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1、检验在线--医学检验专业站第一节 临床血液学检验血常规检查【 标 本 】抗凝静脉血（有些仪器也可用末梢血） 。【 方 法 】血液细胞自动分析仪测定法。【 试 剂 】血液细胞自动分析仪配套试剂。【 操 作 】详见自己实验室血液细胞自动分析仪使用手册。【 附 注 】1. 血常规包括白细胞计数及分类、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞比积、血小板计数等项目。这些项目亦有相应的手工方法，详见有关资料。2. 半自动及全自动血液细胞分析仪从设计上均要求用抗凝静脉血。其优点为：（1）静脉血能正确地反映病人实际情况，重复性好；（2）利于延长仪器的使用寿命；（3）解决了采血盘的交叉感染问题等。3. 血细胞计数应用
2、 EDTAK2：为抗凝剂（EDTAK 22 H2O 1.52.2mg 可抗凝 1ml 血） 。4. 贮血容器应选用有盖塑料管。抗凝血采集后在室温中贮存应不超过 6h；如需制作血涂片应在 2h 内完成。5. 测定前必须将 EDTAK2 抗凝血充分混匀。6. 血细胞分析仪测定最适温度为 1822，低于 15或高于 30，均可使细胞体积发生改变，影响各参数的结果。7. 血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段，当白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板的任何一项有明显升高或降低；白细胞分类出现异常结果（中间细胞群百分率8.0%） ；红细胞、白细胞和血小板的任何一个直方图出现异常图形等情况，须用显微镜检
3、查及分类。嗜酸性粒细胞直接计数【 标 本 】末梢血或抗凝静脉血。【 方 法 】直接计数法。【 试 剂 】1. Hinkelmann 液；2. 乙醇- 伊红稀释液；3. 伊红- 丙酮稀释液。【 操 作 】1小试管中加稀释液 0.38ml。2常法取末梢血 20ul，加入管内混匀，待红细胞溶解后两侧充池。检验在线--医学检验专业站3静置 35min ，用低倍镜（必要时用高倍镜）镜下计数 10 个大方格内嗜酸性粒细胞数。总数2010 6=嗜酸性粒细胞/L。【 附 注 】1. 血液稀释后应于 1 h 内计数完毕。2. 充池前要充分混匀，但又不宜用力过猛。3. 住院病人采集标本时间力求统一，以免受日间生理
4、变化的影响。红细胞沉降率测定【 标 本 】抗凝静脉血。【 方 法 】魏氏法。【 试 剂 】109mmol/L 枸橼酸钠溶液。【 操 作 】1. 3mm100mm 试管 1 支，在 2ml 容量处刻上记号，加抗凝剂 0.4ml。2. 静脉采血后，取下针头，加血至刻度，旋转混合。3. 用血沉管（300mm2.5mm）吸取上述混匀血液至 0 刻度处，拭去管外附着的血液，将管垂直立在血沉架上。4. 记时，室温中静置 1h，观察血浆高度，以红细胞下沉的毫米数报告之。【 附 注 】1. 红细胞在单位时间内下沉的速度与血浆蛋白的量与质，血浆中脂类的量和质，红细胞的大小与数量，是否成串钱相聚以及血沉管的内径、
5、清洁度、放置位置是否垂直，室温高低等因素都有关系。2. 标本采集时应空腹。3. 血液和抗凝剂的比例要准确。4. 血沉管内径要标准（2.5mm） ，放置要垂直。5. 做血沉的标本要在采集后 3h 内测定，并充分混匀。6. 室温过低、过高和贫血时，对结果有影响。为此，血沉应尽量放在 1825室温下测定。室温过高时血沉加快，可以按温度系数校正。室温过低时血沉减慢，无法校正。网织红细胞计数【 标 本 】末梢血或抗凝静脉血。【 方 法 】百分计数法。【 试 剂 】10g/L 煌焦油蓝生理盐水溶液或 10g/L 煌焦油蓝 ACD 溶液。【 操 作 】1. 于小试管中滴加 1 滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油
6、蓝 ACD 溶液。2. 加入末梢血或静脉血 2 滴于上述试管中，混匀。3. 静置 1520min 后，取用 1 滴制成薄片。4. 油镜下检查 1000 个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。1354 第八十一章 临床检验【 附 注 】1. 活体染色时间不能过短，室温低时，放 37温箱。2. 网织红细胞也可用 Miller 窥盘计数法、荧光染色或流式细胞仪计数。嗜碱性点彩红细胞计数【 标 本 】末梢血。【 方 法 】百分计数法。【 试 剂 】1. 甲醇；2. 碱性亚甲基蓝染液（保存 23 周） 。【 操 作 】1. 按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定 3min。2. 用碱性亚甲基蓝
7、染液染色 12min，水洗待干。3. 用油镜计数 1000 个红细胞中嗜碱性点彩红细胞数，以百分率报告。【 附 注 】1. 用碱性亚甲基蓝染液染色后，红细胞呈浅蓝绿色，嗜碱性点彩呈深蓝色。2. 也可用瑞氏染色，嗜碱性点彩呈蓝黑色。3. 由于点彩红细胞分布不匀，必要时扩大计数红细胞数。红斑狼疮细胞检查【 标 本 】静脉血。【 方 法 】改良血块法。【 操 作 】1. 抽取患者血液 23ml ，注于干燥试管内，于室温待凝。2. 于凝固刚形成时，用竹签将凝块搅碎，并将残余凝块除去。3. 以 2000r/分钟离心沉淀 10 分钟 ，使白细胞聚集在同一层面，以利于狼疮细胞形成。4. 置 37温箱内温育
8、2h。5. 取出白细胞层及其上下各少许，置红细胞比积管中，以 2000r/分钟离心，沉淀 10 分钟。6. 吸去上层液，轻轻吸取白细胞层，制成薄片 34 张。7. 以瑞氏染液染色、镜检。【 附 注 】1. 整个操作时间不能超过 3h。2. 注意与果馅细胞鉴别。一氧化碳血红蛋白定性试验【 标 本 】末梢血。【 试 剂 】50g/L NaOH。【 操 作 】检验在线--医学检验专业站1. 取试管 2 支，各加蒸馏水 35ml ，一管加患者血液三滴，另一管加正常人对照血 3 滴，混匀。此时，如患者血中有一氧化碳，则血液呈樱桃红色。2. 每管各加 50g/L NaOH1 滴，轻轻混合，正常对照管呈绿褐
9、色，如患者血液中有一氧化碳血红蛋白，则溶血液仍呈樱桃红色，为阳性；如与正常对照色泽一致为阴性。【 附 注 】1. 观察结果须及时，否则樱桃红色逐渐退去，不易分辨。2. 本试验敏感性较差，血液中一氧化碳含量到一定程度时才显阳性。如患者事先已采取通气措施，血中一氧化碳含量下降，试验可阴性。但临床症状、体征仍可能存在。（ 徐宝贵 朱 炎 ）第二节 体液及排泄物检查尿液检验尿常规检查【 标 本 】新鲜尿液。【 方 法 】化学试带法。【 试 剂 】各型号尿液化学分析仪配套试带。【 操 作 】详见自己实验室的尿液化学分析仪使用手册。【 附 注 】1. 尿常规检查使用尿液化学分析仪，目前能进行 810 项检
10、测（PH、蛋白、葡萄糖、酮体、隐血、尿胆红素、尿胆素原、亚硝酸盐、比重、白细胞） 。这些项目亦有相应的手工方法，详见有关资料。2. 必须了解所用试带各膜块注意事项、药物干扰。3. 要注意尿液化学分析仪测定结果与手工法的差异，必要时用手工法复查。4. 尿液化学分析仪检测仅是一个过筛手段，当蛋白、隐血、白细胞等出现异常结果（如尿蛋白“”或以上）时，应进行镜检。5. 尿液颜色、透明度等一般性状异常时也应报告。本周氏（Bence-Jones）蛋白定性 检查【 标 本 】新鲜尿液。【 方 法 】热沉淀反应法。【 试 剂 】1. 200g/L 磺基水杨酸溶液；2. 2mol/L 醋酸盐缓冲溶液（pH4.9
11、0.1） 。【 操 作 】1356 第八十一章 临床检验1. 先将尿液用磺基水杨酸法作蛋白定性检查，如呈阴性反应，则可认为尿液标本中本周氏蛋白阴性。2. 取透明尿液 4ml 于试管中，再加入醋酸盐缓冲液 1ml，混匀后，放置 56水浴中 15 分钟。如有浑浊或出现沉淀，再将试管放入沸水中，煮沸 3 分钟，观察试管中浑浊或沉淀的变化，如浑浊变清、浑浊减弱或沉淀减少，均提示本- 周氏蛋白阳性。若煮沸后，浑浊增加或沉淀增多，表明此尿液中还有其它蛋白质，此时应将试管从沸水中取出，立即过滤。如滤液开始透明，温度下降后浑浊，再煮沸时又透明，提示本- 周氏蛋白为阳性。【 附 注 】1. 过多的本- 周氏蛋白
12、，在 90以上不易完全溶解，故需与对照管比较，也可将尿液稀释后再测。2. 煮沸过滤除去尿中白、球蛋白时，动作要迅速，并需保持高温，否则本- 周氏蛋白也会滤去。肌红蛋白定性试验【 标 本 】新鲜尿液。【 试 剂 】1. 10g/L 邻甲联苯胺（- tolidine）溶液；2. 过氧化氢醋酸溶液；3. 硫酸铵粉末。【 操 作 】1. 首先测试尿液中有无血红素的存在，即依次加入新鲜尿液 4 滴，邻甲联苯胺溶液 2 滴，混和后，加入过氧化氢醋酸溶液 3 滴，如有蓝色或蓝绿色出现，表示尿中有 Hb 或/ 及 Mb 的存在。2. 离心或过滤使尿液透明，吸取 5ml，加入硫酸铵粉末 2.8g，使之溶解混合，
13、约为 80% 饱和度，静置 5 分钟，用滤纸过滤。取滤液重复测试有无血红素存在，如仍有，表示 Mb 阳性。如不显蓝色，表示血红素已被硫酸铵沉淀，为 Hb 阳性。【 附 注 】1. 标本必须新鲜，并避免剧烈搅拌。2. 本法为过筛试验，在少数正常人中可出现假阳性。尿含铁血黄素定性试验【 标 本 】新鲜尿液。【 方 法 】罗斯（Rous）法【 试 剂 】120g/L 亚铁氰化钾水溶液（用时新鲜配制） ；23 %盐酸。【 操 作 】1. 取混匀的新鲜尿液 15ml，以 2000r/min 离心 5min，倾去上清液。2. 在沉渣中加入新鲜配制的 20g/L 亚铁氰化钾水溶液及 3%盐酸液各 2ml，充
14、分混匀，室温静置 10min。3. 再离心沉淀，取沉淀物涂片，加盖玻片后用高倍镜（必要时用油镜）检查。检验在线--医学检验专业站4. 如见有分散或成堆蓝色闪光颗粒（直径 13um）即为阳性，如在细胞内则更为可信。【 附 注 】1. 所有试管、玻片、试剂均应防止铁剂污染，以免出现假阳性。2. 一般应做阴性对照，如亚铁氰化钾与盐酸混和后即显深蓝色，表示试剂已污染高铁，不宜再用。尿乳糜定性检查【 标 本 】新鲜尿液。【 试 剂 】1. 乙醚（AR） ；2. 苏丹醋酸乙醇染色液或猩红染色液。【 操 作 】1. 取尿 510ml，加乙醚 23ml ，混合振摇后，使脂肪溶于乙醚。静置数分钟后，2000r/
15、min 离心 5min。2. 吸取乙醚与尿液的界面层涂片，加苏丹醋酸乙醇染色液或猩红染色液 1 滴。3. 镜检观察是否有红色脂肪小滴。【 附 注 】1. 尿液中加少量饱和氢氧化钠，再加乙醚，有助于澄清。2. 将分离的乙醚层隔水蒸干，若留有油状沉淀，也可加苏丹，镜检证实有无脂肪小滴。尿胆色素原定性试验【 标 本 】新鲜尿液。【 试 剂 】1. 对二甲氨基苯甲醛试剂；2. 饱和醋酸钠溶液；3. 氯仿；4. 正丁醇。【 操 作 】1. 在试管中，加入尿标本 2ml 及对二甲氨基苯甲醛试剂 2ml，混合。2. 立即加饱和醋酸钠溶液 4ml，混合，加氯仿 3ml，振摇混合后，上层水溶液呈红色者为阳性反应。3. 阳性结果应用下法证实：如尿胆原含量多，用一次氯仿不能完全抽提尿胆原，应多次用氯
