《实验9玉米幼胚再生系统的建立》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验9玉米幼胚再生系统的建立（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验 9 玉米幼胚再生体系的建立摘要 以玉米幼胚作为外植体,研究了不同的培养基对玉米幼胚愈伤组织的诱导的影响及愈伤组织继代和分化的情况，结果表明，7 种不同的培养基均能诱导出愈伤组织，诱导率都很高，但是分化培养基则不理想，大部分的都是枯萎没生长情况。本实验利用玉米幼胚的培养，主要目的是学习和掌握幼胚培养的一般方法，从而可以在现实生活中有所应用。关键词玉米 幼胚 愈伤组织 激素前言玉米作为我国一种重要的禾谷类粮食作物 ,其组织和细胞培养研究受到人们的重视并取得了巨大的进步。在玉米的外植体培养中 ,对幼胚培养的研究很多 ,并已建立了比较完善的组织培养体系.1 材料与方法1.1 实验材料 玉米幼胚
2、玉米愈伤组织1.2 方法1.2.1 玉米幼胚愈伤组织诱导培养基1 组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D2.0mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L 2 组：N6(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D2.0mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L 3 组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂7g/L 4 组：N6(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+2,4-D0.1mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L 5 组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D4.
3、0mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L 6 组：N6(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D4.0mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L 7 组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 2,4-D2.0mg/L+NAA0.1mg/L按照培养基的配置方法来配置以上培养基，灭菌后，分装到 4 个培养皿中待接种。1.2.2 玉米幼胚接种剥去玉米包被，用 75%酒精清洗，将玉米棒子切成 3、4 段，置于 75%酒精浸 5min，倒去酒精，加 0.1%升汞浸泡 11min，无菌水冲洗 3 次。用无菌镊子，小刀取出玉米幼胚，选取完好无损的幼胚接种于培养基。每个培养皿接种 10 粒，于 25
4、暗培养。1.2.3 玉米愈伤组织分化诱导培养基1 组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L2 组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA1.0mg/L +蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L3 组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA1.0mg/L +NAA 0.5mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂7g/L4 组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA3.0mg/L +NAA 0.5mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂7g/L5 组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+6-BA1.0mg/L +NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3 mg
5、/L +蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L6 组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 6-BA3.0mg/L +NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3 mg/L +蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L7 组：MS(大量,微量,有机,肌醇,铁盐)+ 6-BA3.0mg/L +NAA 0.5mg/L+水解酪蛋白 0.3 mg/L +谷氨酰胺 mg/L+0.7 蔗糖 30g/L+琼脂 7g/L按照培养基的配置方法来配置以上培养基，分装到 4 个小三角瓶中封口再灭菌，待接种。1.2.4 分化接种在超净台上夹取松散的，好的玉米愈伤组织放于分化培养基中进行分化培养。于 25光照下培养。20d 观察生长情
6、况。2 实验结果2.1. 计算及结果分析诱导率（%）=（形成愈伤组织的外植体块数/接种的外植体块数）*100%污染率（%）=（污染外植体块数/接种的外植体块数）*100%全班数据统计愈伤组织诱导 分化培养组数 诱导率 污染率 出绿率 出苗率1 86.5% 2.7% 8.1% 5.4%2 90.9% 3% 0 03 88% 0 0 04 100% 10% 污染5 90% 10% 100% 75%6 97.5% 0 0 07 94.4% 0 污染从整个班试用的不同的培养基中玉米幼胚的诱导愈伤组织实验结果很好，诱导率很高，污染率相对比较低。分化结果不好，大部分的分化培养中愈伤变枯萎，但 5 组的实验
7、结果比较理想，1 组有实验结果，但出绿率和出苗率都比较低，从中得出其他枯萎了的愈伤可能是在实验过程中镊子冷却不够，导致愈伤死亡枯萎。最终对比不出来最佳的培养基和最佳的激素浓度。2.2 玉米幼胚愈伤组织诱导玉米幼胚愈伤组织的诱导很成功，诱导率达到 70%，无污染。与之前的植物愈伤组织诱导结果好很多。2.4 玉米愈伤组织的分化玉米幼胚愈伤组织的分化失败，愈伤组织不生长，还呈现了黑色枯萎的愈伤，这可能是由于在接种愈伤的时候镊子灭菌后冷却不到位。由于 1、5 组分化有结果，证明培养基是没有太大的问题，不会导致愈伤的死亡。3 讨论所谓体细胞无性系变异就是指在组织培养过程中获得的再生植株具有与其亲本植株不
8、同特征特性的现象。前人实验结果表明影响玉米幼胚诱导愈伤组织的因素主要是基因型，其次是培养条件、幼胚大小、继代时间等。本实验所用的 7 种培养基均能诱导出愈伤组织，诱导率都比较高，表明玉米幼胚愈伤组织的诱导具有普遍性。而分化中得出结果的只有两组，其他的都出现枯萎情况，这有待我们继续研究。参考文献：1玉米成熟胚愈伤组织诱导与继代培养的影响因素研究赵锦慧 1, 陈 龙 1,牛子敬 2(1.周口师范学院 生命科学系 ,河南 周口 466000 ; 2.周口市种子技术服务站 ,河南 周口 466000)2曹俊梅 ,窦秉德 ,陈莉 ,等.玉米幼胚和成熟胚愈伤组织分化反应性比较 J .新疆农业大学学报 ,2005 ,28 (2) :10 1313甜玉米成熟胚的组织培养及其植株再生研究 陈莉，窦秉德，阮元元，沈芳，张永霞，李亚林，曹俊梅 ( 1 -淮阴师范学院生物系， 江苏淮安 2 2 3 3 0 02 新疆农业大学农学院， 新疆乌鲁术卉 8 3 0 0 5 2 )4玉米胚性愈伤组织的诱导及其植株再生的研究 谢友菊 戴景 瑞 郝 混 （ 北 京 农 业 大 学）
