《缩宫素粗品的分离纯化新工艺研究（学位论文-工学）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《缩宫素粗品的分离纯化新工艺研究（学位论文-工学）（74页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、学号： 200908302005 分类号： Q949.2硕 士 学 位 论 文缩 宫 素 粗 品 的 分 离 纯 化 新 工 艺 研 究Study on the separation and purification newprocess of Oxytocin crude研 究 生 姓 名 ： 宋 茂 谦指 导 教 师 ： 王 长 海 教 授学 科 门 类 ： 工 学专 业 名 称 ： 生 物 化 工论 文 提 交 日 期 ： 2012 年 5 月烟台大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本 人 郑 重 声 明 ： 所 呈 交 的 学 位 论 文 ， 是 本 人 在 导 师 的 指
2、导 下 ， 独 立 进 行 研 究 工作 所 取 得 的 成 果 。 除 文 中 已 经 注 明 引 用 的 内 容 外 ， 本 论 文 不 含 任 何 其 他 个 人 或 集 体已 经 发 表 或 撰 写 过 的 作 品 或 成 果 。 对 本 文 的 研 究 做 出 重 要 贡 献 的 个 人 和 集 体 ， 均 已在 文 中 以 明 确 方 式 标 明 。 本 声 明 的 法 律 结 果 由 本 人 承 担 。论 文 作 者 签 名 ： 日 期 ： 年 月 日学位论文使用授权说明本 人 完 全 了 解 烟 台 大 学 关 于 收 集 、 保 存 、 使 用 学 位 论 文 的 规 定 ，
3、 即 ： 按 照 学 校要 求 提 交 学 位 论 文 的 印 刷 本 和 电 子 版 本 ； 学 校 有 权 保 存 学 位 论 文 的 印 刷 本 和 电 子 版 ，并 提 供 目 录 检 索 与 阅 览 服 务 ； 学 校 可 以 采 用 影 印 、 缩 印 、 数 字 化 或 其 它 复 制 手 段 保存 论 文 ； 在 不 以 赢 利 为 目 的 的 前 提 下 ， 学 校 可 以 公 布 论 文 的 部 分 或 全 部 内 容 。（ 保 密 论 文 在 解 密 后 遵 守 此 规 定 ）论 文 作 者 签 名 ： 导 师 签 名 ：日 期 ： 年 月 日摘 要缩 宫 素 是 哺 乳
4、 动 物 和 人 垂 体 后 叶 激 素 的 主 要 成 分 之 一 ， 临 床 主 要 用 于 引 产 、 促使 排 乳 、 子 宫 复 位 不 良 及 预 防 产 后 出 血 等 。 缩 宫 素 的 生 产 ， 过 去 主 要 通 过 对 猪 、 牛脑 垂 体 的 组 织 提 取 进 行 ， 现 阶 段 主 要 通 过 固 相 合 成 的 方 法 进 行 。 无 论 是 组 织 提 取 还是 化 学 合 成 的 缩 宫 素 粗 品 都 需 要 进 行 分 离 纯 化 ， 只 有 纯 度 达 到 一 定 的 要 求 才 可 以 作为 药 品 使 用 。 目 前 ， 缩 宫 素 的 分 离 纯
5、 化 主 要 采 用 两 步 反 相 色 谱 的 方 法 进 行 ， 该 方 法由 于 反 相 介 质 和 流 动 相 的 成 本 较 高 以 及 介 质 损 耗 严 重 等 导 致 分 离 纯 化 成 本 很 高 ， 分离 纯 化 成 本 占 到 缩 宫 素 产 品 成 本 的 二 分 之 一 左 右 。 因 此 ， 开 发 高 效 、 廉 价 的 分 离 纯化 方 法 对 缩 宫 素 甚 至 多 肽 的 发 展 都 有 着 十 分 重 要 的 意 义 。 本 研 究 以 两 种 常 用 的 氢 键吸 附 介 质 作 为 分 离 纯 化 介 质 ， 对 固 相 合 成 缩 宫 素 粗 品 进
6、 行 了 分 离 纯 化 研 究 ， 建 立 了聚 酰 胺 脱 盐 、 Superose 12 纯 化 的 生 产 工 艺 。 该 方 法 相 对 于 传 统 反 相 色 谱 的 方 法 具 有介 质 便 宜 、 容 易 清 洗 再 生 和 介 质 利 用 率 高 等 的 特 点 ， 并 且 分 离 过 程 多 使 用 水 和 酸 作为 流 动 相 ， 分 离 纯 化 成 本 很 低 ， 并 且 安 全 环 保 。 具 体 研 究 内 容 和 结 果 如 下 ：（ 1） 建 立 了 缩 宫 素 的 反 相 高 效 液 相 色 谱 分 析 方 法 。 具 体 色 谱 条 件 为 ： Shimad
7、zuLC-10AT HPLC 系 统 ； Agilent Eclipse XDB-C18 色 谱 柱 ； 流 动 相 A： 5%ACN+0.1%TFA，流 动 相 B： 90%ACN+0.1%TFA； 梯 度 ： 020min， 20%50%B； 流 速 1.0 ml/min； 柱温 20 ； 检 测 波 长 215nm；进样量 20l。 该 方 法 和 传 统 反 相 高 效 液 相 色 谱 对 多 肽 的分 析 方 法 相 比 ， 可 以 在 较 短 的 时 间 内 得 到 较 高 的 分 辨 率 。 适 合 于 缩 宫 素 固 态 粗 品 、液 态 粗 品 以 及 分 离 纯 化 后 缩
8、 宫 素 样 品 的 分 析 。（ 2） 在 聚 酰 胺 色 谱 柱 上 通 过 不 同 浓 度 乙 腈 对 缩 宫 素 标 准 品 的 等 度 洗 脱 ， 对 缩 宫素 在 聚 酰 胺 色 谱 柱 上 的 保 留 机 理 进 行 了 讨 论 ， 缩 宫 素 在 聚 酰 胺 上 的 保 留 为 氢 键 吸 附和 疏 水 作 用 共 同 作 用 的 模 式 。（ 3） 建 立 并 优 化 了 缩 宫 素 固 态 粗 品 的 聚 酰 胺 纯 水 等 度 洗 脱 粗 分 离 的 方 法 ， 该 方法 对 固 态 粗 品 可 以 实 现 很 好 的 脱 盐 和 一 定 的 粗 分 离 效 果 。 在
9、优 化 后 的 分 离 条 件 下 ，对固态粗品的粗分离纯度可达 65.8%，回收率为 72.1%。和传统的中低压反相 C18的 脱 盐 粗 分 离 比 ， 分 离 效 果 相 当 ， 但 聚 酰 胺 的 方 法 具 有 更 高 的 样 品 载 量 ， 和 更 低 的分 离 纯 化 成 本 ， 并 且 有 利 于 环 境 的 保 护 。（ 4） 对 缩 宫 素 在 Superose 12 色 谱 柱 上 的 吸 附 机 理 进 行 了 讨 论 ， 缩 宫 素 在ISuperose 12 上 的 保 留 为 氢 键 吸 附 和 离 子 作 用 的 混 合 模 式 。 并 建 立 了 醋 酸 梯
10、度 洗 脱 对缩 宫 素 粗 品 的 分 离 纯 化 方 法 。（ 5） 对 缩 宫 素 固 态 和 液 态 粗 品 的 直 接 一 步 Superose 12 分 离 纯 化 结 果 表 明 ， 粗品 中 的 盐 类 对 Superose 12 的 分 离 纯 化 有 较 大 的 影 响 ， 使 用 Superose 12 对 缩 宫 素 粗 品进 行 分 离 纯 化 时 ， 必 须 对 样 品 进 行 脱 盐 处 理 。（ 6） 建 立 了 聚 酰 胺 脱 盐 、 Superose 12 纯 化 两 步 法 对 缩 宫 素 粗 品 的 分 离 纯 化 的 方法 ， 在 最 优 的 Supe
11、rose 12 进 样 条 件 下 ， 对 聚 酰 胺 脱 盐 样 品 的 纯 化 纯 度 可 达 95.4%，回 收 率 达 87.9%， 总 回 收 率 为 63.4%。关键词： 缩 宫 素 ； 纯 化 ； 聚 酰 胺 ； 高 交 联 琼 脂 糖 ； 混 合 模 式 色 谱IIAbstractOxytocin is one of the main components of the posterior lobe hormones in mammalsand human pituitary, mainly used for clinical induction of labor, promp
12、ted milk ejection,the prevention of postpartum hemorrhage and the uterus malreduction and others. In thepast, to produce Oxytocin mainly by swine, bovine pituitary tissue extracte, now, mainlythrough the solid phase peptide synthesis method. No mater how the Oxytocin was got,tissue extraction or che
13、mical synthesis, the crude product should be isolated and purified,only the purity of Oxytocin reached certain requirements, they can be used as a medicine.Nowadays, the separation and purification of Oxytocin mainly using two-stepreversed-phase chromatography method, because of the medium and mobil
14、e phase is veryexpensive as well as the dielectric loss of the media, the separation and purification costsabout half of the oxytocin product cost. Therefore, the development of efficient, low-costseparation and purification methods for oxytocin or even peptides have a greatsignificance. In this stu
15、dy, two common hydrogen bond adsorption media have been usedas the separation and purification media, the method isolation and purification of the solidphase synthesised oxytocin crude using polyamide desalting and Superose 12 purificationhas been established. This method compared to traditional rev
16、ersed-phase chromatographymethod, this method the media cost is cheap, easy to clean and high utilization ofrenewable media and the separation process only use water and acetate acid as the mobilephase, the separation and purification cost is very low, and also safety and environmentalprotection. The specific contents and mainly results are as follows:(1) Established reversed-phase high performance liquid chromatographic methodanalysi
