《HIF-2α基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HIF-2α基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、7 7 2 C h i n e s e J o u r n a l o f C l i n i c a l Me d i c i n e ， 2 0 1 3 V o 1 2 0 ， N o 6 中国临床 医学2 0 1 3年 1 2月 第 2 0卷第 6期 HI F 一 2 基 因与人肺腺癌 A5 4 9细胞株 对顺铂耐药性的关系 吴倩 袁凯 钱成 王勇” 童继春 袁卫 东 ( 1 南京 医科大学附属常州第二人 民医院血液肿瘤科 ， 胸心外科 ， 江苏常 州 2 1 3 0 0 3 ； 2 复旦 大学 附属 中山 医院胸 外科 ， 上 海2 0 0 0 3 2 ) 论著 摘要 目的： 探讨 小
2、干扰 R NA( s ma l l i n t e r f e r i n g R NA， s i RN A) 沉默 缺氧诱 导 因子 2 ( h y p o x i a i n d u c i b l e f a c t o r 2 a l p h a ， HI F 一 2 a ) 基 因表 达后 ， 人肺腺 癌 A 5 4 9细胞株对 顺铂耐 药性的 变化 。方法 ：构建靶 向 HI F 一 2 d基 因的 s i R NA真 核表达 载体并 转 染 A5 4 9细胞 ， 采用 R e a l t i me P C R检测 HI F - 2 d m RNA的表 达 ， 采 用 We s t
3、 e r n b l o t t i n g检测 HI F - 2 c 及 多药耐 药基 因 1 ( mu l t i d r u g r e s i s t a n e e 一 1 ， Md r 一 1 ) 蛋 白的表 达 ， 采用 MT T法检测顺铂处理后细胞的存活率。结果 ： 在 HI F 2 a s i RN A 转染 A5 4 9细胞后 2 4 、 4 8 h后 ， HI F - 2 d 在 mR NA和蛋白水平的表达与 空白对照组相 比均显著 下调 ( 均 P 0 0 5 ) 。 2 2 转 染后 人 肺腺 癌 A5 4 9细胞 中 HI F 一 2 d蛋 白的 表达 各转染组细胞
4、中 HI F 一 2 a蛋 白的表达水平具 有显著差 异 ， 见 图 1 。与空 白对 照组相 比， HI F 一 2 a s i R NA一 1组在转染后 2 4 、 4 8 h H1 F 一 2 a蛋 白的表达 差异均无统计学意义( P 0 0 5 ) ， HI F 一 2 a s i R NA一 2 组在转染后 4 8 h ， HI F 2 a蛋 白表达显著下调 ( P 0 0 1 ) ， HI F 一 2 a s i RNA一 3和 HI F 一 2 d s i RNA一 4组 细 中国临床医学2 0 1 3年 1 2月 第 2 0卷第 6期 C h i n e s e J o u r
5、 n a l o f C l i n i c a l Me d i c i n e ， 2 ( ) 1 3 V o 1 2 0 ， N o 6 7 7 5 发生 转 录组 ( t r a n s c r i p t o me ) 和蛋 白质 组 ( p r o t e o me ) 的改变， 使其对化疗药物的耐受性明显增强 ， 从而得 以存活， 即肿瘤的克隆选择机制 。这种经过缺氧 克隆选择的肿瘤细胞往往具有更强 的增殖 、 侵袭及 转 移 能力 “ 。HI F s 在缺 氧克 隆选 择 中发 挥着 重 要 作用 ， 在缺氧条件下 ， HI F 一 1 a能够上调 已糖激酶 、 醛 缩酶 、
6、乳酸脱氢酶的表达 ， 从而抑制药物 的抗肿瘤作 用_ 1 。在胃癌细胞株 中， HI F 一 1 0能够上调 胃癌细 胞 膜 表 面分 子 MGr l Ag 3 7 I R P蛋 白 的表 达 ， 从 而 促 进 细 胞 黏 附介 导 的 耐 药 ( c e l l a d h e s i o n me d i a t e d d r u g r e s i s t a n c e ， C AM DR) 形 成 f 。在 人 乳 腺 癌 MD A MB 一 2 3 1细 胞 和 人 结 肠 癌 HC T1 1 6细 胞 中 ， HI F 一 1 能够减少 由多种抗癌药所诱 导的肿瘤 细胞 老化
7、 ， 从而使肿瘤细胞产生化疗耐药性l_ 。 我们既往的研究发现 ， HI F 2 a在 NS C L C的发 生 、 发 展 中发 挥 重要 作 用l 3 j 。本研 究通 过 抑 制 HI F 一 2 a基 因的 表 达 来 探 讨 其 对 人 肺 腺 癌 A5 4 9细 胞株化疗耐药性的影 响。我们针对 HI F 一 2 a基因构 建了 4条 s i RN A 序列并进行 了筛选 ， 其 中 HI F 一 2 s i RNA 一 4的干扰抑制效果最为明显 ， 在转染后 2 4和 4 8 h ， HI F 2 a mR NA 表 达 与 空 白对 照 组 相 比 下 调 了( 6 0 6 3
8、5 1 0 ) 和 ( 8 0 0 03 5 5 ) ， 相 应 蛋 白 水 平 分 别 下 调 ( 3 1 6 91 1 5 6 ) 和 ( 8 2 8 7 4 O 9 ) ， 提示 s i R NA表达载体的高效性 。 HI F s可以活化一系列与化疗耐药有关的基因， 其 中 以编 码 p - g l y c o p r o t e i n ( p - g p ) 蛋 白 的 Md r l基 因最为重 要_ 1 。Md r 1属 于 AB C转 运 蛋 白超 家 族 ， 分子 量 为 1 7 0 0 0 0 ， 为跨 膜 转 运 蛋 白， 能 够在 AT P作 用下 将胞 内异 源 物 质
9、 包 括 抗 癌 药 物 泵 出胞 外 ， 从 而使药 物作 用减 弱 ， 产 生耐 药。本 研 究 中， HI F 一 2 a s i R NA一 4 靶 向抑 制 了 HI F 一 2 a基 因 的表 达 。 与空 白对照组相比， 在缺氧培养后 2 4 、 4 8 h ， HI F 一 2 a s i RNA 4组细胞 中 Md r 1蛋 白表达水平 均显著下 调 ( P( ) 0 1 ) ； 此 现 象 表 明 ： 在 缺 氧 环 境 下 ， HI F 一 2 d 基因沉默能够特异性抑制 Md r 一 1蛋白的表达， 这对 于逆 转 N S C I C化 疗 耐 药 性 的研 究 颇 具
10、 价 值 。 另 外 ， MTT 实 验 也 显 示 ， H1 F 2 a s i RNA一 4组 细 胞 对 顺铂 的敏 感性 明显 增加 ， 提示 s i R NA 通 过靶 向抑 制 HI F 一 2 a基因的表达 而下调 Md r 1的表达 ， 使肿 瘤 细胞对顺铂的耐药性下降。 以顺铂为基础 的联合化疗 在 NS C L C的综合治 疗中发挥着重要作用 ， 然而 ， 耐药 的产生严重地影响 了化疗效果 。本研究结果证实 ， HI F 一 2 a与 NS C I C 对化疗的耐药性相关 。 参考 文献 1 Oh e Y，Oh a s h i Y，Ku b o t a K，e t a 1
11、 R a n d o mi z e d p h a s e I I I s t u d y o f e i s p l a t i n p l us i r i n o t e c a n v e r s u s c a r b o p l a t i n p l u s p a c l i t a xe l ，c i s p l a t i n pl u s g e mc it a b i n e，a n d c i s p l a t i n p l u s v i no r e l b i ne f o r a d v a n c e d n o n s ma l l c e l l l
12、 un g c a n c e r ：F ou r Ar m Co o p e r a t i v e S t u d y i n J a p a n E J An n On c o l ， 2 0 0 7 ， 1 8( 2 ) ： 3 1 7 3 2 3 2L o b o d a A，J o z k o w i c z A，D u l a k J HI F - 1 a n d HI F 2 t r a n s c r i p t i o n f a c t o r s s i mi l a r b u t n o t i d e n t i c a l J Mo l C e l l s ，
13、2 0 1 0， 2 9( 5 )： 4 3 5 4 4 2 3 袁凯 ， 钱成缺氧 诱导 因子一 1 a和缺氧诱 导因子一 2 a在人非小 细胞肺癌表达的 比较 J 中华实 验外科 杂志 ， 2 0 1 0 ， 2 7 ( 5 ) ： 6 1 4 61 6 4 袁凯 ， 郑 如恒HI F 一 2 a与人非小细胞肺癌增殖及预后 的关 系 E J 中国临床医学 ， 2 0 0 9， 1 6 ( 2 ) ： 1 9 4 1 9 7 5 Wu XH， Qi a n c，Y u a n KC o r r e l a t i o n s o f h y p o x i a i n d u c i b l
14、 e f a c t o r 1 a l p h a h y p o x i a in d u c i b l e f a c t o r 2 a l p h a e x p r e s s i o n wi t h a n g i o g e n e s i s f a c t o r s e xp r e s s i o n a n d p r o g n o s i s i n no n s ma l l c e l l l u n g c a n c e r E J C h i nMe d J( E n g 1 ) ， 2 0 1 1 ， 1 2 4 ( 1 ) ： 1 1 - 1 8
15、 6 袁凯 ， 王勇 ， 童继 春， 等RNAi 干扰 HI F 2 a基因对人肺腺癌 A 5 4 9细胞株侵 袭转 移 的影 响 J 中国临 床 医学 ， 2 0 1 2 ， 1 9 ( 6) ： 5 9 8 6 0 1 7 E l b a s h i r S M，Ha r b o r t h J ，We b e r K，e t a 1 An a l y s i s o f g e n e f u nc t i o n i n s o ma t i c ma m ma l i a n c e l l s u s i n g s ma l l i n t e r f e r i n g RNAs J Me t h o d s ， 2 0 0 2 ， 2 6 ( 2 ) ： 1 9 9 2 1 3 8 S h a n n o n AM，B o u c h i e r Ha y e s DJ ，Co n d r o n CM ，e t a 1 Tu m o u r h y p o x i a ， c h
