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1、第 4 4卷 V( ) L 44 第 1 期 No 1 淡水渔业 F r e s h wa t e r F i s h e r i e s 2 01 4 l 1月 J a il 2 01 4 瓯江彩鲤 早期发 育 中两种脂酶活性及 间 甲酚对其 活性的影响 朱 俊华， 姚 俊杰， 冯亚 楠， 邹芳 芳， 莫巨 鼎 ( 贵州大学动物科 学学院水产科 学系，贵阳5 5 0 0 2 5 ) 摘要：采用生化和静态急性毒性实验方法，研究了瓯江彩鲤( C y p r i n u s c a r p i o v a r c o l o r ) 早期发育过程中脂蛋t q 脂 酶和肝脂酶活性变化及问甲酚对它们活
2、性的影响。结果 示，脂酶在瓯汀彩鲤成熟卵和受精印- I 1 均有活性 ，脂 蛋f L I 脂酶和肝脂酶的活性在胚胎发育过程中总体上呈上升趋势，原肠胚期酶活性最高；在水温( 2 0 2 )o C条什 卜，经 7 m g L 、1 3 ra g I 和 1 9 mg L的问甲酚暴露 ，脂酶活性随着问甲酚的浓度升高先升高后_ 卜 降，1 9 ra g 1 浓 度组中肝脂酶活性在胚胎期与其他组均有显著差异( P0 0 5为差异不显著。 2 结果 2 1 成熟卵细胞和受精卵两种脂酶活性的变化 瓯江彩鲤的成熟卵细胞和受精卵的脂酶活性见 表 1 。成熟卵细胞中脂蛋白脂酶的活性为( 0 3 5 6 0 0 4
3、 3 ) U mg p r o t ，与受精卵 中脂蛋 白脂酶 的活性 ( 0 3 5 80 0 3 3) U m g p r o t 基 本相 当，差异 不显 著；成熟 卵 细胞 中肝 脂 酶 的活性 为 ( 0 3 3 2 0 0 2 4 ) U mg p r o t ，受精卵肝脂 酶 的活性为 ( 0 4 0 1 表 1 瓯江彩鲤成熟卵和受精卵脂酶活性 的变化 Tab 1 Va r i at i on i n t he a c t i v i t i e s o f LPL a nd HL b e t we e n s t a g e o f ma t u r e e g g a n d
4、 f e r t i l i z e d e g g o f C c a r p i o v a r c o l o r U mg p r o t 注 ：同行不同字母表示有显著差异 ( P 0 0 5 )。下图同。 2 2 胚胎发育过程中脂蛋白脂酶活性变化 瓯江彩鲤胚胎发育过程中脂蛋 白脂酶活性变化 见 图 1 。胚胎发 育至卵裂 期 ，脂蛋 白脂 酶活性 为 ( 0 4 0 2 0 0 1 2 )U m g p r o t ；当发 育至 原肠 胚期 ， 酶活 性 达 到 最 大 值 ，为 ( 0 5 2 40 0 4 4) U m g p r o t ，在神经胚期达到最小值 ，为 ( 0 3
5、 2 9 0 0 3 3 ) U m g p r o t ，与其他发育各时期相比，这两个时期 酶活性 都 差 异显 著 ；发 育至 尾 芽 期酶 活 性 降至 ( 0 4 1 10 0 4 1 )U m g p r o t ，出膜期 为 ( 0 4 3 9 0 0 3 6 )U m g p r o t ，两者差异不显著。 在间甲酚胁迫下 ，瓯江彩鲤胚胎发育过程中脂 蛋 白脂酶活性变化见图 1 。在发育各时期 ，对 照组 与空白组差异不显著，空白组与实验 I 组有显著差 异。实验 组和 组与空白组在卵裂期和原肠胚期 有显著差异，在其他发育时期差异不显著。空白组 肝脂酶活性在原肠胚期最高 ，与其他
6、时期均有显著 差异 。实验 I组中脂蛋 白脂酶活性随着发育时间的 延长先升高后下降。在尾芽期肝脂酶的活性达到最 大值，为( 0 5 6 3 0 0 2 3 ) U m g p r o t ，与其他时期 均有显著差异。实验 组和组脂蛋白脂酶活性随 着发育时间的延长整体上是升高的。 m V 发育时期 口空 白组 -实验 J 组 -实验 I I 组 -实验珊组 _对照组 图1 瓯江彩鲤胚胎发育时期脂蛋白脂酶活性的变化 F i g 1 C h a n g e s o f L P L a c t i v i t y i n d i f f e r e n t e mb r y o n i c d e v
7、 e l o p me n t s t a g e s o f C c a r p i o v a r c o l o r 2 3 胚胎发育过程中肝脂酶活性变化 瓯江彩鲤胚胎发育过程 中肝脂酶活性变化见图 2 。肝脂酶活性随着胚胎发育时 间的延长先升高后 下降，胚 胎发育至 卵裂期 ，肝脂酶活性 为 ( 0 6 4 9 7 6 5 4 3 2 l 0 0 1 0 J A ， l l 一 、 掣螺瀣婴皿啦翟 淡水渔业 2 0 1 4矩 0 0 3 4 )U m g p r o t ；当发育至原肠胚期 ，酶活性 达到最大值 ，为( 0 9 0 6 0 0 2 3 )U ra g p r o t ，
8、与其 他各发育时期相 比有显著差异 ，肝脂酶在尾芽期 和 出膜期活性都有所降低 ，两者差异不显著。 经不 同质量浓度间 甲酚胁迫 ，瓯江彩鲤胚胎发 育过程中肝脂酶活性变化见 图 2 。在发育各时期 ， 对照组与空 白组差异不显著 ，实验组 中肝脂酶活 性与其他组均有显著差异 ，肝脂酶活性随着暴露浓 度 的升高而下降。实验 I 组在原肠胚期肝脂酶活性 最大 ，为( 1 0 6 0 0 3 2 ) U m g p r o t ，且与其他发育 时期有显著差异。实验组在神经胚期肝脂酶活性 最小 ，为( 0 2 5 3 0 0 5 6 ) U rag p r o t ，且与其他发 育时期有显著差异。 三
9、 6 a空 白组 -实验 l 组 - 安验 组 - 实验 I 组 口 对照缎 2 4 胚后发育过程中的脂蛋白脂酶活性变化 瓯江彩鲤胚后发育过程中脂蛋 白脂酶活性变化 见图 3 ，随着发育的进行 ，脂蛋 白脂酶活性总体 上 是下降的，在 内源营养期 活性 为 ( 0 6 6 80 0 2 4) U rag p r o t，显著高于其他两个时期 ；混合营养期 酶活性为 ( 0 3 1 70 0 3 2 ) U n a g p r o t ，外 源营养期 酶活性为( 0 3 3 50 0 4 3 ) U ra g p r o t ，两者差 异不 显著。 在不同浓度间甲酚胁迫下 ，瓯江彩鲤胚后发育 过
10、程中脂 蛋 白脂酶 活性变化 见图 3 。在发育 各时 期 ，对照组与空 白组差异不显著 ，三个浓度组中脂 蛋白脂酶活性与空 白组均有显著差异。实验 I 组和 实验 组中脂蛋 白脂酶活性随着发育时间的延长先 0 8 0 0 , 6 ： 萋 篓 。 姗 I】( X 发育时期 空白缎 雾验 l 组 实验I I 组 实验 u I 组 对照缀 图 3 瓯 江彩鲤胚后发 育时期脂蛋 白脂酶活性 的变化 F i g 3 C h a n g e s o f L P L a c t i v i t y i n d i f f e r e n t p o s t e mb r y o n i c d e v e
11、 l o p me n t s t a g e s o f C c a r p i o v a r c o l o r 升高后下降，实验 I 组中脂蛋白脂酶活性在混合营 养期均显著高于其他组。 2 5 胚后发育过程中的肝脂酶活性变化 瓯江彩鲤胚后发育过程 中肝脂酶活性变化见图 4 ，随着发育 的进行 ，肝脂酶活性是升高的，在内 源营养期活性为( 0 4 5 0 0 4 1 ) U m g p r o t ，显著低 于其他两个 时期 ；混合 营养期 酶活性为 ( 0 5 9 5 0 0 2 6 ) U mg p r o t ，外源营养期酶 活性 为( 0 6 0 2 0 0 3 9 ) U ra
12、g p r o t ，两者差异不显著 。 经不同质量浓度间甲酚胁迫 ，瓯江彩鲤胚后发 育过程 中肝脂 酶活性变化见 图 4 。在发育各时期 ， 对照组与空 白组差异不显著 ，肝脂酶活性随着间甲 酚的浓度升高先升高后下降 ，在实验 I 组 中，肝脂 酶活性在三个发育时期均显著高于其他组 ；空 白组 中肝脂酶活性均高于实验 组和实验组 ，且在混 合营养期有显著差异 。实验 I 组和实验 组中肝脂 酶活性随着发育时间的延长而升高，外源营养期的 肝脂酶活性显著高于其他两个时期 。 发育时期 图4 瓯 江彩鲤胚后发 育时期肝 脂酶 活性 的变化 F i g 4 C h a n g e s o f HL
13、a c t i v i t y i n d i f f e r e n t p o s t e mb r y o n i c d e v e l o p me n t s t a g e s o f C c a r p i o v a r c o l o r 3 讨论 3 1 瓯江彩鲤在早期发育过程 中两种脂酶活性变 化特点 胚胎发育过程中脂类的利用明显地分为两个 阶 段 ，在胚胎发育 的早期 ，脂类的利用相对较少 ，而 胚胎发 育 的晚期 ，卵黄 中的脂类 被代 谢 消耗 。 本试验结果表明，瓯江彩鲤的成熟卵细胞已经有脂 酶活力的存在 ，表明瓯江彩鲤的卵母细胞 中已经具 备了脂蛋白脂酶和肝脂
14、酶的m R N A，为早期胚胎发 育卵内脂类物质的分解提供了保障，且由这些 m R N A转录的脂蛋白脂酶和肝脂酶在发育早期仍然保 持着较高的水平。 本试验中，脂蛋 白脂酶和肝脂酶的活性在胚胎 发育过程中总体上呈上升的趋势。脂蛋白脂酶活性 在原肠胚期达到最大值，这说明原肠期合成了脂蛋 第 1 期 朱俊华等：瓯江彩鲤早期发育中两种脂酶活性及间甲酚对其活性的影响 3 5 白脂酶，胚胎内酶基因表达能力开始逐渐增强，合 成水解酶 ，为胚胎发育提供了保证。因此 ，原肠期 是由母型调控向合子型调控转变的关键时期，开始 合成 自身的 mR N A 。瓯江彩鲤胚胎发育中脂蛋 白 脂酶 的活性随着发育 时间的延
15、 长处于 “ 上升 一下 降 一 上升 一下降”波动过程，脂蛋白脂酶的活性 在 内源营养期达到较高的水平 ，这可能与仔鱼体内 各大器官形成加快 ，新陈代谢旺盛 ，能量消耗最大 有关。出膜后瓯江彩鲤仔鱼脂蛋白脂酶活性随着发 育时间的延长先降低随后升高，这与孵出后的仔鱼 一直处于饥饿状态 ，下调脂蛋白脂酶 m R N A，发育 至外源营养期 ，由于外源营养的加入 ，从而诱导脂 蛋白脂酶 mR N A，使脂蛋 白脂酶活性增加 。 瓯江彩鲤从受精卵到原肠期肝脂酶活性变化较 大，是由于受精卵到原肠期是胚胎细胞分裂和原基 器官形成的重要时期 ，脂类可能主要用于构建生物 膜等结构物质 ，而非为胚胎发育提供能量。从原肠 胚期开始，直至孵化出仔鱼，肝脂酶活性持续显著 增加 ，这可能是因为伴随胚胎发育 ，组织形成和器 官分化需要较多的脂类提供能量 ，需要较多的肝脂 酶参与代谢调控 ，以满足胚胎发育和出膜 的生理需 求_ 9 。瓯江彩鲤发育 至 68日龄仔鱼 (
