《云南腾冲热泉土壤微生物基因组文库的构建与分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《云南腾冲热泉土壤微生物基因组文库的构建与分析（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、!“ 卷# 期 $%“ 年 “ 月 ! 日微生物学报 !“#$ %+?*+A98A3BAB+作者简介： 蔡莹 （(C-( D ）， 女， 湖南人， 硕士研究生， 主要从事微生物学研究。758390： B399+ 去磷酸化酶处理过的 $%， 满足本研究中基因组文库构建的要求。经过电洗脱法、 低熔点凝胶法以及试剂盒法等方法的比较， 发现 67H,+* S)T*6U J1GDE+*2GIC 平板上进行培养 AMQ， 获得带外源!“# 片段的白色阳性克隆。#“$文库的评价 评价一个环境免培微生物基因组文库质量的好坏主要从以下 8 个方面考虑： 文库的库容量、 插入片段的大小、 文库中基因的多样性。在热
2、泉环境微生物基因文库的构建中， 每次连接反应， 以 PK 9 8B-+ 目的片段 !“# 连接后转化得到大约 PKBBB 个白斑， 转化效率为 ABM个阳性克隆子G“+ !“#， 若将提取纯化的该热泉环境微生物 !“# 全部连接转化， 可总共获得约 KBBBBB 个阳性克隆；随机从文库中挑取 ABB 个白斑， 提取质粒酶切粒检测， 其中 LF 个均有插入片段， 重组率为 LFW， 而其中绝大部分插入片段大于 80; （图 A） ， 大小不同， 平均片段长度为 F?M0;。由于构建的文库的库容足够大， 大约包含P?K1C 的外源 !“#， 又因为这些外源 !“# 片段来自 于高温热泉微生物， 很
3、有可能获得新的耐热蛋白质或酶等。图 !环境基因组文库的克隆检测X)+YA#-*2Z) 7 H,5*+,-7H)/ $2*H)U 2);6*6ZYA0; !“# 2*UU,6； BY I)-,6 $%)-*-5 $2*H)U U)+,5,U )5Q !“#!Y#“%热泉未培养微生物基因文库的部分序列分析 比较 从该基因文库中随机挑选 8B 个质粒进行 !“# 序列分析， 发现在 8B 个测序样品中， 测序没有出现重复的序列， 发现片段中含有未见报道的序列。 经过与 CI#%JD 比较后 （表 A） ， 发现外源片段的 大部分序列与已知嗜热微生物的基因有一定的同源 性。这些嗜热微生物包括细菌和古菌
4、。例如： 序列A、 AB、 AA、 A8、 AL 和 P8 与 $)*+,*%-,.+.6R:6（2-7）-5MS+99/：E#(L“%(L E;A=H;%=“G T“)(!“#$%,+/:R-/6（,-7）.5MS/66:：J“#=#(L+,R+*（297）2SAUJ3 A“G)()D(#)() “F=AF(L “ %(AA VAA B“=G()“)1“0-969R+,-（,/7）95=( L()(（A“H=$“L(）5(#$5-(;9*+-9R-:（,7）:5?=%()“) H#=(“ %$O!“#$%4- +“#$%/*.-R99（2:7）*W?H= 44O/+-!“#$%+*,.R+.
5、2 （.*7）+-X“$“A# = 34E)(（333Z )/,.2R6:（2.7）+.W?H=（$L=$“）/#+“(?#=)“( T“)(10/6,2R+6*（./7）+,E#(L“%(L )A“= “= D%=# -1 ),9+-:R-+.（9/7）(Q!;-1 AH“/,(#+9(;-69.R:/（6:7）+:5MS-+6/：%)(#F(L H#=(“1“0-9,:R+/+（,67）+*I“H(H“L( 315 #)H=#(#，L“H(H“L(;B“L“G H#=(“（LHH3）5$*“#/622R+.,（.-7）-/5MS.,2：% %=)(#F(L “ B%(#“!“#$%( %?
6、%A)(?“-+,R+,-（.97）-4“( )?(;D#9;H=#)D(#)(0./9:R+26（297）-2Q=)“=A;+ （=# 2） ;$=H)D(#)(，AH“:#,9+-/R-/+ （,*7）-9Q(#;$($B#( #)A=%=#A.(#-:*+R-/+（2,7）-6W?H= 44W3/-:,!“#$%4- +“#$%/*9.R+9/（.*7）-*_(=H=( )D(#)(7#-4024$-,R*2（,:7）./IJ3 H=A?$(#)(，B(;A“T( #(G“=/+/.-R9*（297）*-2蔡莹等： 云南腾冲热泉土壤微生物基因组文库的构建与分析R微生物学报 （-/9） 2
7、9 （.）!讨论在自然环境中， !“以上的微生物在现有实验条件下无法直接培养获得#$。利用免培养技术直接从环境中获得微生物 % 等#!在 :JM，GB9:F;0+2 ;+2$)3+),， 5005，“：$+ N $(M + 王涛，柴丽红，崔晓龙，等M 免培养法对一热泉细菌多样性的初步研究M 微生物学报，500$，$： 2(# N 2(5M , 王涛，柴丽红，崔晓龙，等M 从腾冲热海免培养获得的 2个 #*.?%9 X，7BCY WXM %M ?*, 91:+$)1 ;+2$)3+),，#!*，L #( 0,M?2(0 ;+2$)3+),)4+20 7+1+20 （500*） (* （$）!“
8、#$% $/?80%(/3 !“# $%/%+5)%0#*+(),0# 4.%)($=$5(?/=/?0， ./9(0= Q， L?6J(8U Q;， .5 0#3I$9，T%K550J/99 4，Q/3/%/D：!.% （DAAF“D!FCA）!/:I.3 L/BXQ3J： CPS!ASPDOO!DAP；)SD3%B： C DAAOX“?/;/C：!B “,:; DAAOXP/K%:/C：DD E/I;/DA/“DAAO微生物学报 真诚欢迎刊登广告微生物学报（双月刊） 创刊于 !O“ 年， 由中国科学院微生物研究所和中国微生物学会主办， 是我国微生物学领域唯一的综合性学报级期刊和国家自然科学
9、核心期刊， 被国内外多家重要的文摘刊物和数据库收录。本刊历史悠久， 发行量大， 内容涵盖面广， 主要报道普通微生物学， 工业、 农业、 医学和兽医微生物学， 病毒学， 免疫学以及生物工程等方面的研究成果和科研进展。一直受到国内外科研工作者、 高等院校师生和相关企业界的欢迎。本刊可以为您定期发布与微生物学相关的试剂、 药品、 仪器、 设备及生物技术等方面的产品信息， 可为您开拓在微生物学领域新的发展空间。另外， 与生命科学有关的各类服务信息也在本刊发布之列。本刊态度严谨， 信守协议， 由中国科学院科学出版社广告部代理广告业务 （广告经营许可证： 京东工商广字第 AA“F 号） 。编辑部备有最新的期刊简介和报价单， 欢迎与我们联系。电话X传真：（A!A） PDP“AFDD；电子信箱： /?8/J(?%$&K93(J3/?3?9!“F蔡莹等： 云南腾冲热泉土壤微生物基因组文库的构建与分析3X微生物学报 （DAAP） FP （“）
