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1、动物交叉配血试验1、概述交叉配血试验用于检测贫血的受血者和供血者之间的血清型是否相容，用于预防受血动物输血后发生输血反应。1. 主测配血试验是检测受血者血清中是否有抗供血犬红细胞抗体，如果有则不能输血。主测配血试验：受血者血浆+供血者红细胞2. 副测配血试验是检验供血者血清中是否有抗受血犬红细胞抗体，即使有也可以忽略，因为供血犬血液进入受血犬体内后很快被稀释。副测配血试验：供血者血浆+受血者红细胞3. 多数犬不存在自然产生的抗体，因此从未输过血的犬初次交叉配血试验显示相容性。4. 曾经有受血经历的犬，在第二次输血前，即使用同一供血犬，也一定要做交叉配血试验。5. 猫能产生自然同种抗体，所以在猫
2、输血前必须做交叉配血试验。交叉配血试验还能鉴定猫的血型，若主测配血试验不相合，受血猫可能为 B 血型，供血猫为 A 型血。若副测配血试验不相合，受血猫可能为 A 血型，供血猫为 B 血型。如果交叉配血实验相合，则供血猫和受血猫血型相同。猫的血液最好在需要输血时，现采血现输血，不要长期贮存。2、步骤1）分别取 0.5 毫升受血者和供血者的抗凝血液，可用 EDTA 抗凝，或者从供血袋内取血；（见下图）2）对抗凝血进行离心，2000 转每分钟，离心 5 分钟;(见下图)3）离心后，用移液枪吸取上面血浆，放入另外的一个试管，并标记；或者直接转移入贴有主测、副测和受血者对照标签的 3 支 1 毫升离心管
3、中，每支离心管中加对应血浆 100 微升。（见下图）4）用磷酸盐缓冲盐水或者生理盐水洗涤红细胞 3 遍，并制成 5%的红细胞悬液。操作方法是：加入洗涤液后，用手指轻弹试管底，使红细胞和洗涤液混合，再 2000 转每分钟离心 5分钟，取上清液扔掉，如此重复 3 次；（见下图）5）向装有 100 微升血浆的离心管中各加入 100 微升对应的 5%红细胞悬液，并在室温下静置 15 分钟；（见下图）主测配血试验：100 微升受血者血浆+100 微升 5%供血者红细胞悬液，轻轻混合副测配血试验：100 微升供血者血浆+100 微升 5%受血者红细胞悬液，轻轻混合对照试验： 100 微升受血者血浆+100
4、 微升 5%受血者红细胞悬液，轻轻混合6）离心后，检查上清液有无溶血；（见下图）7）轻轻晃动离心管，肉眼或借助显微镜观察有无凝集；（见下图）8) 主测配血试验出现任何程度的溶血或凝集都表示血型不合，副测配血试验出现轻微溶血或凝集可用于紧急情况下的输血，但是必须仔细监护；9) 当受血者对照试验出现凝集或溶血后，不应进行交叉配血。三、结果判读相容现象（400X 镜）凝集现象：可见红细胞凝集，凝块大小可能会有差异。（见下图，100 倍镜、400 倍镜）交叉配血试验无凝集时才可以输血。4、备注要使用磷酸盐缓冲盐水或者生理盐水洗涤红细胞，输血时最好用生理盐水稀释。因为 5%的葡萄糖对红细胞能造成伤害（见
5、下图）。蒸馏水对红细胞也能造成伤害。犬猫交叉配血方法(康乐佳宠物医院 玲玲） 交叉配血实验（corss-match test）是同种异体肾移植手术前必须做的检测。广泛应用于临床输血前检查。将供血者的红细胞与受血者的血清进行血清配合试验，称为主侧试验（major crossmatch）；把受血者的红细胞与供血者的血清作配合试验，称为次侧试验(minor crossmatch）。这样既可检验血型是否适合，又能发现他们的红细胞或血清中是否还存在一些其它的凝集原或凝集素，是否可引起红细胞凝集反应。减少显微血管吻合后出现血栓的可能。交叉配血试验，在 37下进行，以保证可能有的凝集反应得以充分显示。具体步
6、骤如下：a. 分别从供体和受体采血 1ml，用 EDTA 抗凝。b在离心机内离心 1min（1000rpm）。吸出血清至另一标记好的试管内c受体和供体的红细胞分别配制成 2%红细胞混悬液：抽取 0.1ml 红细胞至另一试管内，并 加入 0.9%NaCl 生理盐水 5ml。充分混匀d清洗红细胞：将上述混悬液离心 1min（1000rpm），用吸管吸除红细胞上方的生理盐水，然后再加入 0.9%NaCl 生理盐水 5ml，混匀后再重复上述操作。至少清洗红细胞3 遍。最后配制成清洗后的 2红细胞混悬液。e主侧试验：吸取受体的 2 滴血清和供体的 2 滴 2红细胞混悬液至一试管内混匀。次侧试验：吸取供体
7、的 2 滴血清和受体的 2 滴 2红细胞混悬液至另一试管内混匀。为了便于对照，分别将自体的 2 滴血清和自体的 2 滴 2红细胞混悬液至一试管内混匀。置于 37温箱内温浴 30min。f检查试管内红细胞是否出现凝集反应、是否溶血。吸取一滴试管内血清红细胞混合液滴至载玻片上，在 400 倍显微镜下观察是否有红细胞凝集。犬只输血 血液配型 相关知识（康乐佳宠物医院 玲玲）犬的血型犬的血型1通过直接或间接凝集反应以及溶血反应，人们逐渐认识了犬的各种红细胞抗原（DEA）。到目前为止，已报道的犬血型有：- 红细胞抗原 1.1（A1）；- 红细胞抗原 1.2（A2）；- 红细胞抗原 3（B）；- 红细胞抗
8、原 4（C）；- 红细胞抗原 5（D）；- 红细胞抗原 6（F ）；- 红细胞抗原 7（Tr ）和红细胞抗原 8（He ）。犬的血型2最近澳大利亚又发现犬有红细胞抗原 1.3（A3）血型。最强的抗原性因子：- 红细胞抗原 1.1- 红细胞抗原 1.2- 红细胞抗原 7犬的血型3犬的红细胞表面不只有一个红细胞抗原，如红细胞可以是 DEA1.1 阳性或DEA1.1 阴性，同时 DEA1.1 阴性的红细胞也可以是 DEA1.2 阳性或 DEA1.2 阴性，这些血型表现为等显性遗传。犬的血型4血型为 DEA1.1、DEA1.2 和 DEA7 阳性的犬血只能给相同血型的犬输；如果血型为 DEA1.1、D
9、EA1.2 和 DEA7 阴性的犬首次输入上述三种阳性血型中的任何一种或两种以上以后，第二次输入同一阳性血型时肯定会发生严重的输血反应。目前未发现犬体内含有天然抗 DEA1.1 和 DEA1.2 的抗体，但犬体内确实存在抗某些血型的天然抗体。另外，由于地域的不同以及各品种的分布数量的差异，各地犬的不同血型所占比例也不尽相同。犬的血型5目前还未就某一品种犬的血型分布情况做出详细研究，但研究发现 Greyhound出现 DEA1.1 和 DEA1.2 阳性的机率很小。犬的血型6Pitoler e 等对美国不同品种犬调查得出- DEA1.1 占 40%，- DEA1.2 占 20%，- DEA3 占
10、 5%，- DEA4 占 98%，- DEA5 占 2025%，- DEA6 占 98%，- DEA7 占 4550%，- DEA8 占 40%。输血疗法的适应症输血疗法可适用于各种原因引起的贫血；车祸、手术、外伤等引发的大失血；剧烈呕吐、腹泻引起的血容量降低；老年性疾病；血小板和凝血因子缺乏引起的凝血不良；华法令鼠药中毒；白细胞减少症和低蛋白血症等病症。输血的作用输血可以起到迅速补充循环血量、维持一定的血压、增加血液的凝固性和血红蛋白的浓度、增加血液运输氧的能力以及刺激机体的造血机能等作用。另外对供血犬采取相应的免疫后，其血制品对犬细小病毒、犬瘟热可产生特异性的抗病力。 输血的标准当犬出现下
11、列情况：- 循环血量减少超过 30%；- 红细胞压积小于 20%；- 持续性出血；- 粘膜苍白；- 毛细血管充盈时间大于 2 秒；- 呼吸急促和心动过速等症状；则必须紧急输血。供血犬的选择要求供血犬的体重应大于 25 公斤；年龄在 2-8 岁之间；临床检查正常（包括血常规及血液生化）；红细胞压积大于 40%；定期注射疫苗；供血犬不应有红细胞抗原 1.1、红细胞抗原 1.2 或红细胞抗原 7。如果受血犬需大量输入血小板和凝血因子，应检测供血犬的凝血时间；根据地域的不同，相应淘汰存在巴贝丝虫病、利什曼原虫病、埃利希氏病、疏螺旋体病、布鲁菌病和犬恶丝虫病的供血犬。特别应注意供血犬不可有受血经历。采血
12、量不应超过 20 毫升 /公斤体重；一般间隔三周采集一次。供血犬的日粮中应添加硫酸铁制剂，剂量为 10mg/kg 体重。由于 Greyhound 血液的红细胞压积很高，静脉容易采血并且血液中很少含有DEA1.1、DEA1.2 和 DEA7，可将 Greyhound 作为理想的供血犬。血液的采集及保存常用的保存液可以从犬的颈静脉或从麻醉犬的股内动脉采集血液。采血常用的保存液：- 枸橼酸磷酸葡萄糖（CPD）；- 枸橼酸磷酸葡萄糖腺嘌呤（CPD-A1）- 酸性枸橼酸葡萄糖（ACD）；- 肝素。血液的保存犬的全血制品应保存在 3-6的条件下，温度高于 37，易破坏血液的成分，低于 2，可形成纤维蛋白。
13、另外应使抗凝剂和采血袋在采血前保持在 5左右，以防止溶血。采血过程中必须轻轻晃动采血袋。配血实验输血前应给犬做交叉配血试验，但在紧急输血情况下，如果犬是第一次输血，可以不做配血试验。受血犬过去曾被输过不明血型的血液或需多次输血，必须做配血试验，否则，易产生输血反应。 交叉配血试验交叉配血试验可以分为主侧配血和次侧配血两部分，主侧配血是受血犬的血浆或血清和供血犬的红细胞反应与否；次侧配血是受血犬的红细胞与供血犬的血浆或血清反应与否。由于受血犬血清中很少含有天然抗体，一般可不做次侧配血试验。任何程度的凝集反应或溶血反应都表明血型不相容。盐水配血法可利用盐水配血法进行检测，具体实验步骤为：a. 分别
14、取供血犬和受血犬的新鲜血液，用 EDTA 抗凝。b. 用 0.9%氯化钠溶液洗三遍红细胞，分别以 1000 转/ 分钟离心 15 秒，去掉上清液。c. 将红细胞泥配成 4%红细胞盐水悬液。d. 主侧配血：向 1075 毫米的试管加入两滴供血犬的 4%红细胞盐水悬液和两滴受血犬的血清或血浆。e. 次侧配血：向 1075 毫米的试管加入两滴受血犬的 4%红细胞盐水悬液和两滴供血犬的血清或血浆。f. 以 1000 转/分钟离心 1 分钟。 g. 取出观察上清液有无溶血，轻轻晃动试管，观察有无凝血。简易的“三滴法”配血实验简易的“三滴法 ”配血实验：方法为取供血犬血液 1 滴、受血犬血液 1 滴及抗凝
15、剂 1 滴于载玻片上，混合后肉眼观察有无凝集，若无凝集，则可输血。输血方法静脉输血是最常用的一种方法。如果静脉输血确实有困难，也可进行腹腔输血，但腹腔输血的作用比较慢。腹腔输血 24 小时后，有 50%血细胞被吸收进入循环系统。腹腔输血 2-3 天后，约 70%的血细胞进入循环血液。腹腔输血对慢性疾病（如慢性贫血）效果较好。幼犬静脉输血失败，可以进行骨髓内输血，用消毒后的 20 号针头或骨髓穿刺针刺入股骨或肱骨近端，输血后约 95%左右的血细胞可以被吸收进入血液循环系统。输血前 15 分钟，可以给犬注射苯海拉明防止过敏。将血袋取出后反复颠倒数次，使沉积的红细胞充分混匀。输血过程中发生阻塞时，须立即更换输血器具，也可在输血前向血袋内注入50-100 毫升生理盐水以稀释浓缩的红细胞，有利于降低血液的粘稠度。输血量的计算静脉输血的剂量一般为 10-20ml/kg。输入 20ml/kg 的全血或 10ml/kg 浓缩的红细胞，则红细胞压积增加 10%左右。输血量的计算公式为：所输血量=2.2受血犬的体重（kg ）40（正常血细胞比容-受血犬血细胞比容/供血犬血细胞比容）。静脉输血的速度静脉输血的速度一般应小于 10ml/kg/h；输血最初 30 分钟一定要慢，大约 0.25ml/kg/h。输血过程中犬如果出现荨麻疹，则马上停止输血。
