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1、附件 1：四川师范大学学生科研创新项目申请书项目名称： 四川部分食虫目动物的 DNA 条形码技术研究 项 目 类 别： 理工类 申请人： 曹淑娟 所 在（院） 系： 生命科学学院 申 请 人 电 话： 18080406147 申请人电子信箱： 导师： 陈顺德 导师职称： 副教授 导 师 所 在 单 位 ： 生 命 科 学 学 院 导师电话： 13568910877 导 师 电 子 信 箱 ： 填 表日期： 2014.3.12 共青团四川师范大学委员会 制2014 年 3 月一、项目申请人情况 姓名 曹淑娟 性别 女 民族 汉 出生日期所在（院）系生命科学学院 专业、班级生物技术 1 班项目
2、名称四川部分食虫目动物的 DNA 条形码技术研究申请人 通讯地址 四川师范大学成龙校区 电话18080406147自何年月 至何年月 学习单位（高中以上，含高中） 任职2008 2012 广安市烈面中学 班长2012 今 四川师范大学 无学历申请人参加科研、创业的经历自何年月 至何年月 参加的项目 担任的工作2013 2014 味精对小鼠学习和记忆的影响 实验员申请人入校以来的主要专业必修课成绩课程名称 类别学分 成绩 课程名称 类别学分 成绩生物化学项目组其他成员（不包括申请人和导师，可自行添加栏数）姓名 性别 年级 所在院系 专业 分工 签名 联系方式一、 申请人对研究项目简要说明（一）立
3、论依据（项目的研究意义、拟研究问题的国内外现状分析、所涉及的学科领域、科学价值）（500 字以上）四川省位于世界上 25 个生物多样性的热点地区之一。而四川省的兽类在中国兽类中占有重要地位，特别是食虫目动物模式种占到全国的 46.4%，特有食虫类食虫类特有种的 84.2%，不少物种被收录到 IUCN 红色保护名录中，这些珍稀小型兽类亟待保护。食虫类动物大多数是传染疾病病原菌的携带者和农林的害兽，对于传染疾病的预防和农田害兽的防治，都需要正确的物种识别，以便对症下药。但由于食虫类动物体型小、形态上保守性和相似性，其分类鉴定一直是分类学家的薄弱环节。DNA Barcode 技术（DNA 条形码技术
4、）是近几年才发展起来的一项快速、准确的物种鉴别技术。本项目拟以 cox1 基因序列的信息作为物种的DNA 条形识别码，建立四川省食虫类动物的 DNABarcode 数据库，并以该数据库为依据，用以诊断与鉴别四川省食虫类动物物种，建立一套快速、简便、准确的鉴别食虫类动物的方法，为农林管理部门管理提供准确的依据。（二）研究目标、内容、拟解决的关键问题（包括项目的研究方案、预见在应用中对社会的影响及独到之处）以及成果形式（400 字以上）1 研究内容：1.在原有采集的食虫类样本基础上,增加野外采集食虫类动物样本（主要从峨眉山、王朗等四川西北部和西南地区） 2.标本的形态学鉴定：1）在野外进行外部形态
5、测量鉴定2）实验室制作食虫类动物的头骨标本,并进行测量,鉴定物种3食虫类动物 DNA 条形码数据库的建立1）食虫类动物线粒体 cox1 基因引物的研究2）食虫类动物线粒体 cox1 基因的扩增，测序3）食虫类动物 DNA Barcode 数据库数量性征研究4.利用 COXI 基因作为 DNA Barcode 鉴别四川省食虫类动物1）利用 DNA Barcode 诊断食虫类不同组织的样本2）利用 DNA Barcode 诊断食虫类不同发育阶段的样本3）利用 DNA Barcode 诊断食虫类皮张样本3 技术路线：1 食虫类动物标本的采集和形态分类鉴定利用陷阱法或夹日或夹夜法，在横断山区食虫类动物
6、分布较为集中的山区广泛收集标本。对样品的外部分类特征、头骨分类特征进行测量，进行单变量和多变量分析，鉴定物种2 食虫类动物 DNA Barcode 数据库的建立1）哺乳动物线粒体 cox1 基因引物的研究尽管一些通用引物已在许多低等的分类单元上被成功用于扩增较多物种的 cox1 基因，但由于 cox1 基因在高等的分类单元如哺乳动物中可能存在较大的分化，单一的引物往往难以同时通过 PCR 反应获得具有较大差异的分类单元的 cox1 基因。如蝙蝠和灵长目在通用引物的选择上就有所不同。本研究拟首先采用 Hebert（2004）提供的脊椎动物的一对通用引物对食虫类 DNA 进行 PCR，对未能获得
7、PCR产物的物种样本，则根据 GeneBank 中已有的 cox1 基因序列，设计简并引物，尽可能筛选可获得最多样本特异扩增的哺乳动物通用引物。2）食虫类动物线粒体 cox1 基因的扩增收集分布于四川的大部分食虫类动物样本，提取基因组 DNA。采用通用引物或自行设计的引物，分别通过 PCR 反应扩增线粒体 cox1 基因。线粒体 cox1 基因的PCR 扩增条件参考 Hebert 的标准程序，并对 PCR 条件进行优化。为确保通过 PCR获得的扩增产物是来自动物线粒体，而非来自核基因或假基因，每个物种至少检测一雌一雄，并将测序结果与 GeneBank 所提交的已有 cox1 全序列或线粒体全序
8、列比对。3）食虫类动物 DNA Barcode 数据库数量性状研究以 COXI 基因作为物种的 DNA Barcode，建立我省食虫类物种的 COXI 基因数据库。对于每个物种，收集尽可能多的样本，通过 PCR 回收并纯化 cox1 序列。不同物种 cox1 基因测序，采用 Paup 4.0 软件对序列进行分析，利用 Mega3 软件计算K2P,并建立 NJ 树分析不同物种之间的遗传距离。根据统计结果建立食虫类动物 cox1 基因在物种内、种间、属间、科间、目间的波动的几率。3. 利用 COXI 基因作为 DNA Barcode 鉴别食虫类动物拟收集食虫类动物血液、肝脏、肌肉、骨骼甚至细胞培养
9、物，或者收集动物不同发育阶段：胚胎、幼体和成体的样本或皮张样本，提取基因组 DNA。PCR 扩增各样本线粒体 cox1 基因，将测序的结果与数据库内该物种的 DNA barcode 进行比对。若检测的 cox1 序列的相似性在 DNA barcode 数据库波动的范围内，则诊断为一个物种。3 创新与应用DNA barcode 是研究生物多样性前沿的实验技术之一，其对物种鉴别的有效性已经在生物界各分类单元中被证实。本研究的特色与创新在于通过广泛的野外标本收集，建立一套快速、简便、准确的鉴别食虫类动物的方法，为农林管理部门管理提供准确的依据；本项目的开展还能为全球物种 DNA barcode 数据
10、库增添重要的新信息；同时也将有利于今后对我国食虫类野外种群的地理分布、分类、行为学等方面的研究。（三）研究的进度安排（四）研究工作已有基础条件（300 字以上）一、 指导教师简况姓名 性别 民族 政 治 面 貌 年 龄最终学历 职务 职称 专业所在（院）系 研究方向通讯地址 邮编 电话电子信箱(E-mail)当前从事的教学、研究工作简介二、 指导教师对申请人的评价（一）对申请人的专业基础、工作态度、学风及研究能力的评价（二）对申请课题的价值、研究方案的可行性、工作基础等方面的评价指导教师（签名）：年月日二、 申请资助金额和经费预算资金总额及来源共 计 基金资助 院系配套资金 教师课题费资助 其
11、他项目经费 （元） （元） （元） （元） （元）预算支出科目 支出金额 预算根据及理由1、测试费、分析费2、图书、资料费3、小型会议4、交通费5、实验材料费6、其他六、申请人所在（院）系审核意见对本申请书中各项内容的真实性、经费预算的合理性及本（院）系所能提供的支持条件等签署具体意见（院）系负责人（签章）：年月日七、 审核意见是否同意由学校提供资助，对资助额度签署具体意见。评审人（签章）：年月日学校意见校团委（签章）：年月日附件 2 团队成员招聘表附件 3：第十批学生科研创新项目申报统计表项目名称 负责人联系方式 学院项目简介项目指导老师已有项目成员（个）还需项目成员（个）需求人员学院与年级
12、需求人员的专业或特长在团队中负责的任务需求人员的空余时间 备注学院： 学院负责人签名： （单位印章）年 月 日附件 4：四川师范大学校级学生科研重点创新项目协议书编号 项目名称 项目类别 负责人 专业、 班级 联系电话 导师姓名 联系电话甲方：共青团四川师范大学委员会乙方：关于四川师范大学校级学生科研重点创新项目事宜，根据相关文件精神，双方经协商，就项目 达成协议如下：一、项目的具体事项：（一）项目执行时间： 年 月 日至 年 月 日；（二）项目总经费： 元；（三）项目研究任务及最终成果：详见附件四 川 师 范大 学 学 生 科 研 创 新 项 目 任 务 书 。二、甲方的责任：（一）项目经费
13、管理：按时划拨项目经费，监管经费的使用。在项目结题前签批报销不超过项目总经费的 60%，余款待项目结题后方能签批报销。对逾期不结题或结题但不符合附件所确定最终成果的项目追收剩余经费。（二）督促、检查项目的执行；管理经费报销、确保合理使用；执行项目结题；完成项目材料存档。（三）对经审核按计划完成项目计划的课题负责人颁发项目结题证书。（四）处理其他未尽事宜。三、乙方的责任：（一）指导学生项目团队制定项目执行方案，指导学生科研方法，协调实习、实践、试验、调查等有关事宜，帮助学生按照附件所确定最终成果完成结题。（二）积极配合甲方执行对项目的管理和检查。项目完成后一个月之内，督促项目负责人以书面形式将四
14、川师范大学学生科研创新项目结题验收报告书 四川师范大学学生科研创新项目文献检索报告表及有关项目成果附件装订成册交校团委。（三）按关于第十批学生科研创新项目申报和管理工作的通知有关规定，指导学生合理有效地使用经费。（四）确保与项目有关的所有原始资料（申报书、任务书、报告书、报告表）和研究成果具有真实性和完善性。四、其它约定：（一）指导项目获得学术成果参照四川师范大学学生专项奖学金评定办法（试行） “学术成果、创新能力奖学金”规定事项执行：1指导项目获“挑战杯”国家级、省级竞赛活动获正式名次或等级奖以上者，国家级特等奖每项奖励 1 万元，国家级一等奖每项奖励 8000 元，国家级二等奖每项奖励4000 元，国家级三等奖每项奖励 2000 元；省级一等奖每项奖励 2000 元，省级二等奖每项奖励 1000 元，省级三等奖每项奖励 500 元。2指导项目学生以四川师范大学署名和独立作者（
