活血祛瘀中药对自由基代谢影响的实验研究

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1、活血祛瘀中药对自由基代谢影响的实验研究活血祛瘀中药对自由基代谢影响的实验研究张国华 殷学锋(荆州师范学院体育系 湖北 荆州，434104)摘要摘要 本实验研究了大鼠骨骼肌挫伤后一周内血清和肌组织 MDA 含量与 SOD活力产生变化及使用麝香舒活精外擦对该指标的影响。结果如下：(1)挫伤蒸馏水外擦组与正常对照组相比，血清和肌组织 MDA 含量显著升高：血清 SOD 活力下降，肌组织 SOD 活力下降显著。提示大鼠骨骼肌挫伤的病理与自由基损伤有关。(2)挫伤组的血清和肌组织 MDA 含量一周内有明显峰值出现(伤后 3h)，符合缺血再灌注性损伤规律。(3)挫伤麝香舒活精外擦组与蒸馏水外擦组相比，血清

2、和肌组织 MDA 含量下降，血清 SOD 活力显著升高，提示麝香舒活精有清除病理性自由基及提高抗氧化酶活力的作用。关键词关键词 中医药; 自由基; 运动损伤; 骨骼肌损伤1 1前言前言 自 1978 年 Dillard 首次提出自由基在运动性疲劳、损伤中的作用以 来，学者们已经注意到了自由基与运动损伤之间的关系。但目前的文献主要集 中在由剧烈运动引起的骨骼肌细小损伤(称为延迟性肌肉酸痛症，DOMS)上， DOMS 仅仅只是运动性骨骼肌损伤中最轻的一种，即使不作治疗一般也能自愈， 而更严重的骨骼肌损伤如肌肉的急性拉、挫、扭伤、慢性劳损以及肌肉的附属 装置(筋膜、肌腱等)损伤是否与自由基损伤有关?

3、此类文献尚极少见到，我们 仅能根据自由基损伤理论结合骨骼肌损伤的病理推测二者之间的可能关系。我国骨骼肌损伤的治疗中中医药的运用并且极为普遍，治疗急性骨骼肌损伤的 中药大多属活血祛瘀类。已有一些关于单味活血祛瘀中药清除自由基的报道， 但是大部分活血祛瘀中药则未见这方面的研究，尤其是缺乏对活血祛瘀复方抗 自由基作用的研究。本课题试图证实骨骼肌急性损伤与自由基的关系，并探讨麝香舒活精对骨骼肌 急性损伤后自由基代谢的影响。2 2材料与方法材料与方法雌性 Wistar 大鼠 60 只，体重 221+39 克。将动物随机分为三组：空白对照组 (G1)：10 只；25 只；损伤+蒸馏水外擦组(G2)：25

4、只；损伤+麝香舒活精外擦 组(G3)：25 只。全部损伤动物采用专制的实验打击器造出动物右大腿后外侧股二头肌急性挫伤 模型，打击前局部予以脱毛处理，打击力量为：打击杆重 1Kg，下落高度 15cm，打击面积约为 33425mm2，打击次数为 1 次。G3 组动物每天以麝香舒 活精外擦伤处，每天 3 次，每次 1 分钟；G2 组用蒸馏水外擦，方法同 G3 组； G1 组不加任何干预。222 标本采集与处理将 G2 与 G3 组动物挫伤后一周时间各分为 5 个时间段伤后 12h、伤后 3h、伤后 1d、伤后 4d,伤后 7d，每个时间段 5 只动物。G1 组次取完标本。 在预定的时间内将动物予以断

5、头处死，取血约 5ml 离心，取血清备用。断头取 血后迅速剪开右大腿后外侧股二头肌处皮肤与筋膜，取肌组织约 05 克，加 入 45ml 蒸馏水，制成 10的组织匀浆，离心后取上清液备用。223 观测指标与方法血清和肌组织 MDA 含量及 SOD 活力测定：MDA 含量采用硫代巴比妥酸(TBA)法， SOD 活力采用亚硝酸盐抑制法。以上试剂盒均由南京聚力生物工程研究所提供。3 3实验结果实验结果31 挫伤后血清 MDA 含量的变化：(1)组血清 MDA 含量明显升高，与 G1 组相 比，伤后 0.5h、3h、1d、4d 有非常显著性差异(P005)。表 1 血清 MDA 含量的变化(XSD)：N

6、Mml组别 12h(n=5) 3h(n=5) 1d(n=5) 4d(n=5) 7d(n=5) G1(n=10) 14.81+1.44 G2(n=25) 22.91+3.00* 25.57+1.37* 22.70+3.78* 20.34+1.64* 16.89+3.14G3(n=25) 15.43+0.83* 17.57+1.81* 15.82+0.80* 15.24+0.90* 14.41+0.65注 1：* P005)。(2)G3 组肌组织 MDA 含量与 G2 组相比均降低，其中伤后 12h、1d 有显著性差异(P0.05）。表 2 肌组织 MDA 含量的变化 （x+sd）:NM/g.pr

7、o组别 l2h(n=5) 3h(n=5) td(n=5) 4d(n=5) 7d(n=5) G1(n=lO) 189.66+27.70 G2(n=25) 245.70+39.55* 339.32+45.72* 263.74+30.90* 228.91+27.64 213.36+12.90G3(n=25) 217.60+8.07* 256.21+21.79* 237.16+10.07* 210.08+6.96 195.87+15.6233 血清 SOD 活力：(1)G2 组与 G1 组相比，各时间段血清 SOD 活力均下降，但差异不显 著(P0.05)。(2)G3 组与 G2 组相比，血清 SOD

8、 活力升高，除 7d 时无显著性差异外 (P0.05)余均有显著性差异(P0.05)，4d、7d 时有非常显著性(P0.05)。 表 4 肌组织 SOD 活力的变化(X+SD)：NUg.pro组别 1/2h(n=5) 3h(n=5) 1d(n=5) 4d(n=5) 7d(n=5) G1(n=1) 1252.04+194.21 G2(n=2) 1168.91+74.96 1135.53+120.09 1089.55+75.73 863.15+115.79* 892.32+94.40G3(n=2) 11339.62+115.12 1250.57+27.03 1099.58+34.47 910.40

9、+202.96 1022.49+37.684 4讨论讨论 麝香舒活精由川红花、三七、麝香、血竭、生地等组成，功能活血祛瘀、清热 止血、舒筋活络、消肿止痛。现代医学研究发现三七、红花、血竭能改善微 循环、抗血栓形成，证实这些药物确有“活血祛瘀的作用，已有研究发现，三七的有效成份之一三 七总甙有明显的抗过氧化作用，生地所含的环烯醚萜甙类被证实能增强 SOD、GSH-Px、CAT 等抗氧化酶的活力和降低脂质过氧化物(LPO)含量，而三七、 生地是组成本方的主要药物，这间接表明本方对自由基代谢有一定影响。41 肌肉挫伤后对自由基代谢的影响MBA 是由自由基诱导的脂质过氧化反应的代谢终产物。虽然可以使用

10、电子自旋 共振(ESR)等技术直接测得组织中的含量，但运用 MDA 等指标间接了解自由基 代谢水平是目前更常用的方法。从本实验的结果来看，损伤蒸馏水外擦组(c2) 较空白对照组(G1)血清与肌组织 MBA 含量明显升高，这表明大鼠肌肉挫伤后体 内的自由基产生增强。其可能的机制是：(1)损伤局部缺血、缺氧，肌细胞代 谢紊乱，方面 ATP 大量转化为 AMP 促进了次黄嘌岭的生成，另一方面肌纫 胞受损伤，胞浆 Ca2+浓度骤升，激活了相关酶，促使 HDH 转变为 XOD，从而引 发自由基生成的 X-XO 机制。(2)局部渗出物和应激产物的自动氧化。骨骼肌损 伤后，局部小血管破裂，可反射性地引起儿茶

11、酚胺物质的大量分泌，此类物质 自动氧化均产生自由基；局部出血，红细胞裂解，释放大量氧合 Hb，骨骼肌 损伤后肌细胞溶解，肌红蛋白释放增加，这些物质自动氧化时均产生自由 基(3)某些金属离子的释放。红细胞裂解释放氧合肋时，也释放 Fe2+及 Cu2+ 等。Fe2+可促使 VC 转变为促自由基生成剂。Rowley(1983)实验证明 VC 的浓度 在 50uM-100uM，FeS04 浓度在 25uM 时便可产生 OH，表明这种反应与 Vc 浓度 无关，仅取决于游离 Fe2+的存在。Cu2+可特异催化脂质过氧化物分解，引起自 由基连锁反应，有人认为 Cu2+的这种作用甚至比 Fe2+还强 10 倍

12、，不过 Piriou 等的研究发现，Cu2+与血浆或全血温育 24 小时，只有当 Cu2+浓度高达 12X10-4 和 20X104M 时，由铜导致的脂质过氧化才很明显。(4)吞噬细胞进入损伤 部位。从骨髂肌损伤后的 4-5 小时至 2-4 天。局部大量吞噬细胞出现，使组 织呈典型的炎症反应。吞噬细胞在吞噬时亦产生大量的 O2、OH-及 H202。缺血再灌注性损伤是指机体组织或器官在血液灌注不良，即经历了缺血、缺氧 后由于液体复苏、机体组织的侧枝循环自然代偿等因素，使循环得以改善，血供恢复后 给机体带来的损伤。从本实验的结果来看，蒸馏水外擦组(G2)的血清和肌组织 MDA 含量均有峰值出现，且

13、峰值出现的时间在伤后 3 小时。从骨骼肌损伤的病 理生理学分析存在一个缺血一再灌注过程：骨骼肌损伤后，局部小血管破坏， 加上骨骼肌处于痉挛状态，对局部血管产生压迫作用，故损伤局部处于“缺血” 状态，接着由于侧枝循环的建立，部分平时不开放的小血管启用，以及神经 体液调节促使血管舒张等使损伤局部从“缺血”期过渡到“再灌注”期， 完成这样的过渡约需数小时。本实验结果与上述病理变化过程是相符的，证实 骨骼肌损伤后自由基的代谢符合缺血-再灌注损伤理论。缺血再灌注损 伤的机理目前尚未明了，Powell 等倾向用微循环障碍来解释。“再灌注”时 氧供充分，氧自由基大量生成，由此引发的脂质过氧化反应使血管内膜受

14、损， 血小板和白细胞粘附，最终形成微血栓，造成微循环障碍而造成组织损伤。损伤对 SOD 活力的影响文献报道较为一致，均认为能使其下降。本研究显示； 大鼠骨骼肌挫伤后血清 SOD 活力呈下降趋势，但与 G1 组相比无统计学意义； 肌组织 SOD 活力显著降低(与 G1 组相比)，提示骨骼肌挫伤后对机体全身 SOD 活力并无明显影响，而对损伤局部组织 SOD 活力则有较大影响，这一点尚未见类似报道，但总的来看，挫伤后 SOD 活力下降与前人的报道是一致的。另外， 从肌组织 SOD 活力变化曲线来看，4d 前 C2 组与 G3 组均呈下降过程，此后开 始上升，表明骨骼肌挫伤对局部肌组织 SOD 活力

15、的影响在 4d 左右时最大，而 此时血清和肌组织 MDA 含量均处于恢复中，SOD 活力与 MDA 含量变化的不同步 性表明骨骼肌挫伤后自由基代谢的增强不仅仅是抗氧化酶活力的降低而引起的。42 麝香舒活精对大鼠骨骼肌挫伤后自由基代谢的影响与 G2 组相比，G3 组血清和肌组织 MDA 含量明显下降，表明麝香舒活精对病理 性自由基有较强的清除能力。进一步观察发现，麝香舒活精对 MDA 的影响主要 在大鼠挫伤后的前四天内，之后影响并不明显，这说明本药对自由基代谢的影 响主要在急性损伤的早期，这与本药尤适用于急性损伤早期的适用范围有着某 种一致性。在组成本方的七味药中，已有关于三七、生地抗氧化作用的

16、报道， 本方对大鼠骨骼肌挫伤后自由基代谢的影响到底是三七、生地两味药物单独作 用的结果还是全方诸药综合作用的结果尚需进一步研究。由于有关中药复方抗 氧化作用的研究极少见，组方诸药是否能相互协同作用而提高单味药物的抗氧 化能力?目前尚不得而知，如果这一点能够得到证实，那么祖国医学配伍的神 秘面纱就可从一个侧面被揭示。与 G2 组相比，G3 组血清和肌组织 SOD 活力均有增加(其中血清增加显著，肌 组织的增加则不显著)，表明麝香舒活精能有效增强血清 SOD 的活力。在已发 现的抗氧化剂中，VE、VC 及一些微量元素如 Zn、Cu、Se 等由于本身就是抗氧 化酶的成分，故这些抗氧化剂除能抑制自由基生成外，也能增强体内抗氧化酶 的活力。一些用作抗氧化剂的西药仅仅只能抑制自由基的生成，而不能提高抗 氧化酶的活力，有些甚至还有抑制某些抗氧化酶的活力的作用，而目前发现的 具有抗氧化作用的中草药(包括复方)大多兼具抑制自由基生成和提高抗氧化酶 活力的双重作用。到底是什么使中药具有这种