红霉素乳酸盐工艺规程

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1、岳阳同联药业有限公司红霉素乳酸盐工艺规程 共 26 页 第 1 页编 号 颁发部门JSB规00200 标准化办公室页 数： 共 29 页 生效日期备份数：红霉素乳酸盐工艺规程年 月 日编 订 人 审 核 人 批 准 人编订日期 审核日期 批准日期变更原因 工艺优化发送单位 生产车间、技术部、生产部、质量部、档案室目的：制订红霉素乳酸盐工艺规程范围：本标准规定了红霉素乳酸盐工艺技术过程中各项技术条件及工艺操作方法，适用于发酵、提取生产过程的工艺控制。责任人：技术总监、生产车间负责人1 产品概述1.1 产品名称a)法定名称： 红霉素乳酸盐b)英文名称：Erythromycin Lacatate1.

2、2 化学结构1.2.1 分子式：C 37H67NO13C3H6O3; 分子量：823.91.2.2 结构式本品结构式：岳阳同联药业有限公司红霉素乳酸盐工艺规程 共 26 页 第 2 页1.3 理化性质：红霉素乳酸盐是白色或类白色几乎无味的粉末,难溶于水,25溶解度 1mg/ml,易溶于乙醇，在氯仿中微溶。1.4 质量标准 红霉素乳酸盐质量标准见表 1表 1 红霉素乳酸盐质量标准性状 白色或类白色结晶，无异味水分 10.0%生物效价（湿品） 690 u/mg1.5 用途：本品主要用于红霉素精制的中间体。1.6 工艺沿革与技术依据工艺依据：生产工艺沿革采用西安制药厂、上海第三制药厂工艺路线，加以摸

3、索后制订出来的。技术依据：有关的技术数据是参考有关抗生素生产方面的资料得来的。2 原辅材料、包装材料规格、质量标准2.1 原辅材料、包装材料质量标准：原辅材料、包装材料质量标准根据其材料类别，分别按有关标准的要求执行。2.2 原辅材料、包装材料规格（见表 2）表 2 原辅材料、包装材料规格序号 名 称 规格 序号 名称 规格1 玉米浆 生物发酵 13 豆油 食用2 甲醛 工业级 14 硫酸铵 工业一级3 玉米淀粉 食用 15 液体氯化铝 工业一级4 碳酸钙 轻质 16 醋酸丁酯 工业一级5 生物氮 生物 17 乳酸 工业级6 液碱 工业级 18 红霉素溶媒 工业级7 固碱 工业一级 19 氯化

4、钠 食用8 糊精 药用 20 十二烷基苯磺酸钠 工业级9 豆粉 热榨中温 21 工业盐酸 工业一级10 有机硅油 工业一级 22 正丙醇 工业一级11 糖化酶 生化 23 乳酸稀释剂 工业级12 淀粉酶 -型 25岳阳同联药业有限公司红霉素乳酸盐工艺规程 共 26 页 第 3 页3 生产工艺流程图4. 工艺过程4.1 发酵工艺过程4.1.1 原材料配比(见表 3)表 3 原材料配比孢子斜面 种子摇瓶 小罐 中罐 发酵罐 全料罐淀粉 1.0 2.5 1.8 1.8 4.85.4 4.85.4黄豆饼粉 1.8 1.5 1.5 3.0 3.0硫酸铵 0.3 0.12 0.12 0.12 0.18 0

5、.18玉米浆 1.0 1.3 0.7 0.7 1.62.0 1.62.0氯化钠 0.3 0.3 0.3 0.3 0.65 0.65硫酸镁 0.12 - - -碳酸钙 试剂 0.25 0.6 0.5 0.5 0.7 0.7硝酸铵 0.12 - - 豆油 3 滴 0.8 0.8 0.50.7 0.50.7有机硅油 - 1.5L -孢子培养3410d16240hr孢子培养349d子瓶斜面 摇瓶培养32 48hr种子瓶测定生产力发酵培养320.5120hr发酵瓶一级种子培养液种子培养 33341:1.0vvm 以上,2432h，罐压0.04MPa种子培养33341:1.0vvm以上,2432h，罐压

6、0.04MPa二级种子培养液发酵培养 0.30.8vvm,33培养0.010.03Mpa,140160hr发酵液加液铝 37%调PH8.08.4 过滤 滤洗液加溶媒调PH9.810.2,二级逆流萃取轻液加乳酸，调 PH3.3-3.5乳酸盐淋洗烘干成品母瓶培养养岳阳同联药业有限公司红霉素乳酸盐工艺规程 共 26 页 第 4 页琼脂 2.01.6 糊精 2.5 糊精 1.2 糊精 1.2 自然 自然 自然 自然 自然 自然计料体积 50ml/500 80ml/500 600l 5t 32t 5t注：大罐配方中可用 0.8%的生物氮替化等量的黄豆饼粉4.1.2 工艺过程4.1.2.1 生产种子供应：

7、红霉素产生菌红色链霉菌(Streptomyces eryhreus)。生产上采用本厂筛选处理分离所获得的菌株为生产菌株。4.1.2.1.1 菌种表面培养特征：红霉素链霉菌在合成琼脂培养基上生长的菌落是由淡黄色变为灰褐色。色素渗透到培养基中，气生菌丝为灰褐色，孢子丝呈不紧密的螺旋状，约 35 圈饱子呈球状。4.1.2.1.2 菌种保存：生产用菌种一般用冷冻管保存,亦可用砂土孢子管、速冻管保存。a) 砂土孢子管的制备(1) 制砂土管：取洁净河沙或海沙过 4060 目筛,水洗。另取郊区两尺深处黄土水洗至中性，烘干过 80100 目筛。将砂与土除铁屑后以 2：1 或1：1 均匀分装于试管中，每管装 1

8、2g。经过 0.1MPa 压力，121间歇湿热灭菌四至五次，每次 1h，干燥后作无菌试验，合格备用。(2) 埋砂：无菌条件下每只砂土孢子管内埋孢子悬浮液 0.10.2ml。塞好棉塞后减压干燥 810h，或直接将孢子轻轻刮下与砂土搅和，塞好棉塞减压干燥 46h。(3) 保存：制好的砂土孢子管，标明菌种名称、编号、传代数及制备日期，置干燥器中密封保存于 31冰箱中。(4) 检查：制好的砂土孢子管，经无菌试验、纯度检查、摇瓶和生产罐试验，确认生产水平和成品质量不低于原株水平后可用于生产。岳阳同联药业有限公司红霉素乳酸盐工艺规程 共 26 页 第 5 页b)冷冻孢子管的制备见菌种岗位操作规程。c)孢子

9、速冻管和菌丝速冻管的制备见菌种岗位操作规程。4.1.2.1.3 斜面孢子的制备a) 斜面培养基的制备：称量各料后先将淀粉糊化，再与其它成份混合至所配体积，待调好 PH 后加入碳酸钙。分装至扁瓶，经 0.10MPa，121灭菌20min，冷却尽量减少冷凝水，摆成斜面，经 37培养 10 天，目测无菌备用。b) 母瓶斜面孢子的制备：在无菌条件下，取上述斜面培养基接种砂土饱子，要求用干接法一次接种两瓶，严防水份带入砂土管。均匀涂布，使之成单个菌落，置 34恒温培养 910 天，成熟后目测无菌，放 31冰箱保存，使用期 30 天。c) 子瓶斜面孢子的制备：在母瓶斜面孢子上挑选优质单菌落制成悬浮液接种于

10、斜面的培养基上，置 34恒温室 8.510 天，成熟后目测无菌，放置31冰箱备用。使用期 15d，保存 30d。每批新斜面试用后罐上代谢无异，水平不低于上批方可用于生产。4.1.2.1.4 摇瓶培养液的制备a) 摇瓶培养基的制备：称量备料后充分将淀粉糊化，加至所配体积后将碳酸钙加入，分装于加好豆油的摇瓶中，经 0.10Mpa 压力 121灭菌 30min，冷却后备用，使用 23d。b) 摇瓶培养液的制备：将生长合格之二代斜面挖块约 0.8cm2 接入摇瓶，于220240 转分摇床上 32培 48hr，湿度 4050，外观米黄色，均匀岳阳同联药业有限公司红霉素乳酸盐工艺规程 共 26 页 第 6

11、 页挂壁，PH、菌浓正常，镜检菌丝色深，丛网或网，在无菌条件下集 1112瓶为一瓶合格后进小罐，一般不冷藏。4.1.2.2 培养基的制备：在接工艺室通知单后,培养基一律按 6.1.1 所述配方准确称量配制。先配成浓缩液，尽量将各种饼粉的团块打碎，搅拌均匀，再用泵打入罐内补足体积后实罐灭菌。配制前和结束后必须清洗料罐和管道，打料时配料工和消毒工要配合控制好体积。4.1.2.3 发酵的灭菌工艺4.1.2.3.1 培养基的灭菌工艺条件 所有培养基均采用实罐灭菌,工艺条件见表 4:表 4 培养基的灭菌工艺条件罐 名 压力(Mpa) 温度( ) 保温时间(min)小 罐 0.100.12 120123

12、30中 罐 0.100.12 120123 30大 罐 0.090.10 118121 1520糖罐 0.090.10 118120 20水罐 0.100.12 120123 30丙醇罐 0.080.09 115118 闷消 30油 罐 0.150.18 128130 6080混合料罐 0.100.12 120123 304.1.2.3.2 培养基的实消灭菌 a)灭菌前严格检查有关罐体、管道、法兰、轴封、阀门等有无渗漏、穿孔、堵塞、死角、阀门倒装等情况。空罐打料前，必须下罐检查罐内各部件是否良好，罐内是否干净。b)染菌罐，特别是染芽孢杆菌的罐，须先将空罐灭菌 30min，压力0.150.18M

13、Pa；温度 126130，必要时可加入甲醛熏消，以保证灭菌彻底。c)中、小罐实消前应在 4550min 内将培养基慢慢预热到 90,而大罐在实岳阳同联药业有限公司红霉素乳酸盐工艺规程 共 26 页 第 7 页消前应在 8090min 内将培养基慢慢预热到 8590，切不可操之过急。d)灭菌时保持活蒸汽通过,进排汽平衡，杜绝死角。灭菌完毕既通入小量空气,保压待种。e)油罐、混合料罐、糖罐、丙醇罐、水罐的实消同中、小罐。4.1.2.3.3 移种管道和补料管a)试压:检查移种管道和补料管道上所有法兰、阀门、焊缝的严密度。b)灭菌：根据移种或补料罐号，对号进行管道灭菌。灭菌压力为0.150.20MPa

14、，温度 128130，保温 1h。c)灭菌完毕，关闭移种管道上有关的中间阀、排污阀、蒸汽阀，打开移种阀或补料阀，先用料冷却移种管道后开始移种或补料，完毕用蒸汽冲管道1020min。4.2.3.4 空气系统的管理和灭菌a) 空气系统的管理1) 空压机到总过滤器所有管道、设备要保温。2) 滤芯质量要严格控制。3)专人负责管理，定期检查灭菌，定期更换介质。4)冷却系统经常查看，定时排放油水，特别在多雨或潮湿季节。5)使用中注意气流速度和压力的平衡，不允许突然开大流量或降低压力，防止介质上下压差过大，或气流冲力过大造成滤芯破坏。6)发酵罐的罐压不能超过过滤器压力，以免料液倒流污染而失败。b)总过滤器的

15、灭菌岳阳同联药业有限公司红霉素乳酸盐工艺规程 共 26 页 第 8 页1）过滤器送气阀关严（不能有泄漏） ，将过滤器进气阀、排汽阀、顶阀打开。2）打开压缩空气适量吹 812h。3）用尘埃粒子检测，检测合格后关闭罐底和罐顶排汽阀，即可正常使用。4）用一段时间后尘埃粒子计数器检测是否合格。C)分过滤器的灭菌，采用金属过滤器一般使用 23 批后进行灭菌处理，灭菌温度不高于 125。4.1.2.4 种子培养及发酵4.1.2.4.1 小、中、大罐工艺条件（见表 5）表 5 小、中、大、罐工艺条件条件罐类 罐温 罐压 MPa 周期 hr小罐 33 0.04 2432中罐 33 0.04 2032大罐 3433 0.03 1401604.1.2.4.2 大罐中间补料工艺a) 补全料：69hr 发酵液外观开始长浓、液面下降至可补入全料；b) 补丙醇：1418hr 发酵液外观长浓、无泡沫、菌丝成网、菌浓 2030%左右，粘度 10s 以上开始补醇，开始加量为 2L/hr，35135hr3 L/hr，136hr停补 2L/hr，放罐前一个班停补；c) 补糖：1518hr 发酵液外观长浓，无泡沫，菌丝成网，菌浓30% ，粘度 10s 以上，PH 第一个高峰 7.4 左右时可补入