《细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用（30页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、细胞荧光染色观察与荧细胞荧光染色观察与荧 光显微镜的使用光显微镜的使用（示范：细胞形态观察与暗视野显微镜的使用）（示范：细胞形态观察与暗视野显微镜的使用）实验目的与教学要求实验目的与教学要求1.掌握荧光显微镜的成像基本原理及掌握荧光显微镜的成像基本原理及 其使用；其使用；2.掌握暗视野显微镜的成像基本原理掌握暗视野显微镜的成像基本原理 及其使用。及其使用。生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其 基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激基本原理是利
2、用一定波长的激发光对样品进行激 发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品 结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。一、荧光显微镜的成像原理一、荧光显微镜的成像原理生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 什么是荧光什么是荧光 ? ?物质中的电子吸收光的能量由低能状态物质中的电子吸收光的能量由低能状态 转变为高能状态，再回到低能状态时释转变为高能状态，再回到低能状态时释 放出的光。放出的光。?即：物质吸收短波光，发射出的长波光。即：物质吸收短波光，发
3、射出的长波光。生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 ?保持固有的荧光特性保持固有的荧光特性?荧光波长激发波长荧光波长激发波长?荧光强度极小于激发光的强度荧光强度极小于激发光的强度?有不同程度的衰减有不同程度的衰减?荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率荧光的性质荧光的性质生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 优点：优点：?检出能力高检出能力高?对细胞的刺激小对细胞的刺激小?能进行多重染色能进行多重染色 用途用途：?
4、物体构造的观察物体构造的观察?荧光的有无、色调比较进行物质判别荧光的有无、色调比较进行物质判别?发荧光量的测定对物质定性、定量分析发荧光量的测定对物质定性、定量分析荧光显微镜的优点和用途荧光显微镜的优点和用途生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 荧光荧光素素激发波长激发波长发射波长发射波长 DAPI372372456456 AMCA350350450450 Hoechst 33258365365465465 FITC4904905
5、20520 Acridine Orange490490590590 Acridine Yellow470470550550 CY3552552565565 TRITC541541572572 Propidium Iodide530530615615荧光荧光素素的特性的特性荧光荧光素素的特性的特性生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 1. 对细胞结构或组分的定性、定位、半对细胞结构或组分的定性、定位、半 定量研究。定量研究。2. 作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。荧光显微镜技术在生命科学研究中的应用
6、荧光显微镜技术在生命科学研究中的应用生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 二、暗视野显微镜的成像原理二、暗视野显微镜的成像原理通过特殊的暗视野聚光器，使照明光线改通过特殊的暗视野聚光器，使照明光线改 变途径，不直接进入物镜，而是倾斜地照变途径，不直接进入物镜，而是倾斜地照 射到样品上，由样品表面的绕射光线入射射到样品上，由样品表面的绕射光线入射 到物镜内，产生样品的衍射图象。到物镜内，产生样品的衍射图象。生物秀-专心做生物 生物秀
7、论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 三、试剂与器材三、试剂与器材青蛙、洋葱、人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片青蛙、洋葱、人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片 （HE染色）染色）甲醇、甲醇、1 丫啶橙、滤纸、吸管、载玻片丫啶橙、滤纸、吸管、载玻片荧光显微镜、暗视野显微镜、普通光学显微镜荧光显微镜、暗视野显微镜、普通光学显微镜生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 四四、实验、实验内容和内容和实验实验步骤步骤1. 蛙血细胞染色观察：取少许蛙血 常规血涂片 凉干 蛙血细胞染色观察：取少许蛙血 常规血涂片
8、 凉干 甲醇固定甲醇固定10 min 1 丫啶橙染色丫啶橙染色5 min 水洗 室温 水洗 室温 干燥（滤纸擦干玻片底面） 荧光显微镜观察（先低倍后干燥（滤纸擦干玻片底面） 荧光显微镜观察（先低倍后 高倍观察） （可在同一玻片上观察未荧光染色的血细胞）高倍观察） （可在同一玻片上观察未荧光染色的血细胞）2. 取洋葱撕取一小片内表皮平面单层铺展于玻片上室温取洋葱撕取一小片内表皮平面单层铺展于玻片上室温 凉干凉干1丫啶橙染色丫啶橙染色5min 水洗（用吸管，小心掉片）水洗（用吸管，小心掉片） 室温干燥（或用滤纸擦干） 荧光显微镜观察室温干燥（或用滤纸擦干） 荧光显微镜观察3. 暗视野显微镜观察蛙血
9、细胞（示范）暗视野显微镜观察蛙血细胞（示范）4. 观察人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片（观察人正常肝组织切片和脂肪肝组织切片（HE染色）染色）生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 1. 荧光显微镜要在光线尽量暗的环境下观荧光显微镜要在光线尽量暗的环境下观 察。察。 2. 使用荧光显微镜时要注意不要直接观察使用荧光显微镜时要注意不要直接观察 激发光源，保护眼睛。激发光源，保护眼睛。 3. 暗视野显微镜要在光线尽量暗的环境下暗视野显微镜要在光线尽量暗的环境下 观察。观察。五、注意事项五、注意事项生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 六、作业与思考题：六、作业与思考题：1.描述在荧光显微镜下所观察到描述在荧光显微镜下所观察到 的实验现象。的实验现象。 2.绘图比较人正常肝组织细胞和脂绘图比较人正常肝组织细胞和脂 肪肝组织细胞。肪肝组织细胞。生物秀-专心做生物 生物秀论坛-学术交流、资源共享与互助社区 生物秀生物秀- -专心做生物专心做生物 实验实验七七- 2激光扫描共聚焦显微镜在生命科学中的应用激光扫描共聚焦显微镜在生命科学中的应用生物秀-专心做生物
