes of apoptosis were investigated usingHoechst 33258 staining and TEM. The ratio of apoptotic cells was measured by flowcytometry using AnnexinV/PI staining.The change of cell cycle was also measured byflow cytometry using PI staining. 25mg/kg).Western bloting was use
9、d to detect theprotein level of caspase-3、 caspase-8 and Parp. RT-PCR to detect the gene changes ofcaspase-3、 caspase-8 and Parp. Real time PCR to detect the level of microRNA30A.Meanwhile,flow cytometry was used to detect the effect of 3-MA on apoptosisinduced by GLA.Results: Compared with control
10、group, GLA displayed potent cytotoxic activityagainst human lung cancer A549 cell. GLA induced apoptosis in A549 cells, and the ratioof apoptosis cells increased (P0.01). Apoptosis morphological changes were observedon A549 cells after GLA treatment by Hoechst 33258 fluorochrome staining 、 TEM andSE
11、M.Sub-G1 phase peak was appeared and cell cycle was arrested in S phase afterGlaucocalyxin A treatment. The expression levels of caspase-3、 caspase-8 and ParpmRNA were downregulated(P0.05, P0.01). Real Time PCR detection miRNA-30aexpression was significantly lower (P0.05, P0.01); Western blot detect
12、ion ofcaspase-3、 caspase-8 and Parp were upregulated(P0.05, P0.01).Conclusion: GLA can inhibit A549 cell proliferation and induce cell apoptosis.GLAalso can induce cell cycle arrest. GLA induced apoptosis in human lung cancer A549IIIAbstract The inhibitory Effect of Glaucocalyxin A on human lung can
13、cer A549 cell and its mechanismcells trough activating caspase8 patnway. 3-MA could increase the ability of GLA inhibitA549 cell.Keywords: GLA; lung cancer; A549 cell; Apoptosis; AutophagyWritten by Li Meng-jiaoSupervised by GU Zhen-lunJIANG Xiao-gangIV目 录研 究 背 景 . 1第 一 部 分 GLA 对人肺癌 A549 细胞增殖、周期和 凋 亡 的 影 响 . 6材 料 与 方 法 . 6结 果 . 9小 结 . 19第 二 部 分 GLA 对人肺癌 A549 细胞抑制作用的 分 子 机 制 . 20材 料 与 方 法 . 20结 果 . 28小 结 . 31讨 论 .
