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1、黑茶液发酵冠突散囊菌条件的探索收稿日期： 基金项目： 西安文理学院大学生创新训练项目 。通信作者： 赵咏梅。马 雯，齐建红， 赵咏梅， 吴 媛（ 西安文理学院 生物技术学院， 陕西 西安 ）摘 要： 从茯砖茶中分离纯化冠突散囊菌， 以添加不同浓度蔗糖的黑茶汁为培养液培养菌体， 测定菌丝干重筛选最佳蔗糖浓度； 以四因素三水平的正交试验实验， 筛选黑茶液发酵冠突散囊菌的最佳条件。结果显示，培养液蔗糖浓度为， 黑茶含量为 时， 菌丝体生长最快； 当发酵条件为初始 、 培养温度 、 接种量 、 摇瓶转数 ， 培养 时， 测得的菌丝体干重最大， 浓度为 。关键词： 冠突散囊菌； 正交试验； 液态发酵条件
2、； 菌丝体干重冠突散囊菌是茯砖茶在特定温湿度条件下， 经渥堆、 发酵及特有的“ 发花” 工序产生的金黄色菌体闭囊壳小点。冠突散囊菌在茯砖茶中生长，一方面吸收利用茶叶中的有效成分作为自身生长发育的营养， 另一方面又通过自身的代谢， 产生一系列有益于人体健康的各类小分子化合物。研究表明， 冠突散囊菌在渥堆发酵及加工过程中产生的多酚氧化酶、 果胶酶、 纤维素酶、 蛋白酶等能催化茶叶中各种相关物质发生茶多酚的氧化， 氨基酸、 咖啡碱、 糖类等各成分之间的聚合、 缩合， 蛋白质和纤维素等大分子的分解， 转化等一系列的复杂反应， 从而形成了茯砖茶特有的品质风味， 改善了茶的品质。同时， 冠突散囊菌发酵液可
3、促进 淀粉酶对淀粉的酶解、 胃蛋白酶和胰蛋白酶对 蛋白质的酶解， 有利于淀粉、 蛋白质消化吸收， 改善人体肠道功能， 并能有效抑制脂肪在消化系统中的降解和吸收。但茯砖茶的生产周期过长、 加工工艺较复杂，而且生产中对冠突散囊菌的菌落数量无法控制，导致茯砖茶的营养价值打折， 品质难以保证。本研究通过从茯砖茶中分离出冠突散囊菌， 并进行发酵条件优化试验， 以期将茯砖茶生产与现在生物发酵技术相结合， 研究出最佳发酵工艺， 缩短其生产周期， 增加茯砖茶中“ 发花” 数量， 提高茯砖茶品质。 材料与方法 实验材料 茯砖茶由本实验室提供， 安化黑茶， 购自西安市茶叶市场。 实验方法 冠突散囊菌的分离和提纯
4、挑取茯砖茶上的 黄 色 闭 囊 壳 接 种 于 平 板 培 养 基 上， 培养， 待菌落在平板上生长进入旺盛期时， 挑取少量黄色闭囊壳进行平板划线，次划线分离 后得到初纯化的冠突散囊菌； 从培养 的划线平板上选取单菌落， 制备均匀孢子液， 进行 倍等递增稀释， 经 倒置培养， 选取只长个单菌落的平板， 该单菌落即纯培养。 黑 茶 浸 提 液 的 制 备 参 照 。 孢子悬液的制备 取纯培养的冠突散囊菌， 无菌水悬浮， 震荡， 制得均匀孢子悬液， 使孢子浓度为 个 。 蔗糖对黑茶液中冠突散囊菌生长的影响将 ， ， 浓度的蔗糖分别加入黑 茶含量为 ， ， 的黑茶汁中， 制备液体培养各 ， 灭菌 。
5、加入上述孢子悬液 ， ， ， 恒温振荡培养 。滤纸过滤菌丝， 恒温烘干至恒重并测量干重。 发酵条件优化试验 以添加 蔗糖， 黑茶的黑茶汁为培养基， 以发酵液的初始 值、 培养温度、 接种量和摇瓶转数作为试验因素， 进行四因素三水平的正交试验（） ） ， 因素水平见表。试验采用 三角瓶（ 每瓶装培养液 ） 置于旋转式恒温摇床培养 ， 以菌丝干重为指标分析实验结果优化发酵条件。 （）陕 西 农 业 科 学表 发酵条件因素水平水平（） 初始 （） 培养温度（）（） 接种量（ ）（） 摇瓶转数 结果与分析 蔗糖浓度与黑茶用量对菌丝体干重的影响 用黑茶含量为 ， ， 的黑茶汁， 蔗糖浓度为 ， ， 的液
6、体培养基培养冠突散囊菌的孢子悬液 后， 测得的菌丝干重如表所示。表 不同含量的蔗糖培养基对菌丝体的影响（）蔗糖浓度黑茶含量 黑茶含量 黑茶含量 注： 表中数据为次重复的平均值。表中数据表明， 当蔗糖浓度递增时， 菌丝干重随黑茶用量的增加而增加。当黑茶用量 ，蔗糖浓度 时， 菌丝生长最快， 培养液 中， 称得菌丝干重为 ， 为最大值， 因此液态培养基的最佳搭配为： 黑茶用量 ， 蔗糖浓度 。 发酵条件的正交试验结果 以发酵液的初始 值、 培养温度、 接种量和摇瓶转数作为试验因素， 进行四因素三水平的正交试验（） ） ， 正交试验结果见表。通过极差分析， 可以得出初始 最为影响冠突散囊菌的生长，
7、其次是培养温度， 然后是摇瓶转数， 接种量的影响最小。表 液体发酵条件正交试验结果试验编号因素因素因素因素菌丝干重（） 正交实验的效应曲线 通过图的效应曲线图可以看出， 最佳的培养条件组合是， 即初始 值 、 培养温 度 、接 种 量 、摇 瓶 转 数 ， 该条件下培养 ， 测得菌丝体干重浓度为 。图 冠突散囊菌液体发酵正交实验的效应曲线（ 下转第 页）陕 西 农 业 科 学 （）“ 产量” 指标改为“ 产量和产油量” 并重的指标 ，所以高产和高含油量就成了育种的关键目标， 在保持高产的同时提高杂种的含油量， 使产油量提高变的更有意义。在实际操作中， 由于含油量受到母性遗传的影响， 改良一个含
8、油量较高的保持系比较难， 更多的是通过提高父本恢复系的含油量来提高组合含油量， 而化学诱导授粉系统 ， 容易得到一个含油量较高的双亲， 所以测配的组合含油量相对就较高， 但是细胞质雄性不育授粉系统所测配的组合产量较高这个特性不能忽视， 如何将二者的优点有效的结合起来成了今后一个新的选育方法。当含油量 提 高 十 个 百 分 点， 其 产 量 相 当 于 提 高 ， 利用高油资源， 发挥杂交种产油量的增产潜力， “ 秦优号” 是近年来中国适应区域最广， 年推广面积最大的 双低优质油菜杂交种， 唯有含油量较低（ ） ， 李殿荣研究员通过对 “ 秦优号” 杂交种进行化学诱导雄性不育， 再用配合力高、
9、 新的高油恢复系（ 含油量 左右） 配制杂交组合 ， 将两种授粉系统很好的结合起来应用到选育新品种中。随着“ 轻简化收获” 课题的提出， 在今后的育种中， 以“ 理想株型杂种优势”和“ 化学诱导雄性不育高油种质杂种优势利用”的选育模式相结合， 通过应用和两种授粉系统， 选育出适合机械化生产和高产的油菜新品种。参 考 文 献： 俞琦英， 刘凤兰， 张冬青 年中国冬油菜区试品种品质及产量性状的演变中国农学通报， ， （ ） ： 王汉中我国油菜产需形势分析及产业发展对策 中国油料作物学报， ， （） ： 祝利霞， 张冬晓， 傅廷栋 等 年来中国冬油菜新品种产量和抗病性状分析 中国农学通报， ， （
10、） ： 沈金雄， 傅廷栋 我国油菜生产、 改良与食用油供给安全 中国农业科技导报， ， （） ： 傅廷栋杂交油菜的育种与利用武汉： 湖北科学技术出版社， ： 尚毅， 李殿荣， 李永红 等我国油菜化学杀雄细胞质雄性不育的应用研究 西北农业学报， ， （） ： 李殿荣杂交油菜秦油二号论文集北京， 农业出版社， ， ： 中国农技推广编辑部 高含油量油菜新品种中油 中国农技推广， ， （ ） ： 傅寿仲， 张洁夫， 戚存扣 等 甘蓝型油菜高含油量种质选 育 研 究中国油 料作物学 报， ， （） ： 李殿荣， 田建华， 陈文杰 等甘蓝型油菜特高含油量育种技术与资源创新西北农业学报 ， （ ） ： 陈新
11、军， 戚存扣， 张洁夫， 等化学杀雄剂号在甘蓝型油菜上的应用江苏农业科学， ， （） ： 刘绚霞， 董振生， 刘创社， 等新型油菜化学杀雄剂 的杀雄效果与应用研究初报西北农业学报， ，（） ： 于澄宇甘蓝型油菜授粉控制系统研究现状与前景西 北 农 林 科 技 大 学 学 报， ， （） ： 中华人民共和国农业部 农作物规范（ 油菜） 北京： 中国标准出版社， 李殿荣， 李永红， 任军荣 等油菜高油种质化学诱导雄性不育杂优利用模式及其应用技术研究西北农业学报， ， （ ） ：櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨 （ 上接第 页） 讨论冠突散囊菌是茯砖茶生产过程中的优势菌，是形成茯砖茶独特品质的主要因素。冠突散囊菌生长的培养条件不太高， 比较容易适应环境， 而且结果显示冠突散囊菌在黑茶浸提液 、 蔗糖的培养基下， 最优发酵条件为： 初始 、培养温度 、
