原位杂交自己整理

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1、一、DEPC 水是用 DEPC(diethyl pyrocarbonate, 焦碳酸二乙酯) 处理过并经高温高压灭菌的 MiliQ 纯水。经检测不含杂质 RNA、DNA 和蛋白质。物理性质分子式:C6H10O5 分子量:162.1 外观:无色液体 折射率:1.398(20C)密度:1.12g/ml 摩尔浓度:6.9M DEPC 气味芳香浓烈,强挥发性,有毒,需在通风橱中操作。化学性质 DEPC 对湿气和酸碱敏感,在乙醇和二氧化碳的水溶液中缓慢分解,在 155C 自行分解。DEPC 在 氨水中特别不稳定,生成一种致癌的聚氨酯胶的物质。 DEPC 对核酸酶有积极地抑制作用。(主要是对含有-NH,-

2、SH,-OH 活性部位的酶起作用)。使用要点:DEPC 水可以用于 RNA 沉淀的溶解,含有 RNA 的各种反应体系如反转录、siRNA 的退火等,以及其它各种要求无 RNase、DNase 和 proteinase 的反应体系。通常使用 0.1%的 DEPC 水溶液使Rnase 失活,即 1ml DEPC 溶于 1L 纯净水中。溶解时,DEPC 不会很快溶解,开始时以小球的形式存在于溶液中,因此要在搅拌器中搅动直到小球消失为止。DEPC 自行分解成乙醇和二氧化碳很慢,可以通过高压灭菌处理破坏 DEPC 或水溶液中煮沸 15 分钟以上。注意事项保存:避光 干燥 密闭容器于 2-8C 注:使用时

3、要戴乳胶手套和口罩。如果不慎溅到皮肤或眼睛,应立即用大量清水冲洗,如果感到不适,就医。二、DEPC 处理枪头:1、用去离子水配制 0.1%的 DEPC,避光;2、将枪头 和 EP 管放入 0.1%的 DEPC 内,保证枪头和 EP 管内都充满 0.1%的 DEPC(看自己的操作习惯了,本人是用左手拿住镊子夹住枪头或者 EP 管,右手使用移液器吸取 0.1%的 DEPC,将枪头 或者 EP 管内充 满 0.1%的 DEPC);3、避光、静置、过夜4、装枪头 和 EP 管的盒子不需要用 DEPC 浸泡,将枪头或者 EP 管内的 DEPC 水大致去除干净后,装起,包好5、121 摄氏度,30min6

4、、180 摄氏度,干燥数个钟头 (三个左右吧,这个时间 具体记得不是很清楚了),用前拿出来注意:处理 DEPC 时需要戴乳胶手套、口罩!三、使用甲酰胺和二甲亚砜(DMSO)一般不会导致高背景。在杂交液中加入 30%二甲亚砜可使 T2 噬菌体 DNA 的 Tm 值比原先降低 14,而使用酰胺甚至可使 DNA 在室温下变性和复性。有报道反应液中每增加 1%的甲酰胺浓度,Tm 值可降低 0.72。但是不同的实验条件与实验室需要确定自己的杂交条件。四、Dextran sulfateDSS Dextran sulfate sodium salt 葡聚糖硫酸钠盐 MW:36000-50000物理性质:白色

5、或灰白色粉末描 述:硫酸葡聚糖是葡聚糖的聚阴离子衍生物,由葡聚糖和氯磺酸的酯化反应形成。 其中含硫量约为 17%,相当于葡聚糖分子的每个葡萄糖残糖中平均含 1.9 个硫酸基团。重要用途:提高核酸杂交率 - 溶液中含 10%的硫酸葡聚糖,DNA 链的再退火率约增加 10 倍,这一现象进一步扩大了单链或双链的探针与固定在膜上的 DNA/RNA 的杂交率。不仅如此,添加 10%硫酸葡聚糖也许会增加随机切割的双链 DNA 探针与固定化核酸的杂交率,高达 100 倍。显示免疫相关的活动:(1)体液免疫的增强和抑制。(2)B 淋巴细胞的多克隆活化作用,甚至可以刺激未成熟的 B 细胞。(3)胸腺细胞反应中,

6、促使转化成凝集素。(4)抑制血液凝固和血小板聚集。(5)增强血纤维蛋白溶解活性。(6)增强/抑制细胞介导的免疫应答。沉淀低密度(LDL)和极低密度(VDLD)脂蛋白 - Mg2+存在的条件下,硫酸葡聚糖沉淀人血清中的低密度脂蛋白,上清液中留下高密度脂蛋白。利用硫酸葡聚糖的沉淀作用去除脂蛋白这一功能同样可以用来纯化其他材料,如 -2-糖蛋白。作为佐剂发挥作用;溶解度:溶于水(100mg/ml - 澄清或者轻微模糊的黄色溶液,高分子量的产品在水中的溶解度没有低分子量强)。灭菌前水溶液应配成缓冲体系(如碳酸氢钠),防止降解。MP 产品价格:货号 包装 价格(RMB)0216011001 1G 483

7、 0216011010 10G 724.5 0216011050 50G 2173.5 0216011080 100G 3542 0216011090 500G 16261贮藏条件:25五、Tris-HCl三羟甲基氨基甲烷。外观:白色结晶 水溶性:无色,澄清毒性:毒性低,可致癌,不要直接接触皮肤。Tris 缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂,还有许多重要用途。Tris 被用于不同 pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris 缓冲液的低离子强度特点可用于线虫( C. elegans)核纤层蛋白(lamin)的中间纤维的形成。Tris 也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一,其在电泳缓冲液中与甘氨酸构成

8、缓冲体系,稳定电泳过程中的 PH。此外,Tris 还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris 也被用作滴定标准物。 作为蛋白缓冲液时,若后续工作需要质谱,则不适宜用 Tris,最好换成其他质谱仪可耐受的缓冲液。六、EDTA乙二胺四乙酸。EDTA 是一种重要的络合剂。EDTA 是螯合剂的代表性物质。能和碱金属、稀土元素和过渡金属等形成稳定的水溶性配合物。在分子生物学实验中:是二价金属螯合剂,抑制核酸酶;降低细胞膜的稳定性。危险性:作为广泛应用于洗护产品中的 EDTA,其刺激皮肤,黏膜,引起哮喘,皮肤发疹的负面作用正在凸现,是一种可能引起过敏的物质,通过丙二醇等透皮吸收剂被摄取后会引起钙缺乏症,血压降低,肾脏障碍,染色体异常和原生变异等一系列有害作用。储存方法:1. 禁止阳光直接照射及避免接近热源。2. 开盖使用后请即刻拧紧瓶盖。3. 使用时请倒入干燥及干净的器皿中,切勿直接用移液管从瓶中取液。4. 请于规定有效期内使用。5. 该产品可于室温保存。6. 禁止与具有挥发性物质存放在一起。七、柠檬酸钠:柠檬酸三钠一般指柠檬酸钠。二水柠檬酸钠:分子量 294.1

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