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1、三甲氧苄氨嘧啶对养殖大菱鲆盾纤毛虫病三甲氧苄氨嘧啶对养殖大菱鲆盾纤毛虫病 治疗效果的研究治疗效果的研究叶海斌 许拉 盖春蕾 张伟 刁菁 李天保（山东省海水养殖研究所 山东省海水养殖病害防治重点实验室 青岛 266002）摘要：摘要：从感染纤毛虫的养殖大菱鲆上分离获得盾纤毛虫进行体外培养，通过药物抑制实验发现，三甲氧苄氨嘧啶（TMP）对盾纤毛虫的最小有效抑制浓度为25ppm；TMP 对大菱鲆的毒性实验表明，24 小时半致死剂量为每 kg 鱼体内含药物量为 353.57mg，48 小时半致死剂量为每 kg 鱼体内含药物量为 339.12mg ，安全剂量为每 kg 鱼体内含药物量为 93.61mg；
2、TMP 对大菱鲆盾纤毛虫病的治疗实验结果显示，与对照组相比，注射药物或投喂药饵后，感染纤毛虫的大菱鲆成活率提高了 50%-104.2%。本文的研究结果为 TMP 在大菱鲆盾纤毛虫病防治中的应用提供了可靠依据。关键词：三甲氧苄氨嘧啶；大菱鲆；盾纤毛虫；治疗 随着鲆鲽鱼养殖业在我国的蓬勃发展，特别是在高密度集约化养殖的发展，鲆鲽鱼类病害日趋严重，在发生的病害中，盾纤毛虫是危害较大的一种。盾纤毛虫是以细菌和有机碎屑为食，在海水中生活，也可以侵入宿主体内营养寄生生活，到目前为止，对该病仍然是以预防为主。病害初期，虫体在鱼体表层处尚可采用一些消毒剂以及淡水进行治疗，若纤毛虫通过伤口侵入体内，则没有有效的
3、方法治疗。三甲氧苄氨嘧啶（TMP）是一种新型的抗微生物药物，能够抑制二氢叶酸还原酶，使二氢叶酸不能还原成四氢叶酸，阻止了核酸的合成，从而抑制细菌和寄生虫的生长。TMP 作为增效剂和许多药物搭配在畜禽的寄生虫病防治上已得到应用，但是在水产上用于防治寄生虫病未见有类似的报道。本文对 TMP 的毒性以及 TMP 对大菱鲆盾纤毛虫病的治疗效果进行了研究，以期为水产养殖动物纤毛虫病提供一种新的药物防治手段。 1、材料与方法、材料与方法1.1、 TMP 对盾纤毛虫的杀灭浓度实验对盾纤毛虫的杀灭浓度实验从感染盾纤毛虫的鱼体上分离活力较强的纤毛虫，虫体分离后放入煮沸海水中（添加抗生素青霉素和链霉素）室温下进行
4、培养备用。实验分 6 个组，分别为实验组、实验组、实验组、实验组、实验组和对照组，每组设3 个重复，每组 50ml，盾纤毛虫的浓度大约为 100 个/mL。然后在各实验组里加入 TMP，最终浓度分别为 12.5ppm、25ppm、50ppm、75ppm、100ppm 的。每 24 小时观察记录纤毛虫的数量和活力，观察 96 小时。1.2、TMP 对大菱鲆的毒性实验对大菱鲆的毒性实验选取体长大致相同的大菱鲆进行实验，鱼体长平均 14.4cm，体重平均45.7g，养殖水温为 11 。实验分 5 组，每组 20 尾鱼。肌肉注射药物，浓度分别是 120mg/mL,100mg/mL，80mg/mL，60
5、mg/mL，40mg/mL，注射量为0.2mL。观察并记录 24 小时和 48 小时大菱鲆的死亡情况。通过移动平均角法计算 TMP 对大菱鲆鱼 24 小时和 48 小时的半致死剂量以及安全剂量。 1.3、TMP 对盾纤毛虫病的治疗实验对盾纤毛虫病的治疗实验1.3.1 第 1 次治疗实验实验分 3 个组，分别为实验组、实验组和对照组，每组 60 尾，实验用鱼为严重感染盾纤毛虫病的大菱鲆，鱼体重平均为 20g，饲养在生态实验水箱中，水温控制在 18。实验组为注射组，注射药物浓度为 5mg/mL 的药物0.1mL，连续注射 3 天；实验组为投喂组，按照每 kg 饵料里添加药物 4g，每天投喂饵料 1
6、0g，连续投喂 5 天。观察记录每天供试鱼体的死亡情况，并对死亡的鱼解剖，检查鱼体内的纤毛虫情况。1.3.2 第 2 次治疗实验实验分 6 个组，分别为实验组、实验组、实验组、实验组、实验组和对照组，每组 100 尾，实验用鱼为已经感染盾纤毛虫的大菱鲆，鱼平均体重为 41.4g，饲养在养殖池中进行管理。实验组为注射组，注射浓度为7.5mg/mL 的药物，注射量为 0.1mL，连续注射 3 天；实验组为每 kg 饵料里添加药物 4g 的水溶性 TMP；实验组为每 kg 饵料里添加药物 8g 水溶性TMP；实验组为每 kg 饵料里添加药物 4g 不溶性 TMP；实验组为每 kg 饵料里添加药物 8
7、g 不溶性 TMP，均连续投喂 5 天。连续观察 60 天，记录其死亡情况。2、结果、结果2.1、TMP 对盾纤毛虫的杀灭浓度实验对盾纤毛虫的杀灭浓度实验将不同浓度的药物分别加入各实验组中，每天记录盾纤毛虫数量的变化，结果见表 1。由 TMP 对盾纤毛虫抑制实验折线图（图 1）可以看出，当药物浓度在 12.5ppm 时，其对盾纤毛虫生长繁殖几乎没有抑制作用，虫体活力及繁殖情况与对照组相似；当药物浓度到达 25ppm 时，盾纤毛虫的数量在 48-72 小时内急剧降低，运动活力也大幅度降低，呈现出较强的抑制效果；随着药物浓度的升高，抑制作用更加明显。表 1 TMP 对盾纤毛虫的杀灭浓度实验结果0
8、小时24 小时48 小时72 小时96 小时1151269397110 899873809212.5ppm 79136958396 111126834727 678973501725ppm 81130954319 97108363617 91934028950ppm 97110523813 888253159 10210943171175ppm 818337185 927661131 856152145100ppm 687735112 8698968093 9897109120112对照组 106130125112120时间数 量 ( 个 )浓度制 制制 制制 制制 制制 制制 制制 制制 制
9、制 制制 制制 制0204060801001201400小时24小时48小时72小时96小时12.5ppm25ppm50ppm75ppm100ppm对照组图 1 TMP 对盾纤毛虫杀灭浓度实验折线图2.2、TMP 对大菱鲆的毒性实验对大菱鲆的毒性实验记录注射或投喂药饵 24 小时和 48 小时后大菱鲆鱼的死亡情况，结果见表2。通过移动平均角法计算出 24 小时和 48 小时的半致死剂量以及安全剂量分别为：实验的 24 小时的半致死剂量为 16.16mg，换算成每 kg 鱼体内含药物量为353.57mg。实验的 48 小时的半致死浓度为 15.50mg，换算成每 kg 鱼体内含药物量为 339.
10、12mg。实验的安全浓度为 4.28mg，换算成每 kg 鱼体内含药物量为93.61mg。表 2 TMP 对大菱鲆的毒性实验结果 浓度 （ppm）实验数量（尾） 24 小时死亡数量（尾）48 小时死亡数量（尾）402000 602023 8020911 100201818 1202020202.3 TMP 对盾纤毛虫病的治疗实验结果对盾纤毛虫病的治疗实验结果2.3.1 第 1 次治疗试验成活率80%70%43.33%0%10%20%30%40%50%60%70%80%90%注射组投喂组对照组经过 45 天的实验，结果表明注射组成活率为 80%，投喂组的成活率为 70%，都要明显高于对照组的成活
11、率 43.33%（表 3，图 2） ，注射组和投喂组相对于对照组的成活率分别提高了 84.62%和 61.54%。对死亡鱼进行解剖镜检，发现死亡的鱼大部分都感染了纤毛虫，使用过药物的鱼体上的纤毛虫运动缓慢，数量较少，并且有的纤毛虫已经死亡。表 3 第 1 次治疗实验结果注射组投喂组对照组供试鱼数量（尾）606060存活数量（尾）484226成活率（%）807043.33图 2 第 1 次治疗实验成活率的柱形图2.3.2 第 2 次治疗试验实验结果表明注射组和投喂组的成活率分别为 49%、36%、45%、41%和46%，均高于对照组的成活率 24%（表 4，图 3） ，注射组和投喂组相对于对照组
12、的成活率提高了 50%-104.2%。成活率49%36%45% 41%46%24%0%10%20%30%40%50%60%实验组实验组实验组实验组实验组对照组表 4 第 2 次治疗实验结果 实验组实验组实验组实验组实验组对照组供试鱼数量（尾）100100100100100100存活数量（尾）493645414624成活率（%）49%36%45%41%46%24%图 3 第 2 次治疗试验成活率的柱形图 3、讨论、讨论实验表明当 TMP 浓度在 25ppm 以上时，对盾纤毛虫都有着很好的抑制作用，而这个量远远小于药物的安全使用量，TMP 作为药物增效剂用于治疗细菌疾病已广泛应用于水产中，可以作为
13、水产口服药物使用。在对纤毛虫病治疗实验中，取得了明显的治疗效果，实验组相对于对照组成活率提高了 50%-104.2%，从鱼体的生理情况上看出，使用过药物的鱼体在摄食量、运动性、生成速度等方面都要比对照组的好。TMP 在治疗试验中注射或服用了药物后有些鱼会出现体色发黑、摄食量减少的情况，停药后摄食情况就会恢复，一个星期后体色也会恢复正常，使用过程中副作用小。当纤毛虫感染进入体内以后，往往会破坏了机体的器官以及伴随并发症引起死亡，TMP 虽然能起到抑制体内纤毛虫生长的作用，但是对于那些感染严重的也会因器官破坏或其他的并发症而死亡。因此 TMP 在治疗盾纤毛虫病时应该尽早使用，在发病初期使用的效果最为明显。TMP 作为磺胺增效剂用于治疗纤毛虫病是一个新用途，它解决了纤毛虫感染进入鱼体内部，传统方法无能为力的问题，因此 TMP 可以作为盾纤毛虫病的体内治疗药物推广使用。
