《时间分辨荧光免疫分析法产前筛查原理与操作规程》由会员分享，可在线阅读，更多相关《时间分辨荧光免疫分析法产前筛查原理与操作规程（17页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1时间分辨荧光免疫分析法产前筛查原理与操作规程一、产前筛查定义及其原理产前筛查（Prenatal Screening)是指通过经济、简便和较少创伤的检测方法，从孕妇群体中发现怀有某些先天缺陷胎儿的高危孕妇，以便进而进行诊断，以最大限度地减少异常儿的出生。血清学标志物产前筛查已成为非侵入性产前诊断的重要方法。目前产前筛查的两种主要疾病是唐氏综合征（Downs Sydrome，DS；又称 21三体综合征）和胎儿神经管缺陷（Neural Tube Defects，NTDs） ，也包括一部分 18三体综合征。产前筛查可以在妊娠早期（713 周）或中期（1421 周）进行。目前用于产前筛查的血清学标志物
2、有：甲胎蛋白（AFP） 、游离 -绒毛膜促性腺激素（F-hCG） 、游离雌三醇（uE 3） 、妊娠相关血浆蛋白（PAPP-A） 、抑制素 A（inhibin A）等。产前筛查实验测量通用评价指标为中位值倍数（MOM） ，正常妊娠特定的 MOM=标本检测浓度/相应孕周中位值浓度。产前筛查系统由体外诊断试剂、检测仪器和筛查分析软件组成。检测仪器配合体外诊断试剂检测出孕妇血清中标记物（AFP、F-hCG、PAPP-A 等）的浓度，将检测数据及孕妇相关因素输入筛查分析软件中，即可得出唐氏综合征（DS）和神经管缺陷（NTD）筛查的结果。由于目前的技术水平的限制，产前筛查技术都不能做到筛查 100%正确。
3、假阴性病例因此会误诊，假阳性病例一般在产前诊断实验时被纠正。二、唐氏综合征的产前筛查唐氏综合征是人类最常见的一种染色体病，发病率约 1/8001/600，男性多于女性。1866 年英国医生 Langdom Down 首次对此病进行临床描述，因此命名称为 Down， s Syndrome，简称 DS。1959 年 Lejeune首先发现本病的病因是多了一条 21号染色体，故又将其命名为 21三体综合征。唐氏综合征的主要临床表现：严重智力低下、愚型面容，约 50%伴有先天性心脏病、小头畸形等发育异常。目前对 DS尚未有治疗方法，因此通过产前筛查找出高危孕妇，对其进行产前诊断是防止患儿出生的重要手段
4、。1.以孕妇年龄作为筛查指标最早用于 DS的筛查指标为孕妇年龄。早期研究发现，DS 的发病率随孕妇年龄增高而增高，1977 年 Hook和 Chambers报道了孕妇年龄在 2030 岁之间，发病率呈线性增加，而在 33岁左右呈对数增加，孕妇年龄为 35岁时，发病率2约 1/384，40 岁时约 1/110，比 30岁时增加了 8倍，如图 1。一般认为 35岁以上的孕妇是 DS的高危人群，是要进行羊膜腔穿刺的指征。但深入研究统计发现，若仅以孕妇年龄35 岁作为筛查指标，DS 的检出率约 20%，而约 80%的胎儿 DS是在年龄小于 35岁的孕妇人群中。因此，不少国家的筛查机构指出“DS 产前筛
5、查应面向所有孕妇而不考虑年龄” 。仅用孕妇年龄指标不够全面，应结合应用孕妇血清标志物指标或超声波形态学联合筛查诊断。图 1 孕妇年龄与胎儿发生唐氏综合征风险的关系2. 以孕妇血清标志物为筛查指标1984年英国 Merkatz等最先发现怀有 DS胎儿的孕妇血清 AFP含量降低，这在产前筛查史上是一个划时代的进步，建议将 AFP作为 35岁以下孕妇胎儿DS的筛查指标。这一发现很快被其它实验室证实，1987 年 Bargot发现怀有 DS胎儿的孕妇血清中的 hCG的水平是正常孕妇的 2倍，以孕妇年龄再结合血清中hCG检测，DS 的筛查率可达到 63%。1988 年，Canick 等发现怀有 DS胎儿
6、的孕妇血清中 uE3的水平比正常孕妇低 25%。同年，伦敦 Bartholomews医院 Wald提出 AFP、-hCG、uE 3三联的筛查方法。1994 年美国妇产科学院向全美医学界正式推荐这一组合，并得到广泛应用，一直至今。在上世纪 90年代，有学者还相继发现 PAPP-A、inhibin A、糖原抗原 125（CA-125）等与孕妇怀 DS胎儿有关。也将逐步应用到 DS的产前筛查中。甲胎蛋白（AFP） 是胎儿血清中最常见的蛋白质，1956 年由 Bergstrandh和 Czar在人胎儿血清中发现的一种甲种球蛋白。早孕期由卵黄囊产生，晚孕期由胎儿肝脏大量产生。胎儿血中的 AFP经排尿进入
7、羊水并通过胎盘屏障渗入母血。孕 10周即可在母血中测出 AFP，孕 1120 周 AFP浓度呈线性升高，3234 周（有文献为 2832 周）达到高峰，以后逐渐下降，分娩后几天降为30。且孕早期以 AFP单项筛查胎儿染色体异常无意义，因此母血中 AFP的检测在孕中期 1420 周进行。正常孕妇血中 AFP含量变化见图 2与表 1。当孕妇胎儿患 DS时，由于胎儿生长发育迟缓，组织器官发育不全，肝脏、胎盘的功能不良，合成 AFP能力降低，致使孕中期母血清 AFP水平下降（一般2.5MOM） ，如图 3。表 2 正常妊娠母血清 hCG含量参考值（U/L）妊娠期（周） 受精后 距末次月经 U/L2 4
8、 51003 5 20030004 6 1000080000512 714 900005000001324 1526 5000800002638 2740 300015000摘自：周新，涂植光.临床生物化学和生物化学检验，第 3版.北京：人民卫生出版社，435.表 3 正常妊娠母血清 -hCG 含量参考值（mIU/ml）孕周 1 -hCG 孕周 2 -hCG 孕周 2 -hCG1 555 13 77335.73304.9 20 18568.73718.22 42100 14 5614624314.9 21 18046.16691.53 106500 15 48704.533045.5 22 2
9、0174.215022.34 631000 16 38275.421572.4 23 22282.35493.35 15010000 17 29620.611921.4 24 16393.14735.37 100015000 18 28100.511952.8 25 19403.97825.3912 120020000 19 29392.413482.8 26 174559505.5摘自：1.韦振元等.血清 -hCG、HPL 和 -hCG/HPL 比值对妇产科疾病的临床意义.标记免疫分析与临床，1999，6（1）：9-12.2. 王晓雯等.孕中期各周 -hCG 正常值测定及其临床意义.中国优生
10、与遗传杂志，2000，8（2）：62.5图 3 -hCG在正常孕妇和怀有唐氏胎儿孕妇血清中的分布游离雌三醇（uE 3） 是雌二醇（E 2）和雌酮（E 1）的代谢产物，在非妊娠女性中浓度很低，而在妊娠后期浓度则明显增加。只有约 9%的 E3在血液循环中游离为 uE3。在妊娠后期 E3由胎儿肾上腺、胎肝和胎盘大量合成，反映了胎儿和胎盘双方面的功能。母体血清 E3约 90%来自此合成途径，少量由母体卵巢前体生成。E 3生物合成途径的中断将导致母体血清 E3低水平。造成 E3途径中断的情况：胎儿宫内发育迟缓、无脑畸形、胎盘硫酸酯酶缺乏、死胎、染色体异常等，缺乏 E3的孕妇分娩期将推迟。在胎儿正常发育的
11、情况下，其母体内 uE3含量自 2934 周逐渐上升，3536 周开始快速上升，在 4142 周（3738 周或4041 周）达高峰，正常妊娠孕妇 uE3参考值见表 4与图 4。uE3被用于胎儿 DS筛查主要在孕中期，应注意正常妊娠孕妇 uE3是孕中期变化最大的指标，必须核对孕周。在孕妇怀 DS胎儿时，母体血清中 uE3表现为降低异常（一般2.5MOM 可见于唇裂、尿道下裂等。表 5 正常妊娠孕妇血清 PAPP-A参考值（mIU/ml）孕周 平均数 中位数 0.5倍中位数 2.5倍中位数4 0.008 0.012 0.006 0.0305 0.074 0.034 0.017 0.0858 0.
12、784 0.321 0.160 0.80511 4.946 3.269 1.634 8.17314 11.374 10.880 5.440 27.20017 16.253 15.783 7.892 39.45820 22.392 21.920 10.960 54.80023 26.076 25.820 12.910 64.55026 24.674 26.635 13.318 66.58829 30.361 27.210 13.605 68.02532 28.888 29.540 14.770 73.85035 35.108 31.310 15.655 78.27538 34.233 37.36
13、0 18.680 93.40041 31.765 34.460 17.230 86.150引自：章晓梅，李春华，冯怀英，等.孕妇血清 PAPP-A蛋白测定早期筛查染色体病.中国优生与遗传杂志，2001，9（2）：24-38.0.00020.00040.00060.00080.000100.0004 5 8 11 14 17 20 23 26 29 32 35 38 41孕周系列 1系列 2系列 3系列 4注：4-41 周孕妇血清 PAPP-A浓度曲线，系列 1为浓度平均数，系列 2为中位数，系列 3为 0.5倍中位数，系列 4为 2.5倍中位数。图 5 正常妊娠孕妇血清 PAPP-A含量变化趋
14、势8抑制素 A（inhibin A） 被认为是一个由合胞体滋养层产生的化学物质，1992年有学者开始研究其与 DS胎儿的相关性，研究发现孕妇血清中与 DS胎儿相关的主要物质是二聚体抑制素 A。Aitken 等研究发现，在妊娠 78 周检测二聚体抑制素 A，怀 DS胎儿的孕妇血清中二聚体抑制素 A浓度较正常孕妇的高出2倍。进一步结合 AFP、hCG 能大大提高 DS的检出率，在一些多标记联合筛查中发现其作用不可忽视，甚至超过 uE3的趋势。糖原抗原 125（CA-125） 为一种大分子量糖蛋白，其生理功能目前尚有争议。1990 年 Cherk等报道孕早期孕妇血清中糖原抗原 125水平高于正常值，
15、可能与胎儿自发流产和 DS有关。1997 年 Wenstrom等用研究数据统计表明，这一标记在筛查 DS胎儿时，其阳性率可达 45%，并认为这一标记可用于多标记联合筛查。三、胎儿神经管缺陷的产前筛查胎儿神经管缺陷（Neural Tube Defects，NTDs）是出生缺陷最常见疾病类型之一，其发病是由于受精后 2024 天内神经盘折叠过程中神经管不能闭合导致的。多数的神经管缺陷是开放性的，神经组织完全暴露或仅仅盖有一层薄薄的透明膜；只有极少部分损伤是闭合性的，神经组织由皮肤或一层很厚的膜完全覆盖。无脑畸形、脊柱裂、脑膨出是神经管缺陷三种主要类型。1977年首次报道血清中 AFP水平升高和开放性神经管缺陷畸形有关，因为开放性损伤时胎儿体内高浓度的 AFP有可能通过胎儿血液循环到达羊水，再通过羊膜渗入母体循环，引起母体血清中的 AFP显著升高。因此通过检测孕妇血清中
