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1、ISO15189 质量管理体系范本文件（第四册） 免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-0152 第 A 版 编制： 审核： 批准： 生效日期：2015年 4月 8日 ABCD人民医院检验科文件编号： ABCD人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本/修订号：A/0 生效日期：20150408 主题内容 目 录 第 2 页 共 178 页目 录 序号 主 题 内 容 代 号 页 号 1 血清乙型肝炎病毒表面抗原检测 ABCD-3-MY-01 6 2 血清乙型肝炎病毒表面抗体检测 ABCD-3-MY-02 9 3 血清乙型肝炎病毒e抗原检测 ABCD-3-MY-03 12 4 血清乙型肝炎
2、病毒e抗体检测 ABCD-3-MY-04 15 5 血清乙型肝炎病毒核心抗体检测 ABCD-3-MY-05 18 6 甲型肝炎病毒-IgM检测 ABCD-3-MY-06 21 7 血清丙型肝炎病毒抗体检测 ABCD-3-MY-07 24 8 血清麻疹IgM抗体试验 ABCD-3-MY-08 28 9 人类免疫缺陷病毒抗体检测 ABCD-3-MY-09 31 10 梅毒甲苯胺红不加热血清试验 ABCD-3-MY-10 34 11 梅毒螺旋体特异性抗体检测 ABCD-3-MY-11 36 12 免疫球蛋白A（IgA）测定 ABCD-3-MY-12 39 13 免疫球蛋白 M（IgM）测定 ABCD
3、-3-MY-13 42 14 免疫球蛋白G（IgG）测定 ABCD-3-MY-14 45 15 补体C3测定（免疫比浊法） ABCD-3-MY-15 48 16 补体C4测定（免疫比浊法） ABCD-3-MY-16 51 17 类风湿因子（RF）测定 ABCD-3-MY-17 54 18 抗链球菌溶血素O（ASO）测定 ABCD-3-MY-18 56 19 C反应蛋白（CRP）测定 ABCD-3-MY-19 58 20 C反应蛋白（CRP）定量测定 ABCD-3-MY-20 60 21 支原体肺炎血清学试验 ABCD-3-MY-21 63 22 D二聚体检测（胶乳凝集法） ABCD-3-MY-
4、22 65 23 甲胎蛋白（AFP）定量测定 ABCD-3-MY-23 68文件编号： ABCD人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本/修订号：A/0 生效日期：20150408 主题内容 目 录 第 3 页 共 178 页24 癌胚抗原（CEA）定量测定 ABCD-3-MY-24 72 25 糖链抗原125（CA125）定量测定 ABCD-3-MY-25 76 26 CA153定量测定 ABCD-3-MY-26 80 27 糖链抗原199（CA199）定量测定 ABCD-3-MY-27 84 28 F-PSA定量测定 ABCD-3-MY-28 88 29 T-PSA定量测定 ABCD-3-M
5、Y-29 92 30 B12定量测定 ABCD-3-MY-30 96 31 铁蛋白定量测定 ABCD-3-MY-31 100 32 叶酸（Folate）定量测定 ABCD-3-MY-32 104 33 人绒毛膜促性腺激素定量测定 ABCD-3-MY-33 108 34 血(尿)b2-MG微球蛋白定量测定 ABCD-3-MY-34 112 35 肌红蛋白定量测定 ABCD-3-MY-35 116 36 肌钙蛋白-I定量测定 ABCD-3-MY-36 120 37 CK-MB定量测定 ABCD-3-MY-37 124 38 HBsAg半定量测定 ABCD-3-MY-38 128 39 HBsAb定
6、量测定 ABCD-3-MY-39 131 40 HBeAg半定量测定 ABCD-3-MY-40 135 41 HBeAb半定量测定 ABCD-3-MY-41 138 42 HBcAb半定量测定 ABCD-3-MY-42 141 43 HBcAb-IgM半定量测定 ABCD-3-MY-43 144 44 CMV-IGM半定量测定 ABCD-3-MY-44 147 45 RUBELLA-IGM 半定量测定 ABCD-3-MY-45 150 46 微量加样器的质控 ABCD-3-MY-46 154 47 酶标分析仪操作维护规程 ABCD-3-MY-47 157 48 全自动酶标洗板机操作维护规程 A
7、BCD-3-MY-48 159文件编号： ABCD人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本/修订号：A/0 生效日期：20150408 主题内容 目 录 第 4 页 共 178 页49 特种蛋白测定仪操作维护规程 ABCD-3-MY-49 160 50 AxSYM 免疫分析仪操作维护规程 ABCD-3-MY-50 165 51 免疫学室内质量控制操作程序 ABCD-3-MY-51 169 52 免疫学检验室间质量评价（EQA） ABCD-3-MY-52 174文件编号： ABCD 人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本/修订号：A/0 生效日期：20150408 主题内容 目 录 第 5 页 共
8、 178 页修 订 页 序号 文件编号 页码 需更改的内容 更改内容 批准人 批准日期 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21文件编号：ABCD-3-MY-01ABCD 人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本/修订号：A/0 生效日期：20150408 主题内容 血清乙型肝炎病毒表面抗原检测 第 6 页 共 178 页血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA） 1. 原理 在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（ HBsAb-HRP）及 TMB等其它试 剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗（ HBsA
9、g） 。 2. 标本采集 2.1 采集前病人准备：受检者应空腹 2.2 标本种类：血清或血浆 2.3 标本要求：采集病人静脉血 3ml（可用 EDTA抗凝），室温放置不超过 4小时，分离血清 备用。 3. 标本储存： 2-8保存不应超过 1周，-20不应超过 3个月，-70长期保存，应避免反 复冻融。 4. 标本运输：密封，室温运输。 5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。 6. 试剂 6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒 6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。 6.3 包装规格： 96Test/Kit 6.4 试剂盒组成： HBsA
10、g微孔板， HBsAg酶标记抗体， HBsAg阳性对照血清， HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液， 底物 A，底物 B，终止液，封口膜，自封袋。 6.5 试剂储存条件及有效期： 2-8避光保存，有效期 9个月。 7. 仪器设备 7.1 仪器名称：自动酶标仪 7.2 仪器厂家： Rayto 7.3 仪器型号： RT-2100 8. 操作步骤 8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（ 18-25） ，微孔板开封后，余者及时以自封 袋封存。 8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解） ，浓缩洗涤液和蒸馏水或去文件编号：ABCD-3-MY-01ABCD 人民医院检验科 免疫室作
11、业指导书 版本/修订号：A/0 生效日期：20150408 主题内容 血清乙型肝炎病毒表面抗原检测 第 7 页 共 178 页离子水按 1：19稀释后使用。 8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。 8.4 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各 50l于相应孔中。 8.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体 50l，轻拍混匀。 8.6 温育：置 37温育 60分钟，室温平衡 5分钟。 8.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤 5次，洗涤完扣干（每次应保持 30-60秒的浸泡时间）。 8.8 显色：每孔加入底物 A、B各 50l，轻拍混匀，置 37暗处 15分钟。 8.9 终止：每孔加终止
12、液 50l，混匀。 8.10测定：用酶标仪单波长 450nm或双波长 450/630nm测定各孔 OD值（用单波长测定时需 设空白对照一孔， 30分钟内完成测定，并记录结果） 。 9. 结果判断与分析 9.1 临界值（ C.O.）的计算：临界值 =阴性对照孔 OD值 N2.1，阴性对照 OD均值大于 0.1时应重新试验，小于 0.05时以 0.05计算。 9.2 结果判定：样品 OD值 S/C.O=1者为 HBsAg阳性 样品 OD值 S/C.O1者为 HBsAg阴性 10. 质量控制 每次试验用含 2ng/mlHBsAg的质控血清同步检测，以 S/CO值绘制质控图， S/CO值应在 控制范围
13、内；如失控 ，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确， 直至重新试验使其在控 。 11.参考范围：阴性 12.临床意义 ：在血清中 HBsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。 13.操作性能 ：灵敏度为 ng/ml，特异性高 。 14.方法局限性 14.1. 对于病毒复制较强的病人 ，病毒量较大 ，出现 HOOK现象，造成假阴性 ，须将病人血 清进行稀释后再重新试验。 14.2. 如出现跳孔现象 可能造成假阳性。 14.3. 样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。 15. 注意事项 15.1. 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样
14、品及酶标记抗体，其余各步相同。 15.2. 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。 15.3. 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去 12滴。滴文件编号：ABCD-3-MY-01ABCD 人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本/修订号：A/0 生效日期：20150408 主题内容 血清乙型肝炎病毒表面抗原检测 第 8 页 共 178 页加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。 15.4. 所有样品都应按传染源处理。 15.5. 封口膜使用说明 15.5.1. 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在 封
15、存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。 15.5.2. 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。 15.6. 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。 16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施 ：应保证所有操作步骤正确无误；可 以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。 17. 参考文献 ：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版） 410- 412页。 18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有 “检定合格 ”防伪标签的 试剂。文件编号：ABCD-3-MY
16、-02ABCD 人民医院检验科 免疫室作业指导书 版本/修订号：A/0 生效日期：20150408 主题内容 血清乙型肝炎病毒表面抗体检测 第 9 页 共 178 页血清乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA） 1. 原理 在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原，配以酶标记抗原（ HBsAg-HRP）及 TMB 等其它 试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（ HBsAb） 。 2. 标本采集 2.1 采集前病人准备：受检者应空腹 2.2 标本种类：血清或血浆 2.3 标本要求：采集病人静脉血 3ml（可用 EDTA抗凝），室温放置不超过 4小时，分离血清 备用。 3. 标本储存 ：2-8保存不应超过 1周，-20不应超过 3个月，-70长期保存，应避免反 复冻融。 4. 标本运输 ：密封，室温运输。 5. 标本拒收标准 ：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。 6. 试剂 6.1 试
