《化妆品中颜料橙(ci 12075)等五种禁用着色剂的检测方法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《化妆品中颜料橙(ci 12075)等五种禁用着色剂的检测方法（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1附件 15：化妆品中颜料橙 5（CI 12075）等 5 种禁用着色剂的检测方法1 适用范围本方法规定了唇膏、散粉和指甲油类化妆品中酸 性 黄 36（ CI 13065） 、 颜料 橙 5（ CI 12075） 、 颜 料 红 53:1（ CI 15585:1） 、 苏 丹 红 （ CI 12140） 和 苏丹 红 （ CI 26105） 的高效液相色谱测定方法。本方法适用于唇膏、散粉和指甲油类化妆品中酸 性 黄 36、 颜 料 橙 5、 颜 料红 53:1、 苏 丹 红 和 苏 丹 红 的测定。2 方法提要样品经溶剂提取后，用高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，以保留时间和紫外-可见
2、光谱图定性，峰面积外标法定量。必要时，采用液相色谱-质谱联用法进行确证。本方法对酸 性 黄 36、 颜 料 橙 5、 颜 料 红 53:1、 苏 丹 红 和 苏 丹 红 的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度见表 1。表 1 5 种着色剂的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度着色剂名称检出限（ng）定量下限（ng）检出浓度（ g/g）最低定量浓度（g/g）酸 性 黄 36 2.0 5.0 3.0 6.0颜 料 橙 5 2.0 5.0 3.0 6.0颜 料 红 53:1 5.0 8.0 4.0 10.0苏 丹 红 2.0 5.0 3.0 6.0苏 丹 红 2.0 5.0 3.0 7.03
3、 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为实验室用一级水。3.1 乙腈，色谱纯。23.2 甲醇，色谱纯。3.3 四氢呋喃，色谱纯。3.4 二甲基亚砜。3.5 乙醇，色谱纯。3.6 四丁基氢氧化铵，浓度为 55%。3.7 柠檬酸。3.8 氨水，浓度为 2528%。3.9 酸性黄 36，纯度99%。3.10 苏丹红，纯度94%。3.11 苏丹红，纯度90%。3.12 颜料橙 5，纯度97%。3.13 颜料红 53:1，纯度95%。3.14 酸性黄 36 标准储备溶液（ =500 g/mL）：称取酸性黄 36（3.9）对照品 50 mg（精确至 0.1 mg） ，置于 100 mL 容量瓶中
4、，用甲醇（3.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 500 g/ mL 的标准储备溶液。3.15 苏丹红标准储备溶液（ =500 g/mL）：称取苏丹红（3.10）对照品50 mg（按实际含量折算，精确至 0.1 mg） ，置于 100 mL 容量瓶中，用四氢呋喃（3.3）和乙腈（3.1）混合液（体积比 1:9）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得500 g/ mL 的标准储备溶液。3.16 苏丹红标准储备溶液（ =500 g/mL）：称取苏丹红（3.11）对照品50 mg（按实际含量折算，精确至 0.1 mg） ，置于 100 mL 容量瓶中，用乙腈（3.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 500 g/
5、mL 的标准储备溶液。3.17 颜料橙 5 标准储备溶液（ =250 g/mL）：称取颜料橙 5（3.12）对照品25 mg（按实际含量折算，精确至 0.1 mg） ，置于 100 mL 容量瓶中，用四氢呋喃（3.3） 、二甲基亚砜（3.4）和乙腈（3.1）的混合溶液（体积比 5:1:4）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 250 g/ mL 的标准储备溶液。3.18 颜料红 53:1 标准储备溶液（ =250 g/mL）：称取颜料红 53:1（3.13）对照品 25 mg（按实际含量折算，精确至 0.1 mg） ，置于 100 mL 容量瓶中，用3二甲基亚砜（3.4）和乙醇（3.5）的混合溶液（体
6、积比 2:3）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 250 g/ mL 的标准储备溶液。3.19 着色剂混合标准储备溶液（ =50 g/mL）：分别称取酸性黄 36 标准储备液（3.14） 、苏丹红标准储备溶液（3.15）和苏丹红标准储备溶液（3.16）各 5 mL，取颜料橙 5 标准储备溶液（3.17）和颜料红 53:1 标准储备溶液各 10 mL，置于 50 mL 容量瓶中，用乙腈（3.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度各为 50 g/mL 的标准溶液。3.20 5 种禁用着色剂系列标准溶液：精密量取一定体积的混合标准储备溶液（3.20） ，置 10 mL 容量瓶中，加乙腈（3.1）稀释至
7、刻度，使得着色剂各成分的浓度分别为 0.2 g/ mL、0.5 g/ mL、2.0 g/ mL、10.0 g/ mL、50.0 g/ mL。4 仪器4.1 高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器。4.2 液相色谱-串联四极杆质谱联用仪。4.3 分析天平：感量为 0.0001 g。4.4 分析天平：感量为 0.00001 g。4.5 精密移液器。4.6 涡旋振荡器。4.7 超声波清洗仪。4.8 高速离心机：转速不小于 10000 rmp。5 分析步骤5.1 样品预处理唇膏类：称取 0.5 g（精确至 0.001 g）样品，置 10 mL 具塞比色管中，加四氢呋喃（3.3）与乙腈（3.1）混合液（体积
8、比 1:9）至刻度，摇匀，涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取 30 min，放至室温，必要时，转移至 10 mL 具塞塑料离心管中，以 10000 rpm 离心 5 min，上清液经 0.45 m 滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。散粉类：称取 0.5 g（精确至 0.001 g）样品，置 10 mL 具塞比色管中，加四氢呋喃（3.3） 、二甲基亚砜（3.4）和乙腈（3.1）混合液（体积比 1:1:8）至刻4度，混匀，超声提取 30 min，放至室温，上清液经 0.45 m 滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。指甲油类：称取 0.5 g（精确至 0.001 g）样品，置 10 mL 具塞比色
9、管中，加 56 mL 乙腈（3.1） ，混匀，超声提取 30 min，放至室温，加乙腈（3.1）稀释至刻度，摇匀，静置，必要时，转移至 10 mL 具塞塑料离心管中，以 10000 rpm 离心 5 min，上清液经 0.45 m 滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。若样品中被测成分的浓度超过了线性范围的上限，需对试样溶液进行适当稀释处理。5.2 高效液相色谱参考条件色谱柱：C 18 柱（4.6 mm250 mm，5 m） 。流动相：A：乙腈B：缓冲溶液（10 mmol/L 四丁基氢氧化胺（3.6） ，10 mmol/L 柠檬酸（3.7） ，用氨水（3.8）调节至 pH 8.2)梯度洗脱，洗脱程序
10、见表 1。表 1 梯度洗脱程序时间（min） 流动相 A（%） 流动相 B（%） 流速（mL/min ）0.00 30 70 1.05.00 80 20 1.010.00 100 0 1.015.00 100 0 1.020.00 30 70 1.022.00 30 70 1.0流速：1.0 mL/min。检测波长：416 nm（酸性黄 36） ；484 nm（颜料橙 5、颜料红 53:1、苏丹红） ；514 nm（苏丹红） 。柱温：30。进样量：10 L。5.3 样品测定按设定的色谱条件（5.2） ，取着色剂系列标准溶液（3.20）分别进样，进行高效液相色谱分析，以系列标准溶液质量浓度为横坐
11、标，峰面积为纵坐标，进5行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程。取试样溶液（5.1）进样 10 L 分析，色谱图检出的成分，经与该成分的保留时间和紫外-可见光谱图比较确证后，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算各着色剂的浓度。按“6”项下计算公式计算化妆品样品中着色剂的含量。5.4 平行试验按以上步骤操作，对同一样品独立进行测定，获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算数平均值的 10%。5.5 阳性结果确证测定过程中若有阳性结果，可采用液相色谱-质谱联用法进一步确证。在相同的实验条件下，如果检出的色谱峰的保留时间和紫外-可见光谱图与对照品一致，所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准
12、溶液的离子对相对丰度比的偏差不超过表 2 规定范围，则可判定样品中存在对应的待测成分。表 2 阳性结果确证时相对离子丰度比的最大允许偏差相对离子丰度 50% 20%至 50% 10%至 20% 10%允许的相对偏差 20% 25% 30% 50%液相色谱-质谱联用法参考条件：色谱参考条件：色谱柱：C 18（2.1 mm150 mm, 3.5 m） ；流动相：乙腈-0.1% 甲酸水溶液系统梯度洗脱，梯度洗脱条件见表 3；柱温：30 ；流速：0.3 mL/min；进样量：5 L。表 3 梯度洗脱条件时间（min） 乙腈（% ） 0.1%甲酸溶液（% ） 流速（mL/min ）0.00 78 22
13、0.33.00 78 22 0.35.00 95 5 0.37.00 95 5 0.368.00 78 22 0.3质谱参考条件：毛细管电压：3.5 kV；二级锥孔电压：5 V；射频透镜电压：0.5 V；离子源温度：150 ；脱溶剂气温度：500 ；脱溶剂气流量：1000 L/hr；锥孔气流量：50 L/hr；碰撞室压力：3.210 -3 mbar；低质量端 1 分辨率：13.0；高质量端 1 分辨率：13.0；离子能量 1：0.5 V；碰撞室入口电压：-2 eV；碰撞室出口电压：1 eV；低质量端 2 分辨率：13.0；高质量端 2 分辨率：13.0；离子能量 2：0.5 V；光电倍增器电压
14、：650 V；碰撞气体：氩气；数据采集模式：多反应监测。在以上色谱、质谱条件下，5种禁用着色剂的定性离子对和保留时间见表4。表4 5种禁用着色剂的定性离子对和保留时间着色剂名称 定性离子对（m/z） 保留时间（min）颜料橙5 339.2/156.2，339.2/128.2 2.56酸性黄36 354.2/169.2，354.2/109.2 3.337颜料红53:1 377.2/221.2，377.2/128.2 4.11苏丹红 381.4/128.2，381.4/106.2 5.40苏丹红 277.2/156.2，277.2/128.2 5.966 计算w= V/m式中：w 样品中着色剂的质
15、量分数，g/g； 从标准曲线中得出的测试溶液中着色剂的质量浓度，g/mL；V 样品定容体积，mL；m 样品取样量，g。7 回收率和精密度两个浓度水平中，低浓度的平均提取回收率和平均方法回收率在 80%120%之间，并且 RSD 小于 10%（n=6） ；高浓度的平均提取回收率和平均方法回收率在85%115%之间，并且 RSD 小于 5%（n=6 ） 。8 色谱图min2.5 57.51012.51517.5202.5mAU02406801 DA1 , Sig=416, Ref=of (ZSJ FIVEPOWDER LVEL 201-8-03 2-01-54LINE09.D) 6.90 7.50
16、 10.8 13.09 17.21 416 nmmin2.5 57.51012.51517.5202.5mAU02406801 DA1 B, Sig=48, Ref=of (ZSJ FIVEPOWDER LVEL 201-8-3 2-01-54LINE09.D) 6.90 7.50 10. 13.09 17.2234 48 nmin2.5 57.51012.51517.5202.5mAU02406801 DA1 C, Sig=14, Ref=of (ZSJ FIVEPOWDER LVEL 20-8-3 2-01-54LINE09.D) 6.90 7.50 10.8 13.09 17.25 514 n图 1
