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1、基础生物学技术实验 1血球计数板的使用与酵母菌数量估计一、 实验目的1、 为了巩固显微镜使用操作2、 学习血球计数板的使用3、 估计 1 克酵母溶入 500ml 水中后，1ml 水中所含有的酵母菌数量二、 实验原理血球计数板：是一块特制的载玻片，其上表面中央部分由四条槽分成三个平台。中间平台又被一短槽一分为二，每边各有一个方格网，每个方格网有九个大小相等的大方格，中间的一个大方格即计数室，就是计数微生物或细胞的部位。计数室刻度一般有两种规格：A、大方格分成 16 个中方格，而中方格又分成 25 个小方格的一种 (图上)基础生物学技术实验 2B、大方格分成 25 个中方格，而中方格又分成 16
2、个小方格的一种( 图上)。但两种规格的计数板均有 400 个(1625 或 2516)小方格。计数室容积一定，将待测标本的均匀悬液放在计数室中并在显微镜下计数，就可算出单位体积内的微生物总数目。计数室容积为 110.1=0.1mm3104ml计数公式 ： 1ml 悬液中的微生物总数(个) = ABn104 A 为每个中方格中的微生物数平均值，B 为稀释倍数，n 为每大方格中的中方格数。三、 实验器材1 台显微镜、1 块血球计数板、500ml 的酵母菌溶液、滴管、盖玻片数块、吸水纸。四、 实验步骤(1)称取 1 克酵母加入 500ml 的水中，配制成酵母菌使溶液。(2)镜检、加样前，先要检查计数
3、室内有无污物，若有则需清洗后烘干使用。(3)加样、血球计数板上盖上清洁干燥的盖玻片，用无菌的细口滴管将稀释的微生物悬液从盖玻片边缘滴一小滴(不宜过多) 。这样通过毛细渗透作用液体可沿缝隙进入计数室，注意要使计数室中不产生气泡并且充盈稀释液。(4)计数、将计数板置于载物台上静置 5 分钟左右，先用低倍镜找到计数室，然后换上高倍物镜。 分别计数任意 5 个中方格内的微生物数 (最好选 4 个角和中央的方格)。 位于格线上的菌体或微生物一般只数上线和右线上的或下线和左线上的。 要计数两个计数室求平均值。（5）重复以上操作 5 次记录下 5 次计数的 5 个区域内的各族数据，并求其平均值。(6)清洗、
4、一般用水冲洗血球计数板，切勿用硬物洗刷，以免磨损计数室。洗完后要烘干或晾干。镜检，直至干净。五、 实验数据记录次数 左上（个）左下（个）中间（个）右上（个）右下（个）平均（个）1 27 19 35 15 24 24基础生物学技术实验 32 36 35 36 38 33 35.63 24 32 37 29 32 30.84 33 28 29 41 30 32.25 32 29 20 29 24 26.8六、实验结果5 组实验的总平均值=29.9（个）标准差=15.4(个的平方)所以 1ml 水中大约有 299 万个酵母菌。七、 实验注意事项1、 加酵母菌溶液时必须将杯中的酵母菌溶液摇匀后才能吸取，且溶液在滴管中停留的时间不能过长，所以必须在所有工作都完成后在吸取酵母菌溶液。2、 吸取酵母菌溶液必须滴在血球计数板的边上让其自然流入，不能直接滴在观测处，防止酵母菌溶液过多造成误差。且在滴酵母菌溶液时血球计数板必须拿平，防止酵母菌一边多一边少。3、 在使用前必须用显微镜观察，确保血球计数板的洁净。4、 计数时，必须保证每个框内压线的都计左边和上边，右边和下边不计。
