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1、真菌（1-3）-D 葡聚糖测定规范操作1.目的建立真菌（1-3）-D 葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。3.实验原理（1-3）-D 葡聚糖检测原理：真菌（ 1-3）-D 葡聚糖激活酶反应主剂中的 G 因子后形成凝固蛋白， 根据其所引起的浊度变化对真菌（ 1-3）-D 葡聚糖浓度进行定量测定。4产品性能指标4.1 灵敏度 10pg/ml4.2 精密度 批间 CV10% 。4.3 准确性 回收率 75-125%。 4.4 标准曲线相关系数 r 绝对值0.980 5实验组成5.1 实验仪器及器具： MB-80 微生物快速动态检测系统、洁净工
2、作台、低速离心机、恒温仪， 20200l 加样器、 1001000l 加样器、旋涡混合器、定时器。5.2 实验耗材： 200l 无热原吸头、 1000l 无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。5.3 试剂盒组成：真菌（1-3）-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）：试剂盒包括反应主剂和样品处理液。6工作环境相对湿度：20%80% ；温度控制：1030；电源电压：220V10% ，50Hz2%。7标本采集及保存7. 1 检测样本：血液、脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液等。7.2 采集要求： 采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝） 。常规病人早上用药治疗前采血/取样（血透患者透析
3、前采血） 。7.3 样本保存：样本采集后应在 3000 转/分进行离心，若不能及时检测，应将血浆转移至无热原转移管内，在-20冰箱中冷冻保存，一周内使用。8操作程序8.1 打开 MB-80 微生物快速动态检测系统主机、电脑及恒温仪预热 30min。8.2 打开 MB-80 微生物快速动态检测系统软件，录入病人信息、样本种类及检测项目等信息后点击采集。8.3 血液前处理过程，无菌操作，用专用无热原真空采血管（肝素类抗凝）抽取静脉血4ml 轻轻混匀，按转速 3000r/min 进行离心 1 分钟，得到富含血小板血浆。8.4 取上述富含血小板血浆 100l，加入到样品处理液中，轻轻摇匀 10 秒后插
4、入恒温仪加热区中进行 70干热 10min。8.5 干热结束后，将前处理液冷却 5min，至室温后取出（取出时切忌震荡） 。8.6 取上述前处理液中上清液 200l 加入到反应主剂中，轻轻混匀（一般混匀 10 秒即可） ，待完全溶解至透明后，全部移液至平底试管中(不要产生气泡) ，立即插入MB-80 微生物快速动态检测系统中进行检测。8.7 反应结束后仪器自动计算结果并保存。待测血浆样品制备、检测示意图9操作注意事项9.1 预热采集在进行试验之前，仪器一定要提前预热 30min，达到工作温度后，按要求填写表头信息，完毕后点击采集，使仪器处于采集状态后再进行试验。9.2 样本预处理9.2.1 血
5、液标本 3000r/min 离心 1min。9.2.2 取富含血小板血浆（离心后上层清液的中部） 。9.2.3 70加热时间严格控制在 10min。9.2.4 样本处理液加热冷却后，不要震荡以免将处理过的下层干扰物质悬浮上来。9.2.5 取处理液的上清液。9.2.6 加入主剂的 200l 液体要全部转移至平底试管，转移过程中不能出现气泡。9.2.7 平底试管要一次插到底，插入后不要再碰触。10结果判断与分析检测值10pg/ml,阴性。检测值介于 1020pg/ml 之间，临床观察期，建议动态采血检测。检测值20pg/ml，阳性，建议再次采血以确诊。11实验解释本实验结果仅对本标本负责，提供给临
6、床参考，请结合其他诊断方法和临床表现做综合诊断。12. 特殊标本处理对一般黄疸、溶血、乳糜血标本，稀释 2-5 倍后进行检测。稀释步骤为：取 100l 血浆标本加入到前处理液中，经过 70干热并冷却后，再取 225l 上述经处理后的标本加入到另外的一支 900l 前处理液中，即得稀释 5 倍的待测标本（如需其他稀释倍数则按相应的比例进行） ，然后取 200l 加入到反应主剂，溶解后全部转移至平底试管中插入仪器进行检测，注意需在检测软件中“稀释倍数”一栏填上稀释倍数，仪器会自动按照相应的稀释倍数计算结果。备注：对于严重的黄疸、溶血、乳糜血标本，应重新采血。13干扰因素13.1 产生的假阳性的原因
7、有：应用纤维膜进行血液透析患者、某些纱布或其他医疗物品中含有葡聚糖、某些品牌的静脉制剂（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等）含有葡聚糖、某些细菌败血病患者（尤其是链球菌败血症） 。13.2 特殊真菌如接合菌（毛霉菌、根霉菌）细胞壁没有（1-3）-D 葡聚糖成分，隐球菌细胞壁外有荚膜致使（1-3）-D 葡聚糖释放不出，这些真菌无法检测到。14质量控制标本进行测定时应同时进行标准曲线的制作，目的是测定真菌（1-3）-D葡聚糖的测试性能及验证检测结果的准确性能。（标准曲线的制作见标准曲线制作规范操作文件）15维护保养15.1 仪器保养 注意防尘、防水、防污染、防止异物进入试管孔内；定期做好系统的表面清洁
8、。15.2 软件维护 本系统的计算机应只供本系统使用，对外来的一切软件、数据文件在使用前一定要先查杀病毒，避免造成日常记录文件的损坏或丢失。15.3 三个月使用检测软件中的系统自检 功能，确保仪器工作正常。16安全防护措施16. 1 试剂盒应 28避光保存，使用前应检查有效期。若过期或出现破损禁止使用，以免影响测定结果。16.2 试剂盒为体外诊断试剂，其中的成分可能会导致皮肤和眼睛疼痛，也可刺激黏膜和上呼吸道，所以应避免与皮肤接触，避免吸入和食入，禁止使用于人体。16.3 实验操作中避免微生物及细菌污染17.标本处理已检验过的标本作高压灭菌后由专门人员统一处理18. 异常结果处理本实验结果异常需与临床诊断相符合，不符合的结果应及时复查或与临床联系19应急处理若出现不能自行解决故障，应及时联系经销商或工程师处理，并告知微生物实验室负责人。20.参考文献 张秀珍，朱德妹主编临床微生物知识检验问与答人民卫生出版社第一版2008 周庭银，倪语星主编临床微生物检验标准化操作上海科学技术出版社第一版2009 MB-80 微生物快速动态监测系统配套使用说明书 中国合格评定国家认可委员会CNASGL23:2008 医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南
