《j-09,10 实训二 rna的制备及纯度鉴定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《j-09,10 实训二 rna的制备及纯度鉴定（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、江苏农林职业技术学院讲稿 第 1 页 共 2 页第九、十讲授课内容 实训二 RNA 的制备及纯度鉴定 授课时数 4教学目标 掌握等电点沉淀法制备 RNA 的原理和操作，RNA 纯度鉴定的方法与操作教学重点 RNA 等电点沉淀法的操作、RNA 纯度测定方法教学难点 等电点沉淀法的原理教材教具教学内容（含教学步骤、时间分配、教法学法、作业布置等）实训二 RNA 的制备与纯度鉴定（4 学时）一、目的和要求1、掌握从啤酒酵母中提取 RNA 的基本原理和操作；2、掌握 RNA 纯度鉴定的原理和基本操作。二、实验原理啤酒酵母是 RNA 含量丰富的生物材料之一，从其中提取 RNA 可以开发利用废旧生产废料，
2、又能减少污染，是一项具有开发前途的技术，目前已有多家厂商致力于此项技术的开发利用。由于酵母细胞具有坚固的细胞壁，需首先破坏其细胞结构方可释放出其中的 RNA，一般利用盐溶液产生较大的细胞渗透压，使细胞破裂，释放出核蛋白体。然后在适当的温度（92）下使蛋白质变性沉淀，离心分离去除部分杂蛋白质；再调 RNA 等电点（2.5） ，使 RNA 沉淀，分离纯化、干燥后，即得 RNA 成品。纯品 RNA 的 A260/A280 比值为 2，据此可以鉴定所得 RNA 的纯度。三、实验材料1、材料啤酒酵母泥或干酵母粉（片）2、器材100ml 量筒、100ml 烧杯、水浴锅、玻璃棒、pH 计、pH 试纸、离心机
3、、干燥箱（器）、紫外分光光度计。3、试剂NaCl、6mol/L HCl、95%乙醇。四、实验步骤1、核酸提取（1）称取 10g 啤酒酵母泥或 5g 干酵母粉于 100ml 烧杯中，加水配成 10%酵母溶液。（2）破壁 向上述酵母溶液中加入 NaCl，使其浓度达到 10%。（3）去杂 用薄膜盖住烧杯，92水浴中保持 1 小时，冷水冲刷迅速冷却到 10下。3000rpm 离心 10min，除去菌体碎块和杂蛋白，得澄清上清液。（4）等电沉淀 向清液中加入 6mol/L HCl，调整 pH 至 2.5，置 4冰箱静置沉淀（第一次实验到此结束） 。江苏农林职业技术学院讲稿 第 2 页 共 2 页（5）收集 再离心（3000rpm ，10min） ，收集沉淀，用 95%乙醇洗涤，干燥，得到RNA 制成品。2、RNA 成品纯度鉴定（1）称取一定量（约 10mg）自己制得的 RNA 干品，加水至 100ml。（2）调整紫外分光光度计波长至 260nm，记录其吸光值；再调波长 280nm，测定吸光值。（3）计算 A260/A280，利用下式求算制成品纯度： 100.2/(%)86ARN样 品纯 度五、注意事项六、结果与讨论1、计算 RNA 得率（%） ，并分析其纯度。2、讨论影响 RNA 得率和纯度的主要因素。课后体会：
