《14-3-3σ基因影响人低分化鼻咽癌细胞CNE-2的信号通路》由会员分享，可在线阅读，更多相关《14-3-3σ基因影响人低分化鼻咽癌细胞CNE-2的信号通路（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分子诊断与治疗杂志2 0 1 4年 1 月第 6卷第 1 期J Mo l Di a g n T h e r ,J a n u a r y 2 0 1 4 ， V o 1 6 No 1 1 4 3 3 E r 基因影响人低分化鼻咽癌细胞 C N E 2的信 号通路 邓绮文 0 丁宇 唐开宇 谭文城 苏箔金 郭禹标 杨惠玲 【 摘 要 】 目的 探讨 1 4 3 3 对鼻咽癌 C N E 2 细胞的信号通路的影响。 方法通过反相蛋白 质阵列检测 1 4 3 3盯转染鼻咽癌 C NE 2细胞前后特定蛋白质表达量的变化。 结果1 0种蛋白的表达 量在 1 4 3 3盯转染 C NE 一 2细胞的前后发
2、生了大于 1 5 的变化，分别是 Ak t 与 p A k t ( $ 4 7 3) ， mT O R与 p m T O R ， E R K 2 ， P p 3 8 ， p S T A T 3( Y 7 0 5 )与 p S T A T 3( $ 7 2 7 )及 R b与p R b 。 结论l 4 3 3 在鼻咽癌 C N E 2 细胞中所起的作用可涉及 4 条信号通路， 分别是 A k t 通路、M A P K通路 、 J A K - S T A T通路及 R b E 2 f 通路。 【 关键词 】 鼻咽癌 ； 1 4 3 3 IJ “ ； 反相蛋白质阵列； 信号通路 l mp a c t
3、 o f 1 4 3 3 o o n s i g n al i n g p a t h wa y 0 f CNE 2 c e l I D E N G Qi we n 1 ， DI N G Y lu ， T A NG K a i y u ， T A N We n c h e n g ， S U B o j i n ， GU 0 Y _u b i a o ， Y A NG H u i l i n g ( 1 D e p a r t me n t o f P a t h o p h y s i o l o g y , Z h o n g s h a n Me d i c a l C o l l e
4、g e ， S u n Y t - S e n U n i v e r s i t y , G u a n g d o n g ， G u ang z h o u 5 1 0 0 8 0 ，Ch i n a ；2 Cl i n i c a l M e d i c i n e ，Zh o n g s h a n M e d i c a l Co l l e g e ，S u n Ye t Se n Uni v e r s i t y , Gu a n g d o n g Gu a n g z h o u 5 1 0 0 8 0 C h i n a ；3 De p a me n t o f I n
5、 t e r n a l Me d i c i n e T h e F i r s t Affil i a t e d Ho s p i t a 1 o f S u n Ye t S e n U n i v e r s i t y , G u a n g d o n g ， Gu ang z h o u 5 1 0 0 8 0 ， C h i n a ) 【 AB S T R AC T 】 Ob j e c t i v e T h e a i m o f t h e r e s e a r c h i s t o c l a r i f y t h e i mp a c t o f 1 4 3
6、 - 3 o n s i g n a l i n g p a t h wa y o f C NE - 2 c e l 1 Me t h o d s Re v e r s e p h a s e p r o t e i n a r r a y( R P P A ) i s u s e d t o d e t e c t t h e c h a n g e s o f s p e c i fi c p r o t e i n a f t e r 1 4 - 3 3盯 t r a n s f e c t e d i n t o CNE 一 2 c e l 1 Re s u lt s T e n k
7、i n d s o f p r o t e i n s a r e f o un d t o h a v e s i g n i fi c a n t c h a n g e s e x c e e d i n g 1 5 ， i n c l u d i n g Ak t ， p Ak t ( $ 4 7 3 ) ， mT O R， p mT O R ， E R K 2 ， p - p 3 8 ， p S T A T 3( Y 7 0 5 ) ， p S T A T 3 ( $ 7 2 7 ) ， R b a n d p - R b Co n c l u s i o n F o u r s i
8、 gna l i n g p h wa y m a y b e i n v o l v e d i n t h e e ff e c t o f 1 4 - 3 - 3 盯o n C NE 一 2 c e l l ，i n c l u d i n g Ak t s i gn a l i n g p a t h wa y ,MAP K s i g n a l i n g p a t h wa y ,J AK- S T AT s i g n a l i n g p a t h wa y a n d Rb E 2 f s i g n a l i n g p a t h wa y 【 K E Y WO
9、R DS 】 Na s o p h a r y n g e a l c a r c i n o ma ； 1 4 3 - 3 盯； R P P A； S i gna l i n g p a t h wa y 鼻咽癌又称 “ 广东癌” ， 目 前根治性治疗手段为放 射治疗或以放疗为主的综合治疗。然而， 由于放射治 疗 的并发症较多， 且易发生局部复发 和远处转移 ， 人 们试图寻找更有效、 更具针对性的治疗方法以弥补放 疗的不足之处。靶向基因治疗是指将目的基因导人 论著 特定的组织并使其表达， 进而通过一系列信号通路抑 制细胞的增殖和促进细胞的凋亡， 从而高效杀伤肿瘤 细胞。这一方向在鼻咽癌的研
10、究中越来越受到人们 的关注和重视 。 1 4 3 3 盯是 1 4 3 3家族成员之一 ， 具有调控细胞 基金项目： 2 0 1 0年国家自然科学基金项目 ( 8 1 0 7 1 8 3 7) ； 2 0 0 9年国家大学生创新性实验项目 ( 0 9 1 0 5 5 8 5 9) ； 2 0 1 0年国家大学生创新性实验项 目( 0 1 0 5 5 8 3 0) ； 2 0 1 0年广东省大学生创新实验项 目( 1 0 5 5 8 1 0 1 0 4 ； 1 0 5 5 8 1 0 1 0 8 ) ； 中山大学中山医学院学生科研训练专项基金 作者单位： 1 中山医学院病理生理教研室， 广东，
11、广州5 1 0 0 8 0 2 中山医学院临床 医学 ( 八年制 ) ， 广东， 广州 5 1 0 0 8 0 3 中山大学附属第一医院内科， 广东， 广州 5 1 0 0 8 0 通讯作者： 郭禹标， 杨惠玲， E ma i l ：y a n g h l ma i l s y s u e d u c a 注 ： 郭 禹标 ， 杨惠玲 为共 同通讯作者 分子诊断与治疗杂志2 0 1 4年 1月 第 6 卷第 1 期J Mo l Di a g n T h e J a n u a r y 2 0 1 4 ， V o 1 6 N o 1 l 1 周期 、 信号转导 、 细胞增殖分化与凋亡等 多种重要
12、 的 生理功能。越来越多研究 显示其在鼻咽癌、 食管 癌、 宫颈癌、 口腔鳞状细胞癌等多种肿瘤细胞中表达 量明显下降， 提示其与肿瘤的发生与发展密切相关。 本实验室 已证 明 1 4 3 3 盯可抑制鼻咽癌细胞生长及 促进其凋亡 _8 ， 然而， 关于 1 4 3 3 盯抑制鼻咽癌细胞 生长的机制尚缺乏全面深人的研究。本研究通过反 相蛋 白质阵列( R e v e r s e p h a s e p r o t e i n a r r a y ， I P A) 测 定 l 4 3 3 盯转染鼻咽癌 C N E 一 2细胞前后蛋白表达量 的变化， 探讨其在抑制鼻咽癌生长的信号通路中所起 的作用。
13、 1 材料和方法 1 1 材料 鼻 咽癌低分化鳞癌 C NE 一 2细胞株 由中山大学肿 瘤防治中心鼻咽癌病区提供。用于 R P P A的蛋白芯 片由L u Y il i n g 制备。腺病毒 1 4 3 3 仃重组体由美国 MD A n d e r s o n 癌症中心合作单位提供。选用的蛋白 抗体均针对细胞生长与凋亡的信号转导通路上的蛋 白， 其中3 种抗体( E R K 2 、 G S K 3 、 J N K) 由S a n t a C r u z 公司提供； 2 3 种抗体 由C e l l S i g n a l in g 公司提供， 分 别是 A k t 、 A k t( P S
14、e r 4 7 3) 、 Ak t ( P T h r 3 0 8 ) 、 mT OR、 mT OR ( P S e r 2 4 4 8) 、 HE R2( P - T y r 1 2 4 8) 、 HE R2 E r b B2 、 J NK ( P T h r l 8 3 T y r 1 8 5) 、 MAP K ( P - p 4 0 4 2) 、 GS K3 a b( P S e t 2 1 9) 、 p 3 8 、 p 3 8( P T h r 1 8 0 T r r 1 8 2) 、 S T A T 3 、 p S T A T 3( P T y r 7 0 5) 、 p S T A
15、T 3( P S e r 7 2 7) 、 R b及p R b( P - S e r 8 0 7 8 1 1 ) 、 p 7 O S 6 K、 c my c 、 p S 6 ( $ 2 3 5) 、 p S 6( $ 2 4 0) 、 p MEK1 2 、 p 2 7 。 1 2 方法 1 _ 2 _ 1 细胞分组 C N E 一 2 细胞分为两个组 ： 腺病毒 1 4 3 3 盯重组 体 转染 的 C NE 2细胞 ( 实验 组 ) 和未转 染 的 C NE 一 2 细胞( 对照组 ) 。 1 _ 2 _ 2 细胞培养 将 C N E 2 细胞按 1 1 0 。 个细胞 皿分别接种于 直径为 1 0 c m的培养皿中， 每组细胞各 5 皿， 共 1 0 皿。 各皿中加入 1 0 m L含 1 0 小牛血清的 1 6 4 0 培养液， 培养 1 2 h 。 1 - 2 _3 腺病毒转染 1 4 3 3 盯重组
