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1、血吸虫病的粪便检查血吸虫病的粪便检查血吸虫病的诊断，一般可分为临床诊断和实验诊断。临床诊断是根据病史、症状和体征作出初步诊断，但不能确诊病人。实验诊断包括病原学诊断和免疫学诊断。血吸虫病的病原学诊断有粪便检查和活组织检查两种，若在受检者的粪便或活组织中查见虫卵或毛蚴，即可诊断为血吸虫病人。血吸虫病的粪便检查有镜检法检查虫卵，孵化法检查毛蚴，也有孵化结合沉渣镜检。由于孵化法取用的粪便量多，在粪内只要有少数活虫卵就能查见，检出率比较高。孵化后的沉渣镜检，能检出部分孵化检漏的病人，能进一步提高检出率，孵化结合镜检是目前血吸虫病粪便检查的主要方法。一、病原学诊断的理论基础寄生在血管里的血吸虫为何能在粪
2、便中查到虫卵?先从血吸虫产卵及虫卵分布讲起。雌雄合抱的成虫寄生在人或哺乳动物的肠系膜静脉内产卵，雌虫在寄生期间的排卵能力可有变化。如小鼠感染日本血吸虫（大陆株）后 2633d，每条雌虫日平均产卵 150 个，34d 为 664 个，44d 为时达 2092 个，58d 为 929 个，68d 为 370 个卵。雌虫产出的虫卵大部分沉积在肠和肝等组织，仅小部分卵可随粪便排出体外。如小鼠感染大陆株日本血吸虫 44d 产卵最多时（2092 个/日）分布于大肠、肝、小肠、自粪便排出和其它组织虫卵的比例为 50.5%、22.5%、18.3%、7.7%及 1%。又如用山梨株日本血吸虫尾蚴感染 ddy 小鼠
3、 415wk 观察，平均每条雌虫每天产卵 2100 个。到 15wk 时，从粪便排出的累计虫卵数占总产卵的 28.2%；组织内虫卵以小肠为主，占沉积虫卵数 83.2%，而肝内为 15.5%。表明，同一种血吸虫的不同地域株和不同宿主，雌虫产出的虫卵在组织内的分布及排出体外的数量不尽相同。刚从雌虫产出的虫卵为单细胞卵，含 1 个受精卵和 20 个（1630 个）卵黄细胞，在组织内经 1011d 发育成熟（含毛蚴卵），成熟卵在组织内成活时间约为 11d。因此，日本血吸虫卵自产出、发育成熟到死亡约经 2122d。血吸虫卵从血管中通过肠壁（日本、曼氏血吸虫）或膀胱（埃及血吸虫）等组织释放到肠腔或膀胱腔中
4、，然后随粪便或尿液排出，我们即可取粪便或尿液作病原学检查。但其机理尚未很好了解，一般认为涉及很多因素：虫卵的刺、血流的压力、肠蠕动以及毛蚴分泌的蛋白质酶等。其实，首要的应是随着虫卵中毛蚴的发育成熟，在虫卵周围形成病变，这是必要条件。所以排至外界的虫卵大多是含活动毛蚴的成熟卵。成熟卵在合适的条件下可脱壳而出。因此，从粪便内检查毛蚴，即毛蚴孵化法为日本血吸虫特有的诊断技术。二、尼龙绢袋集卵孵化法曾采用的孵化法有量杯烧瓶沉淀孵化法、塑料杯顶管孵化法、尼龙绢袋集卵孵化法等。尼龙绢袋集卵孵化法有下列优点：（1）毛蚴计数高；（2）用水量少，可减少劳动力；（3）由于不需换水，可缩短操作时间，23min 即可
5、入瓶孵化；（4）器材轻巧，携带方便。为此，我们确定采用尼龙绢袋集卵孵化法。（一）毛蚴孵化的条件成熟的血吸虫卵有机会落入自然界水体中，条件适合时，卵内毛蚴活动增强，在卵内不停地转动，最终破壳而出，在水体中游动，这一过程称孵化。毛蚴从卵内逸出的时间非常迅速，仅 0.10.3s。日本血吸虫卵孵化时卵壳大多数呈纵裂，毛蚴迅速从纵向裂口逸出。1、渗透压一般认为介质的低渗透压作用是血吸虫卵孵化的主要因素。成熟血吸虫卵在血液、肠内容物或尿液中是不能孵化的，仅被淡水稀释之后才能孵出毛蚴。粪便中的日本血吸虫卵需待粪液被稀释至一定混浊度以下始能孵化。研究证明，在 0.70.9%氯化钠溶液中，大多数日本血吸虫卵的孵
6、化被抑制，1.2%及其以上浓度全部虫卵不能孵化。0.8%氯化钠溶液的渗透压相当于 4.0 大气压（表 1）。表表 1 日本血吸虫卵在氯化钠溶液中一天的孵化力（温度日本血吸虫卵在氯化钠溶液中一天的孵化力（温度 20）氯化钠溶液浓度（%）未孵化虫卵数孵 化虫卵数孵化率（%）渗透压（大气压）1.084 3 3.44.10.887 1 1.13.30.676 2020.82.50.434 4557.01.70.230 4660.50.8对照1911685.9（okamoto，1962）若以清水中的虫卵孵化率为 100%，而在 0.2%氯化钠溶液中虫卵的孵化率不减，在 0.5%溶液中孵化率降为 60%，
7、在 0.8%中降至 7.5%，在 1.0%中降至 1.8%，未孵出毛蚴的虫卵在当时看来还是活的。2、温度温度是促使毛蚴孵化的必要条件，25左右是血吸虫毛蚴孵化的适宜温度，低于 10或高于 37，大多数虫卵的孵化受抑制。一般是温度愈高，孵化愈快，毛蚴寿命也愈短（表 2）表表 2 不同月份平均温度下日本血吸虫毛蚴孵化起讫时间不同月份平均温度下日本血吸虫毛蚴孵化起讫时间月份气温（）水温（）开始孵化时间（h）毛蚴最多时间（h）毛蚴消失时间（h）1 3.0 59445570 922 5.0 814375170103310.0 625194056 65412.0 917192534113521.02124
8、 31126 31625.62426 158 44729.02630 2611 26828.32729 2411 17929.72528 1411 201015.71620 31721 411113.51516 41016 271210.0 914447381109（江苏血防所，1956） 根据室内家兔肝卵实验证明，秋季（9 月中旬到 11 月上旬）是粪检查病最好季节，其次是春季（3 月上旬到 6 月下旬），最差是冬季（11 月中旬到下年 2 月下旬）（表 3）。出现这种情况，可能是由于在同样的感染期内，成熟虫卵的比例在冬季要明显低于其它季节。表表 3 各季节毛蚴孵化试验孵出毛蚴的理论值各季节
9、毛蚴孵化试验孵出毛蚴的理论值自然条件毛蚴孵化组定温全光照毛蚴孵化试验组月份上旬中旬上旬中旬3 89.1134.6 34.0101.74 95.3 75.4104.1 14.05110.2168.2114.8145.26 43.3114.5 71.0160.57 86.1 79.7123.1155.28 58.0 28.2147.1101.49 62.0147.0118.1169.810140.4199.1164.2188.811201.9 46.5171.2 44.112 19.1 31.2 25.1 41.91 71.4 7.9 82.7 55.62 17.4 6.0 43.8 98.83、
10、光线光线对毛蚴孵化的影响说法不一，看来光线对孵化不起决定作用。黄天威（1952）观察，在完全黑暗的环境中，虫卵几乎不能孵化。光线能加速虫卵的孵化，光线愈强虫卵孵化愈速，但在 75w 至 300w 人工灯光或强阳光下，虫卵孵化速率相似，大多虫卵在 56h 孵出。作者在实验中观察到大部分虫卵在全黑环境可孵化，但速度较慢，部分虫卵孵化被抑制，表明光线是促使孵出毛蚴的动力。4、水质及 pH在试验的 4 种水样中，以（1）井水（pH7.47.6）对日本血吸虫卵的孵化效果最好；（2）搁置 24h 自来水（ph7.47.6，余氯00.25ppm）次之；（3）煮沸冷至室温的自来水（pH8.8，余氯 0）第三；
11、（4）新鲜自来水（pH7.38.6，余氯 0.41.06ppm）最差。认为自来水中余氯含量高是影响毛蚴孵化的主要原因，水中余氯含量大于0.3ppm 即可影响毛蚴孵化。水中含氨不是影响毛蚴孵化的原因，即使氨含量到达 1.5ppm 亦未见对毛蚴孵化产生影响，上述 4 种水含氨量均低于 1.5ppm。值得注意的是，煮沸后冷却自来水的 pH 值升高为 8.8，亦能影响毛蚴的孵化。虽然日本血吸虫卵在 pH3.08.6 范围内可以孵化，但最适宜于孵化的 pH 为 7.48.6 范围。酸性愈高愈不利于孵化，pH2.8 已完全抑制虫卵的孵化。另一方面，碱性愈高也有害于虫卵孵化，在 pH10 以上时，虫卵孵化已
12、完全被抑制。（二）毛蚴的行为1、游动毛蚴体表具有 21（或 22）个扁平的纤毛上皮细胞，每个纤毛上皮细胞生长有无数根纤毛，每根纤毛长 45m。它们的煽动能使毛蚴在水中很快地游动并旋转前进，其游速平均为 2.190.20mm/s，而每秒游动方向改变率的中位数值为 540。毛蚴的游速与其时龄、温度、光照度有关。刚孵出的毛蚴游速为 2.27mm/s，15h 为 2.00mm/s，8h 后下降为 1.52mm/s。在温度为 4、12、22 及 34时，毛蚴的游速分别为 0.5、1.4、2.2 及 3.8mm/s。光照强度与毛蚴游速呈直线相关，回归方程：Y=0.009X+1.510，式中：Y 为毛蚴游速
13、，X 为光照度。毛蚴的活力和寿命与水质、水的温度及 pH 等因素有密切关系。在 2025时，日本血吸虫毛蚴一般可活 10h 以上。pH7.58.5 时毛蚴活动良好，在 pH78 时毛蚴一般可活 56h，pH6 或 10 时可成活 23h，pH45 时仅成活 12min。盐浓度高于或相当于 0.7%时，毛蚴成活时间逐渐减少。盐浓度为 0.157%和 0.35%时，毛蚴成活时间明显地较淡水中为长。2、趋性血吸虫毛蚴对其周围的物理因素往往能产生应答反应，许多研究者曾观察了毛蚴的反应行为。一般说来，毛蚴的趋性可表现为向光性、向温性、背地性（向上性）。日本血吸虫毛蚴多趋向弱光（36003800Lux），
14、回避强光和黑暗。在 15时任何光照度均具有正趋光性，在 20时对 2000Lux 以下的光照呈正向光，在 25为 500Lux以下，在 30为 50Lux 以下为正向光，表明毛蚴的向光性与温度有关。日本血吸虫毛蚴的趋温性反应不如趋光性明显，在 1434温度范围中选择 14的区域，在 720的温度范围中，毛蚴选择 1315的区域。毛蚴在水层中具有向上性（背地性），不论在黑暗或光亮的环境中毛蚴均有这一趋性，而且向上性较向光性为强。如在水柱的底部照光，而上部使其黑暗，大多毛蚴仍然集中在水柱的上层。由于毛蚴具有向上性，所以我们观察毛蚴的位置应是三角烧瓶的颈部。（三）器材1、验收登记材料： 粪检花名册、
15、标签。2、集卵器材（1）尼龙绢袋：选 260 目/2.5cm 尼龙绢袋，其孔径为 4961m，使用中经热水反复浸泡后缩小至 4453m，而血吸虫卵大小为 74106（平均 89）5580（平均67）m，故绝大多数虫卵不会在冲洗过程中漏出袋外。袋的上口直径 810cm，长 20cm，下口直径 1.5cm。（2）三角烧瓶：500ml 或 250ml。（3）铜丝筛（4060 目/2.5cm）、压舌木板（或竹快）、塑料夹、塑料漏斗。3、淋水冲洗器材：冲洗操作台、铝茶壶、粪桶。4、观察毛蚴器材：日光灯、黑板或黑卡纸、吸管、载玻片。5、镜检器材：显微镜、试管架、10ml 试管、载玻片。6、清洗灭卵器材：铝
16、锅、煤球炉（或电炉）、大木盆（或塑料盆）、瓶刷、肥皂、肥皂粉、毛巾等。（四）操作技术1、验收登记验看粪便的质量、数量及标签。核对送检名单无误后，重写省粪检标签 3 张，统一编号，然后在省粪检花名册上登记，弃去原标签，将重写的 3 张标签插入包粪纸中。2、淋水冲洗取 3 只三角烧瓶，在其颈部各套上一根橡皮筋，取粪包中的 3 张标签，各折成宽约 1cm 的长条，夹在三角烧瓶颈部的橡皮筋中。取漏斗、压舌板、铜丝筛各一个，取尼龙绢袋 1 只，下口用塑料夹夹住。将重约 90g 的大便分为 3 等份，先取 1 份大便置于 4060 目/25.4mm 铜筛中淋水调浆，通过漏斗使粪液滤入 260 目/25.4mm 的尼龙绢袋中，然后移去铜筛及漏斗，将漏斗水洗后套在三角烧瓶上。继续淋水冲洗袋内粪渣，用压舌木版轻轻振荡尼龙绢袋，使加速过滤，直至滤出液变清为止。弃去尼龙绢袋下部的塑料夹，将袋内的滤渣通过漏斗淋洗入三角烧瓶，加
