蛋白质电泳测种子纯度

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1、1、种子纯度:是种子品质各项指标中最重要的指标,蔬菜育种上的一个重要问题。种子纯度标准:原种不低于 95%;生产种子不低于 85%。2、主要鉴定方法有:2.1 常规鉴定方法:2.1.1 田间小区种植鉴定:2.1.2 物理化学快速鉴别法(根据种子在某些特殊的化学试剂或其它特殊条件下,产生特定的反应,鉴定品种的纯度。此方法快速、简便,但因特异反应很有限,应用范围受到很大限制。只能适用某些作物种子) ;2.1.3 幼苗鉴别鉴定法;幼苗鉴别可通过两个主要途径:一种是提供给植株加速发育的条件,当幼苗达到适宜评价的发育阶段时,对幼苗进行鉴定:另一种途径是让植株生长在特殊的逆境条件下,测定不同品种对逆境的不

2、同反应来鉴别不同品种。该方法的优点是:鉴定在特定的条件下进行,受鉴定者人为因素影响小,比较客观;缺点是: 鉴定周期也比较长 ,一般需二至三周,且能用于鉴定的性状少,只能用于品种间有差异样品的鉴定。2.1.4 形态鉴定法:(根据种子形态特征,逐粒观察,同标准样品或鉴定图片等比较。该方法最为简便、快速、经济,但对品种间形态差异较小的品种和杂交种中混有的自交系很难区分),2.2 生理生化鉴定法:利用电泳技术,在分子水平上对具有不同遗传特性的种子予以鉴别。这些方法直接测定的是蛋白质或 DNA,准确性高。2.2.1 蛋白质电泳鉴定法;种子蛋白电泳和同工酶电泳2.2.2 DNA 标记鉴定法;rflp、ra

3、dp、aflp、ssrRFLP: 利用限制内切酶将供检品种 DNA 酶切,产生的 DNA 片段的长度和数目反映了限制性内切酶的切点在 DNA 上的分布,通过电泳分离成不同的带,再转移到支持膜上,用放射性分子探针与支持膜上的 DNA 杂交,利用放射性自显影技术,显示出 DNA 带的位置,检验的准确性高,重复性好,但这种方法需要的设备昂贵,成本高,操作技术难度大,周期长,需要的 DNA 纯度高,且常使用放射性物质,危险性大,应用推广受到很大限制。AFLP这种方法结合了 RFLP 和 PCR 两种技术,重复性好,多态性极高 ,探测位点多的优点,但由于其技术要求高,设备昂贵,在纯度鉴定应用上受到很大限

4、制。电泳侧种子纯度常见的方法有两种:一是同工酶电泳,而是贮藏蛋白电泳法。RAPD优点:操作简单,周期短,成本较低 ,对 DNA 的纯度显示不高 ,RAPD 引物数目极多,且有通用性。但有结果不稳定,重复性差,各实验室结果没有可比性等缺陷。SSR它最早是用于测定 DNA 序列的研究上。用 RFLP 探针两端重复序列合成特异性引物,再进行 PCR,扩增多态性 DNA 片段,将繁琐的 RELP 分析转换成了简单的 PCR 反应。由于 PCR反应对 DNA 量要求不高,检测扩增片的多态性也相对比较容易,操作难度较低,但由于它需要先知道 DNA 序列,在实际应用中受到很大限制。随着对 DNA 序列的研究,利用重复序列进行种子纯度鉴定一定会得到更广范的应用。原理:由蛋白质合成的中心法则说明了有什么样的遗传基因(DNA) ,就有其特征的蛋白质,因而,只哦那个字蛋白质可以作为种子遗传基因的标志,能反映遗传组成的差异。

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