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1、实验 1：三系 958 和郑单 958 的对比实验 实验目的：三系 958（Ya582）与郑单 958（Ya581） 、郑单 958CKH1(fB33)相比，找差异。实验材料：上述三份。选用引物： 一：检测不育细胞质特异引物：引自 玉米雄性不育细胞质特异 DNA 片段的发现及差异展示 2005 P1: 5 ATGCTAATGGTGTTCCGATTCC P2: 5 AGCATCATCCACATTCGCTAG PCR 体系： 反应程序：H2O15.610Buffer2.52.5mMdNTP2一对引物0.55U/ul Taq0.4DNA 425194 5min 294 1min 355 1min 4
2、72 1min50secto 2, 40 cycle572 5min 64 for ever 二：细胞质雄性不育系 T C S 的三套特异性引物序列 引自 玉米细胞质雄性不育分类体系的建立T CMSTF 5 CATGAAATGGGTGAAGTCTCTTTC CMSTR 5 AAGAGAAAGGGAGACTTTGGTCCC 440bpC CMSCF 5 ATGCTAATGGTGTTCCGATTCC CMSCR 5 AGCATCATCCACATTCGCTAG 398bpS CMSSF 5 CAACTTATTACGAGGCTGATGC CMSSR 5 AGTTCGTCCCATATACCCGTAC 7
3、99bp PCR 体系： 反应程序：H2O15.610Buffer2.52.5mMdNTP2一对引物0.55U/ul Taq0.4DNA 425194 5min 294 1min 355 1min 472 1min30secto 2, 40 cycle572 5min 64 for ever 三：引自 玉米 C 型胞质不育恢复主基因 SSR 标记 2001Rf48.01bnlg2307GGGTGCTCGTAGTAGGGGTT/CTAAGGCACACGGAGAGAGG Rf5-15.07bnlg1711TAATCTTGGGGGGTTTAGGG/GACATGTCCCATTCCCATTC Rf5-2
4、5.07bnlg1346CATCATGAAGCAATGAAGCC/CCGCGCCATTATCTAGTTGT Rf5-35.07phi058AGGTGCTGGACACAGACTTCAAC/ACTGAGATCCAGGCTCCTCTTCPCR 体系： 反应程序：6%变性聚丙烯酰胺检测一 二都是 2%琼脂糖检测，三是 6%变性聚丙烯酰胺检测。H2O15.610Buffer2.52.5mMdNTP2一对引物0.55U/ul Taq0.4DNA 425194 5min 294 1min 355 1min 472 1min50secto 2, 35 cycle572 5min 64 for ever 其它的
5、 SSR 引物60 核心引物中的第三组。DYEDYELociSize range1FAMM94bnlg1025y4141-2012FAMM53umc1538y3131-1943FAMM85umc1261k10231-2494FAMM6bnlg1175k1261-3405FAMM54bnlg1523k3183-2636NEDG36umc1136y2122-1627FAMM57phi021y8167-2088FAMM15umc1051k2226-2869FAMM62umc1496y3146-18410FAMM20mmc0081k1167-21511FAMM69umc1859k1140-19412F
6、AMM70umc1127k1153-26113FAMG44phi328175y4302-34614FAMM29phi116k1240-26215FAMM31umc1741w1144-21516FAMM33bnlg162k2239-28417FAMM121bnlg1191k7240-29918FAMM39umc1366y1226-23819FAMM122bnlg1712k17256-29420PETM123bnlg1450A1232-352电泳板：123456789101112AYa582/M94Ya581CKHYa582/M53Ya581CKHYa582/M85Ya581CKHYa582/M6
7、Ya581CKHBYa582/M54Ya581CKHYa582/G36Ya581CKHYa582/M57Ya581CKHYa582/M15Ya581CKHCYa582/M62Ya581CKHYa582/M20Ya581CKHYa582/M69Ya581CKHYa582/M70Ya581CKHDYa582/G44Ya581CKHYa582/M29Ya581CKHYa582/M31Ya581CKHYa582/M33Ya581CKHEYa582/M121Ya581CKHYa582/M39Ya581CKHYa582/M122Ya581CKHYa582/M123Ya581CKHFWe045/G19We1
8、35We137We138We139We140We141We144We147We153We154We157GWe158We159We166We168We177We178We187We188We193We197We199We203HWe211We212We216We217We224We227We231We235We242H2O12.3549.410Buffer282.5mMdNTP1.24.8一对引物0.2515U/ul Taq0.20.8DNA 4单加20X480三-2：引自 玉米 C 型胞质不育恢复主基因 SSR 标记 2001 引物：Rf48.01bnlg2307Rf5-15.07bnlg1
9、711 Rf5-25.07bnlg1346 Rf5-35.07phi058材料：三系 958（Ya582）与郑单 958（Ya581）PCR 体系： Genaceae 试剂 反应程序：A反应程序：B：用 SSR 60194 5min 294 1min 350 1min 472 1minto 2, 35 572 5min 64 for ever TransgeneGenaceaeH2O12.35H2O12.9510Buffer210Buffer22.5mMdNTP1.210mMdNTP0.6一对引物0.25一对引物0.255U/ul Taq0.25U/ul Taq0.2DNA 4DNA 4202
10、0Hu et al. 2006. TAG, Identification and mapping of Rf-I an inhibitor of the Rf5 restorer gene for Cms-C in maize.umc2326 - (AGATG)4 (SSR) 100bpThis SSR is also known by the following names: p-umc2326, umc2326.Repeat: (AGATG)4 Primers:Right End: CGATGATGGGTGTTGTGGTTAGAT (umc2326 reverse) Left End: G
11、GTGAGATACAGAGGTGGATGAGG (umc2326 forward)umc2327 - (TCTC)5 (SSR)This SSR is also known by the following names: umc2327, p-umc2327.Repeat: (TCTC)5 Primers:Left End: GATCGATGCTAATGTGAAGAGCCT (umc2327 forward) Right End: CCAGCAGCATATGTACACAAATCA (umc2327 reverse)郑用琏 2006 鉴别玉米细胞质雄性不育材料胞质类型的方法。T 组：T-1: G
12、TCGTGTCCTGGTAGCCTT-2: CCTCCTTCATTCCGTTGT 435BPC 组：C-1: TGAAAGGGTGGTGGAATAC-2: GAGCCAAAGTAATGAGAAA 698BPS 组：S-1: GATGCTATGCTAAGCGAGATS-2: CCGCTAACCCACTCTTCT 885BP玉米为主要研究对象的植物 CMS 分子生物学研究。在国家自然科学基金，国家攀登计划，“863”等研究课题中，分析了玉米 CMS 线粒体 DNA 的遗传多型性、建立了利用 RFLP，PCR 技术进行胞质分类的生物技术体系；成功地构建了高质量的 mtDNA 的 BAC 文库，克隆到
13、由 atp9 三个区段嵌合重组形成的 S 胞质育性候选基因 orf77；采用 SSCP-PCR 技术，证实了与 orf77 紧密连锁的基因在不同胞质来源的材料中的差异， 为胞质亚组的划分提供了重要的理论依据；证实了 orf77 在不同核背景下 mRNA 的表达差异，提出了 orf77 所在的 DNA 区段双向转录对雄性不育表达调控的分子模式，为最终阐明玉米 S 组 CMS 的育性机理提供了证据。在绘制高密度玉米分子标记连锁图谱的基础上，定位了 CMS 恢复基因 Rf3、品质基因 Du 和与杂种优势相关的 QTLs，并采用分子标记辅助选择技术完成了 Rf3/rf3 的近等基因系选育，并正利用这一
14、近等基因系，采用 SSH 和 cDNA chips 技术克隆 Rf3 基因。同时利用分子标记技术完成了我国西南地区玉米地方种质资源的遗传多型性评价；建立了云南糯玉米，爆裂玉米地方品种的指纹图谱。发表学术论文 62 篇，申请专利 1 个，在 NCBI Database 中登记注册胞质基因片段 2 个。实验 1：三系 958 和郑单 958 的对比实验 实验背景：三系 958 为河南省高光玉米新品种研究所利用三系选育法培育品种，根据培育单位介绍与郑单 958 相比有 1-2 个性状差异，但需要分子证据。国标的 40 个 SSR 引物扫描没有差异，需要进一步选用其它 SSR 引物和寻找相关雄性不育功能标记来检测。联系电话：堵先生：0371-65716635 13663718969培育方式：母本：为 C-ES 型细胞质不育，对郑 58 转了胞质不育基因。父本：C 型恢复系，属于一对恢复基因控制，因回交时 1：1 分离，自交时 3：1 分离；新 40 的 一对恢复基因转到昌 7-2。
