《慢性心衰患者Th1与Th2型细胞及Treg细胞的表达 (论文)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《慢性心衰患者Th1与Th2型细胞及Treg细胞的表达 (论文)（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、西部 医学 2 0 1 4年 3月 第 2 6卷第 3期 Me d J We s t C h i n a ， Ma r c h 2 0 1 4 ， Vo 1 2 6 ( 3 4 7 慢 性心衰患者 T h l与 T h 2型细胞及 T r e g细胞 的表达 焦海春 ，张俊威 ， 崔彦芬。 ( 北京市丰台区南苑医院1 心 内科 ， 2 妇产科 ， 北京 1 0 0 0 7 6 ) 【 摘要】 目的 探讨 T h l 、 T h 2型细胞及 T r e g细胞在慢 性心 衰发 病 中的作用机制 。方 法 采 用 R T - P C R技 术检 测 6 2例慢性心 衰患者和 4 2例正常人外周血单
2、个核细胞 中 T b e t 、 G AT A一 3 及 F o x p 3 mR NA 的表达水平 ； E L I S A 法检测 血 浆 中 T h l T h 2型细胞 因子 I F N 一 7 I L - 4水平 。结果 慢 性 心衰 患者 T - b e t 表 达 水平 高 于正 常对 照组 ， G ATA 一 3及 F o x p 3 表 达水平低于正常对照组(均 P o 0 5 ) ， 具有 可 比性 。 1 2 主要试 剂和仪器 R NA 提取试剂 Tr i z o l Re a g e n t (I n v i t r o g e n公 司 ) ， 逆 转 录 试 剂 盒
3、(美 国 P r o me g a司 ) ， F QP C R试 剂 盒 购 自美 国 Gi b c o B RL， AB I 7 3 0 0 Re a l T i me P C R S y s t e m (美 国 AB 1公 司 ) ， E L I S A检测试剂盒购 自美国 R&D s y s t e ms公司。 1 3 P C R 引 物 目的基 因 T - b e t上游 ：5 f _ GT TC C - C ATT C C TGT C AT TT AC T 一 3 ， 下 游 ：5 一 TA GGAO - AG GAGAG TAGT GAT C T 一 3 ， 扩 增 产 物 片
4、段 长 度 5 8 0 b p ； 目的基 因 G A T A _ 3 ， 上 游 ：5 一 C AGG GAG TG TGTGAACTGT 一 3 ， 下 游 ：5 一TTTTTGCACTTT T TGG ATTT GC一 3 扩增 产物 片段长度 3 5 l b p ； 目的基 因 F o x p 3 ， 上 游 ：5 C TC C AGAG AG AGAT GG TAC - AG 一 3 ，下 游 ： 5 ， _ C AGT GG TAGAT C T C AT TG A GT G一 3 ， 扩 增 产 物 片 段 长 度 3 9 8 b p 。内 参 基 因： GAP DH( 甘 油 醛
5、一 3 一 磷 酸 脱 氢 酶 g 1 y c e r a 1 d e h y d e s 一 3 一 d e h y d r o g e n a s e ) ， 上 游弓 I 物 5 一 C C GAGG GC C C AC T A AAGG 一 3 ， 下 游 引 物 5 一 GC T GT TG AAGT C AC A G GAGAC AA 一 3 ， 扩增产物片段长度 2 2 6 b p 。 1 4 检测方法 实验组与对照组均抽取外周静脉血 6 ml ， E DT A 抗 凝 后 分 离 P B MC， 提 取 总 mR NA， 一8 O 低温 冻存 备用 ， 用于 T b e t 、
6、 G ATA 一 3和 F o x P 3 的测定 。c D NA 合成 按 照试 剂 盒说 明书 操作 ， 逆转 录 反 应 条件 ： 4 2 5 0 mi n ， 9 5 5 mi n 。RT _ P C R 检测 由 AB I 7 3 0 0 R e a l - Ti me P C R S y s t e m 完 成 ； 反 应 条 件 ： 9 6 4 mi n ， 然 后 三 步 反 应 ：9 4 3 0 s ， 5 8 3 0 s ， 5 5 3 0 s ， 共 4 0个循 环， 于每个循环 的第三步 即 5 5 3 0 s 收集荧光信号 ， 得到 C t 值。由软件得 出 RQ值，
7、 即是 所检测 目的基 因的相对表达量 。 1 5 血浆 I F N一 丫和 I L 一 4的检测 血浆 1 F N 一 丫和 I L 一 4的测定 ， 采用 EUS A 双抗夹心法 ， 操作按试剂盒说 明进 行 。 1 6 统计学处理采用 S P S S 1 3 0统计软件进行分 析 ， 结果用 s 表示 ， 两组间 RQ值 比较用 t 检验， 检 验 水 准 ： 口 一0 0 5 。 2结果 2 1 T b e t 、 G AT A3及 F o x p 3 mR NA 表 达 见 表 1 。 表 1 显 示 ， 慢性 心衰 患者 T b e t mR NA 表 达水 平 高 于 对照组 ，
8、 GAT A一 3表达水平及 F o x p 3 mRNA 表达水 平均低于正常对照组， 差异均有统计学意义 ( 均 P 0 0 5 ) 。 表 1 慢性 心衰 患者和 正常对 照组 外周 血中 T - b e t 、 G AT A3及 F o x p 3 mR NA的表达( i 士s ) Ta b l e 1 Th e e x pr e s s i o n o f T - b e t ，GATA一 3 a n d F o x p 3 mRNA i n PB M C f r o m p a t i e n t s wi t h CHF a n d c o n t r o l s 2 2 血浆
9、I F N一 7和 I L 一 4表达 水平见表 2 。表 2显 示 ， 慢性心衰组血浆 中 I F N 一 7水平及 I F N 一 丫 I L 一 4高 于对 照组 ( 均 P0 0 1 ) 。 表 2 慢性心衰患者和正常对照组血浆 I Y和 I L 4的表达水平( ； 士 ) Ta b 1 Th e l e v e l o f I FN Y a n d I L一 4 i n p a t ie n t s wi t h CHF a n d c o n t r o l s 3讨 论 心力衰竭 是大 多数 心血 管 疾 病 的最 终 归 宿 ， 其 发 病机制 尚未完全 阐明， 神经体液机制、
10、 氧化应激和心 肌细胞凋亡等参与了其发病 。大量的基 础和临床研 究 的数据表 明 ， 与慢 性 心 衰 同时激 活 的免 疫 和炎 症 介 质在心 衰 的发 病 、 发生 及 进 展 过 程 中起 着 重 要 作 用l_ 2 。T h l 、 Th 2型细胞是 C D4 4 - T 辅助细胞 的两个 亚群 。Th l 细胞 主要分 泌细胞 因子 I L - 2 、 I F N一 7等 ， 具 有免 疫杀 伤作用 。Th 2细胞 主要 分 泌 细胞 因子 I L 一 4 、 I L 一 5 、 I L 一 6 、 I L 一 9 、 I L 一 1 0 及 I L l 8 ， 具 有 免 疫
11、抑 制 作 用 3 。正 常情 况 下 ， Th l T h 2细 胞 因 子 相 互 介 导 ， 相 互 抑制 ， 处 于平 衡 状 态 ， 当两 者 之 间 的 比例 失 衡 时 往 往 会引起 多种 疾病 的发 生 。T h l 及 其分 泌 的细胞 因子 代表促炎作用 ， T h 2及其分泌 的细胞 因子代表抑炎作 用 。Tr e g细胞是 维持机体 免疫平 衡功 能 的 T 细 胞 ， 它在体 内外通过抗原非特异性或特异性扩增 ， 下 调效应性免疫细胞的功能并削弱其增殖能力 ， 来抑制 或控制机体免疫应答 的程度_ 5 。转录因子 T b e t正调 控 T h l细胞 的发育 ，
12、GAT A一 3正调控 T h 2细胞 的发 育 ， 二 者 最 终 决 定 Th o 向 Th l Th 2 的 转 化 6 。 F o x p 3特异的高表达于调节性 T细胞 ， 并且介导 Tr e g 细胞在胸腺 的发育 、 外周的表达及功能 的维持 ， 可反 映 Tr e g细胞的活性水平 。 T b e t mR NA 表达水平高于正常对照组 ， 而 GA T A一 3 tuR NA低于正常对照组 ， 慢性心衰患者 T b e t 西部 医学 2 0 1 4年 3月 第 2 6 卷 第 3 期 Me d J We s t C h i n a ， Ma r c h 2 0 1 4 ，
13、V o 1 2 6 ， No 3 GAT A一 3高 于正 常对 照组 ， T b e t GAT A一 3的失衡 提 示慢性心衰患者外周血 Th l细胞亚群 占优势 。慢性 心衰患者 ， T h l细胞分泌的 I F N - 7明显升高 ， 而 Th 2 细胞分泌的 I L 一 4明显下降， 也提示慢性心衰患者外周 血 Th l细胞亚群 占优势。Tr e g细胞具有维持 自身免 疫耐受和调节免疫应答 的功能。Yn d e s t a d等 7 对 慢 性 心力 衰 竭患 者 作 了 T细 胞 免 疫 表 型 和 细 胞 因 子 的 检 测 ， 发 现心 力 衰 竭患 者 T 细胞 的 C D
14、 2 5表 型显 著增 加 ， 推 钡 0 T 细 胞 的 激 活 可 能 作 为 炎 性 反 应 的 独 立 因 素 。本研 究 中慢性 心 衰 患者 F o x p 3 mR NA 表达 水 平 降低 ， Tr e g细胞功能失常， 减弱了机体对效应性 C D 4 + T细胞 的抑制作用 ， 使 Th l细胞介导细胞免疫反 应相对增强。Tr e g细胞的功能异常可能参与 了慢性 心衰 的 发病 机制 。 4 结论 慢 性心 衰患 者 T b e t G AT A一 3及 I F N v I L 一 4升 高 ， F o x p 3降低 ， 提示 T h l细胞亚群表达升高， Th 2型 细
15、胞及 C D 4 +、 C D 2 5 +调节性 T细胞减少， 细胞免疫 异常可能参与慢性心衰的发病机制 。 【 参 考 文 献】 ( 上接 I- 3“ E 4 3 5 3 6 E 7 3 1 2 1 3 3 4 5 6 7 34 9 W r i g l e y B e n j a mi n ， L i p Gr e g o r y YH ， S h a n t s i l a Ed u a r d Th e r o l e o f mo n o c y t e s a n d i n f l a mma t i o n i n t h e p a t h op h y s i o i o g y o f he a r t f a i l u r e J E u r o p e a n o u r n a i o f He a r t F a i l u r e ，2 0 1 1 ， 1 3 ( 1 1 ) ： 1 1 6 1 1 1 7 1 T o r r e - Ami o n e GI mmu n e a c t i
