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1、涵草堂去黑头收缩毛孔官网： http:/专业介绍中医知识：涵草堂雀斑官网 http:/ALA-光动力疗法对尖锐湿疣皮损中凋亡相关因子表达的影响尖锐湿疣叉称尖锐湿疣、生殖器疣或性病疣,是由人乳头瘤病毒(HP), 主要是 HP6 型和 11 型感染所引起的良性肛门生殖器疣; 其发病率呈逐年上升趋势。本病主要是通过性接触传播,也可垂直传播、间接接触传播;儿童生殖器、肛门疣和喉乳头瘤病的发生与患生殖器疣母亲分娩时感染有关。ALA光动力疗法(AL 肛 PDT)是 20 世纪90 年代引进的一种新兴的诊断和治疗手段,ALA 即 5-氨基酮戊酸,是一种外源性的光敏剂,其在体内可转变为强大的内源性光敏剂即原卟
2、啉(PP),在适当波长光源的照射及分子氧的存在下,可产生活性氧物质(主要是单态氧), 从而造成靶组织的损伤。ALAPDT 在治疗尖锐湿疣方面已经取得了很好的临床疗效,但是与其作用机制相关的研究甚少。为了探讨 ALA-PDT 治疗尖锐湿疣的可能机制,我们收集了 5例在我院接支 ALA-PDT 治疗的尖锐湿疣患者,并对他们治疗前后皮损中 Bax、Bcl-2, 几 Fas mRNA 的表达进行了观察。I 材料和方法1,1 研究材料以局部手术切除方式收集 5 例在我院皮肤科接受 ALA-PDT 治疗的尖锐湿疣患者治疗前后的皮损,取材前均签署知情同意书。患者的皮损经肉眼和病理学检查确诊为尖锐湿疣。其中男
3、性 16 例,女性19 例,年龄 2056 岁,平均(273,5)岁。男性患者的皮损主要位于阴茎冠状沟、阴茎根部、包皮、龟头及肛周等,女性患者的皮损主要在阴道壁、大阴唇、小阴唇及肛周等处。皮损数目为 230 个,平均 6.5涵草堂去黑头收缩毛孔官网： http:/专业介绍中医知识：涵草堂雀斑官网 http:/个。研究对象中例为初发患者,12 例为复发患者。治疗前的皮损取自未经任何处理的菜花样赘生物,并拍摄皮损照片;患者 12 周后复诊时,参照治疗前照片,收集与治疗前取材相同部位的皮肤作为治疗后的皮损。收集的标本立即置于冻存管中,并于液氮中暂时保存,随即转移至一的低温冰箱中保存各用。1 2 治疗
4、方法取适量的无菌棉球,将新鲜配制的 20%的 ALA 溶液均匀分布于其上,将其均匀平铺在尖锐湿疣皮损及其周边 2cm 的皮肤上,随后依顺序予以无菌薄膜手套、纱布封包;至少 4 个小时后,去除纱布、薄膜手套及含 ALA 溶液的无菌棉球,并根据病人的耐受情况予适当能量的光源照射,波长为(633I0)nm,功率密度为 7590mw/cm2,照射时间为30 min。1.3 实日寸定量 RT-PCR1.3.2 cDNA 的合成 用逆转录试剂盒 Prime Script RT reagent kit(TAKARA),严格按照说明书操作，反应体系总体积为 10ul ，反应条件为 3715min,85 5s。
5、1.4 实时定量 PCRBax 上游引物序列为 5-GGGAcGAAcTGGACAGTAAcA3,下游引物序列为5-CCGCCACAAAGATGGTcAc-3;由上海英潍捷基贸易有限公司合成;Bcl-2 上游引物序列为 5-GGAGAGTGCTGAAGAC-3,下游引物序列为 5-AC1TcCTCTGTGATGTTGTA3;Fas_上游引物序列为 5-涵草堂去黑头收缩毛孔官网： http:/专业介绍中医知识：涵草堂雀斑官网 http:/TTCCCATccTcCTGAcCAc-3,下游引物序列为 5C-TCGTAAAcCCGCTTcccTcA3。由大连宝生物工程有限公司合成。GAPDH 作为内参
6、照,其上游引物序列为 5-GCACcGTcAAGGcTGAGAAc-3,下游引物序列为 5-TGGTGAAGAcGccAGTGGA3;由上海英潍捷基贸易有限公司合成。荧光定量 PCR:荧光定量 PCR 仪为 Stratagenne Mx3005P。以SYBRgeen 方法检测,用荧光定量 PCR 试剂盒押 bvemix extap(TAKARA),严格按照说明书操作 ,反应体系总体积为 20uL;反应条件为预变性 95%30s,PcR 反应 955S, 6034S,循环们个周期。每个样本的每个因子(Bax、Bdl-2、Fas 和内参 GAPDH)均做两个复孔。1.5 统计学处理实验所得到的 c
7、t 值,经转化为 2-ct 值后进行统计学处理。经ALA-PDT 治疗前的皮损中 Bax、Bcl-2、Fas）的平均均为 1;经ALA-PDT 治疗后的皮损中 Bax、Bcl-2、Fas 的 2-ct 值的计算方法为先计算两个复孔的平均值;目的基因(Bax、Bcl-2、Fas)的平均值减去内参基因(GAPDH)的平均值即为ct 值,治疗后的ct 减去治疗前的ct 即为ct 值。所有数据输入 SPSSI3.o 软件包,进行 Wik-oxonl符号秩检验,P0,05 为有统计学意义。2 结果.35 例患者治疗前后经荧光定量 RT-PCR 均可检测到 Bax、Bcl-2涵草堂去黑头收缩毛孔官网： h
8、ttp:/专业介绍中医知识：涵草堂雀斑官网 http:/和 Fas mRNA 的表达。与治疗前相比,经 A-PDT 治疗后,Bcl-2 mRNA 表达水平明显降低(P0.01);而 Fas mRNA 表达水平则明显升高(P=0.OO0),Bax mRNA 表达水平虽有所升高,但无统计学差异(P=0.2)3 讨论ALA 介导的光动力学诊断和治疗可被应用于生殖器疣皮损期及亚临床期感染,同时对检测潜伏期 HP感染也有效。光动力学治疗介导细胞死亡的机制主要有细胞凋亡途径,细胞坏死途径以及自体吞噬途径,有研究3证实光动力疗法可引起凋亡程序的启动。细胞凋亡主要有由线粒体介导的细胞凋亡(内源性途径) 和死亡
9、受体介导的细胞凋亡(外源性途径) 。ALA 是一种定位于线粒体的光敏剂。近年研究表明线粒体在细胞凋亡过程中既是引发器,也是信号放大器,是细胞凋亡过程中的“潘多拉盒子 ”。在细胞凋亡调控机制方面 ,Bc1-2 是迄今研究得最深入、广泛的凋亡调控基因之一。Bax 是 Bcl-2 同源蛋白之一,属于凋亡诱导蛋白。光动力学治疗可导致对线粒体膜结合蛋白,尤其是 Bcl-2 和 Bcl-xL 的光损伤,并可对线粒体膜和内质网膜造成光损伤。很多研究发现 Bax、Bax/Bcl-2 在线粒体介导的凋亡中起着很重要的作用,Usuda 等的研究认为在 PDT 治疗中,hx 对于线粒体中Smac/DIABL0 和细
10、胞色素 C 的释放是必需的。而 Wu 等6的研究则提示在光卟啉介导的光动力疗法中,Bax 的激活对于线粒体外膜通透性的增加不是必需的,但是对于启动相关蛋白(Drp1)介导的线粒体分裂增殖必不可少,他们的研究还表明了 Bax 基因敲除尽管减弱了细胞涵草堂去黑头收缩毛孔官网： http:/专业介绍中医知识：涵草堂雀斑官网 http:/对于光动力治疗的敏感性,但是不能阻止细胞的死亡。我们研究发现经 ALA-PDT 治疗后的尖锐湿疣患者 Bcl-mRNA 表达水平显著下降,而 Bax mRNA 表达虽有所升高 ,但无统计学意义,表明 ALA-PDT 可能主要通过抑制 Bcl-2 的表达诱导细胞凋亡,而
11、 B 脉可能不是尖锐湿疣患者细胞凋亡所必需,这与 Wu 等以上的研究结果相似。Fas 是肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族的跨膜蛋白之一 ,能够与其相应配体(sL)结合组成 Fas 系统,导致靶细胞凋亡。Granville 等的研究提示经 PDT 治疗的 Jtlrkat 细胞在光敏化之后对于 FasL-和TRAIL-诱导的死亡的敏感性提高,从而论证了 PDT 联合 TRAIL 和/或凡 sL 治疗可增强 Jurk 甜细胞的凋亡。我们研究发现经 ALA-PDT 治疗后 hs mRNA 表达水平明显升高 ,提示 ALA-PDT 能诱导细胞表面凋亡蛋白 Fas 的表达,促进细胞凋亡。ALA-PDT 是一种优良的治疗尖锐湿疣的方法,它通过使细胞表面的凋亡蛋白 Fas 的表达增加和减少凋亡抑制因子 Bcl2 的表达诱导尖锐湿疣细胞的凋亡,从而达到治疗效果,其凋亡途径包括线粒体介导的凋亡和死亡受体介导的凋亡。
