《2016-2017学年高中生物 第1章 微生物培养技术 第1节 微生物的分离和纯培养教案 中图版选修1》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2016-2017学年高中生物 第1章 微生物培养技术 第1节 微生物的分离和纯培养教案 中图版选修1（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1 第一节 微生物的分离和纯培养 一、培养基 1含义 由于微生物代谢方式的不同，因而对营养物质的需求也是有差异的。根据微生物生长 繁殖和代谢的需要，将各种营养物质混合在一起而配制的营养基质。 2平板培养基 将溶化后的固体培养基基质倒入无菌培养皿中，冷却凝固后制成的培养基。 二、无菌技术 1目的和要求 在微生物的分离和纯培养中，一定不能有外来的污染性杂菌，所以必须采用无菌技术 进行操作。因此，在实验过程中，要对所用的器材、培养基进行严格的灭菌，对工作场所 要进行消毒。 2灭菌和消毒 (1)灭菌：用强烈的理化因素杀死环境或物体内外所有的微生物，常用的方法是高温灭 菌法。 (2)消毒：用相对温和的理
2、化方法杀死环境或物体上的病原微生物和有害微生物的营养 细胞，常用的方法是射线消毒法和化学药剂消毒法。 三、接种技术 1含义 把相应的研究对象移入培养基中的过程。 2分类 在平板培养基上接种的方法有平板划线法、稀释平板涂布法、稀释混合平板法等。 预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中2 问题1 问题2 问题3 问题4 一、微生物的概念及特点 1概念 微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。 2特点 微生物Error! 微生物Error! 二、微生物的营养及功能 微生物的化学组成成分与其他生物大体相同，也是由C、H、O、N、P、S等元素组成， 其中C、H、O、N占细胞干重
3、的90%以上，这些元素最终来自外界环境中的各种无机化合物 和有机化合物。这些化合物可归纳成碳源、氮源、生长因子、无机盐和水这五大类营养要 素。 营养 物质 定义 作用 主要来源 碳源 凡能提供所需碳元素的物 质 构成生物体的细胞物质和 一些代谢产物，有些是异 养生物的能源物质 无机化合物：CO 2 、NaHCO 3 等；有机化合物：糖类、 脂肪酸、花生粉饼、石油 等 氮源 凡能提供所需氮元素的物 质 合成蛋白质、核酸以及含 氮的代谢产物 无机化合物：N 2 、NH 3 、铵 盐、硝酸盐；有机化合物： 尿素、牛肉膏、蛋白胨等 生长 因子 生长必不可少的微量有机 物 酶和核酸的组成成分 维生素、氨
4、基酸、碱基等 水 在生物体内含量很高，在 低等生物体内含量更高 不仅是优良的溶剂而且可 维持生物大分子结构的稳 定 外界摄入3 无机 盐 为微生物提供除碳、氮以 外的各种重要元素，包括 大量元素 细胞内的组成成分，生理 调节物质，某些化能自养 菌的能源，酶的激活剂 无机化合物 微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。 在微生物所需要的化合物中需要量最大的是碳源，新陈代谢同化作用类型的划分也 是根据是否能合成含碳有机物为依据，能合成含碳有机物的是自养型，反之则为异养型。 对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源又是氮源、能源。 微生物之所以需要补充生
5、长因子，往往是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成 能力有限。一些天然物质如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等可为微生物提供生长因 子。 三、大肠杆菌的分离方法和实验过程 1实验原理 微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上， 样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基 上，经培养后，即可得到一个微生物的纯种。 2材料用具 培养1624 h的大肠杆菌(E.coli)培养液，灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基斜面和平 板，盛有9 mL无菌水的试管，无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环等。 3方法步骤 微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培
6、养三个步骤。 微生物分离操作流程图 (1)稀释 用1 mL无菌吸管吸取 1 mL大肠杆菌培养液，加入到盛有9 mL无菌水的大 试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1 mL加入另一支盛有9 mL无菌水的 试管中，混合均匀，依次制成10 1 、10 2 、10 3 、10 4 、10 5 、10 6 系列稀释度的大肠杆 菌稀释液。 (2)划线或涂布4 平板划线分离法：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，沾取大肠杆菌培养液在 平板上划线，常用的划线方法有交叉划线和连续划线两种(如下图)。交叉划线时，每转一 个角度烧一次接种环。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。 划线法示意图 涂布分离法
7、：取3个平板，底面分别用记号笔写上10 4 、10 5 和10 6 三种稀释度， 然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1 mL，放入已标记好的平板上，用无菌 玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置510 min，使菌悬液吸附进培养基 (如下图)。 涂布法示意图 (3)培养 将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37 培养1624 h，即可 长出单个的菌落。 四、平板划线操作应注意的问题 第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每 次灼烧目的如下表： 第一次灼烧 每次划线之前灼烧 划线结束灼烧 目的 避免接种环上可能存在的 微生物污染培养物
8、杀死上次划线结束后接种 环上残留的菌种，使每次 划线的菌种来自上次划线 末端 杀死接种环上残留的菌种， 避免细菌污染环境和感染 操作者 灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 划线时最后一区域不要与第一区域相连。 画线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。5 培养基的营养成分下表是某微生物实验室的培养基配方。据表回答： 编号 成分 含量 (NH 4 ) 2 SO 4 0.4 g KH 2 PO 4 4.0 g FeSO 4 0.5 g CaCl 2 0.5 g H 2 O 100 mL (1)上表中培养基可培养的微生物类型是_。 (2)此培养液能否用于植物的无土栽
9、培？_，理由是_，若用于无土栽 培，还应注意培养液中_的含量。 (3)若除去，加入(CH 2 O)，该培养基可用于培养_。 【解析】 培养基中未提供碳源，据此可判定该生物应为自养型，但对植物来说，无 土栽培时所用培养液必须是全素培养液(即含所有必需元素)，因此，该培养液不可直接用 于植物的无土栽培。从培养基中除去(NH 4 ) 2 SO 4 (氮源)，加入(CH 2 O)(有机碳源)，该培养基 可用于培养固氮微生物。 【答案】 (1)自养型微生物 (2)不能 缺乏Mg等矿质元素 氧气 (3)固氮微生物 自养微生物和异养微生物的营养比较 微生物 自养型微生物 异养型微生物 碳源 CO 2 、Na
10、HCO 3 糖类、脂肪酸等 氮源 NH 3 、铵盐、硝酸盐等 铵盐、硝酸盐、蛋白质等 生长因子 一般不需要 有些种类需要 举例 硝化细菌 乳酸菌6 1关于培养基配制的说法不正确的是( ) A配制的培养基需要进行灭菌 B微生物的适应性强，配制培养基时可以不考虑pH C虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和无机盐 D配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例 【解析】 pH影响微生物的生长、代谢和繁殖，因此配制培养基时pH一定要适宜。 【答案】 B 微生物的纯化氯苯化合物是重要的有机化工原料，不易降解，会污染环境。某研究 小组依照下列实验方案(如图)筛选出能高效降解氯苯的微生物SP
11、1菌，培养基配方如表。 图a 表b 培养基的组成 液体 培养基 蛋白胨 牛肉膏 氯苯 氯化钠 硝酸铵 无机盐 (无碳) 蒸馏 水 号 10 g 5 g 5 mg 5 g 1 L 号 50 mg 5 g 3 g 适量 1 L 号 20 80 mg 5 g 3 g 适量 1 L 下列有关说法正确的是( ) A图中有筛选作用的只有号培养基 B号、号培养基中无碳源只能培养自养微生物 C、号培养基中氯苯含量逐渐增加，是为了逐步选择降解氯苯能力强的微生 物 D微生物中原来就存在能降解氯苯的SP1菌，因此可以直接用号培养基进行一次性 选择 【审题导析】7 【精讲精析】 、号培养基都对SP1菌有筛选作用；从培
12、养基配方可以看出， 、号培养基的碳源为氯苯；号培养基中氯苯的含量太高，直接使用，可能无法得到 SP1菌(自然状态下具高效降解能力的变异很少)。 【答案】 C 2上题将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的号培养基中培养，得到生长曲线(如下图)， 下列叙述不正确的是( ) A随着氯苯含量升高，SP1菌体数增多 B在20 mg/L氯苯的培养基中菌体数最先达到最高 C氯苯为SP1菌提供碳源 DSP1菌在只含氯苯的培养基中就可以生长 【解析】 培养基中除了含有氯苯外，还应含有氮源、无机盐等营养物质。 【答案】 D 1据食品产业网报道，近些年出现的一种膨化食品，合格率仅为76.2%，这两年不断 有名牌企业出现食
13、品质量问题，其主要原因大部分为铝含量超标，以及微生物超标。下列 关于微生物的叙述中，正确的是( ) A所有的微生物都是形体微小、结构简单、对人类有害的 B微生物包含了除动物界、植物界的其他生物 C微生物的结构简单到没有细胞核 D微生物的结构简单到没有细胞结构 【答案】 B 2有关平板划线法操作的叙述不正确的是( ) A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物8 B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种 C在每一区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 D划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染 操作者 【解析】
14、在用平板划线法分离大肠杆菌的实验中，接种环取菌种前灼烧的目的是为 了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上 次划线后残留的菌种；划线结束后仍需灼烧接种环，是为了避免细菌污染环境和感染操作 者。从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。 【答案】 C 3(2016全国乙卷改编)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某 研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布 情况。实验步骤如下： 配制培养基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H 2 O)； 制作无菌平板； 设置空白对照组和若干实验
15、组，进行相关操作； 将各组平板置于37 恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。 回答下列问题： (1)该培养基中微生物所需的氮来源于_。若要完成步骤，该培养基中的成 分X通常是_。 (2)步骤中，实验组的操作是_。 (3)若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一 个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了_现象。 【解析】 (1)牛肉膏和蛋白胨中均含有氮元素，因此微生物所需的氮来源于牛肉膏和 蛋白胨。若要完成步骤，需要进行倒平板操作，用到的是固体培养基，所以培养基中要 有琼脂。(2)该实验的空白对照组为不进行处理的无菌平板，实验组的操作为将各无菌平板 分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露相同时间。(3)若空白对照组的平板上出现了 菌落，说明实验过程中出现了污染现象。 【答案】 (1)牛肉膏、蛋白胨 琼脂 (2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度 的位置上，开盖暴露一段时间 (3)污染 学业达标测评(一) 一、选择题 1在光亮处用一种培养液分别培养绿藻和酵母菌，其结果如图所示，造成这种结果的 原因是培养液中( )9 A缺少无机盐 B含氧量太高 C缺少有机养分 D不含二氧化碳 【解析】 绿藻(自养)增多，酵母菌(异养)数量减少，说明培养基中缺少有机碳源。 【答案】 C 2下表是某同学培养微生物时配制的培养基，关
