《高效液相色谱法测定山楂叶中槲皮素的含量》由会员分享，可在线阅读，更多相关《高效液相色谱法测定山楂叶中槲皮素的含量（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1高效液相色谱法测定山楂叶中槲皮素的含量作者：权迎春 关丽萍 郑光浩【关键词】 高效液相色谱法摘要：目的建立山楂叶中高效液相色谱(HPLC) 法的含量测定方法。方法采用 HPLC 对槲皮素进行定量测定；采用 YMCpack ODSA(4.6 mm250 mm,5 m)，色谱柱，检测波长为 370 nm。结果色谱条件为流动相 甲醇 0.2%磷酸溶液(5050)；柱温 25 ；流速 0.8 mlmin1，此法线性范围 0.080.32 g，r=0.999 2，方法的精密度 RSD 为 1.04%(n=5)。平均回收率为 96.75%，RSD=1.67%(n=5) 。结论此方法操作简便、准确性好，可
2、以作为山楂叶中槲皮素含量测定方法。关键词：山楂叶； 高效液相色谱法； 槲皮素； 含量测定Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of quercetin in hawthorn leaf.MethodsThe content of quercetin was detemined by HPLC.YMC ODSA(4.6 mm250 mm,5 m)column was used.The detection wavelegth was set at 370 nm.ResultsThe mobile ph
3、ase 2consisted of methanol0.2%phosphatic acid(5050)with flow rate 0.8 mlmin1and column temperature at 25.The method was liner within the range of 0.080.32 g(r=0.999 2).The method RSD was 1.04%(n=5).The average recovery of assay was 96.75% and RSD=1.67%(n=5).ConclusionThe method appeared to be simple
4、,highly accurate.It can be used for the appeared determination of quercetin in hawthorn leaf.Key words:Hawthorn leaf; HPLC; Quercetin; Determination山楂叶为蔷薇科植物山里红 Crataegus pinnatifida Bge.Var.major N.E. Br.或山楂 Crataegus pinnatifida Bge 的干燥的叶，秋季果实成熟后采收。多产于我国北方，是一种常用天然药用植物，其野生资源非常丰富。近几年随着提取工艺、检测手段的提高，对
5、于山楂叶的研究有了很大进展。研究表明，已经从山楂叶中分离出山楂素、槲皮素、山萘酚、芦丁、胡萝卜苷及二十九烷醇等成分1，2 。其药理作用主要有对抗氧自由基的清除作用、降血压、降血脂功能3，4 等。槲皮素为山楂叶中一种黄酮类化合物，研究表明，槲皮素具有抗炎、抗自由基、抗氧化的药理活性5，6 。本实验采用 HPLC 色谱法测定了山楂叶中槲皮素的含量，此方法准确、灵敏度高、重现性好。31 仪器、试剂和药品SCL10Avp 型高效液相色谱仪 (日本岛津)；SPD10Avp 型紫外可见检测器(日本岛津 )； RE52C 型旋转蒸发仪(上海青浦沪西仪器厂)；SHSB95 型循环水式真空泵(郑州长城科工贸有限
6、公司 )；TG328B 型分析天平(上海精密科学仪器有限公司) ；MP200 型电子天平(上海良平仪器仪表公司)。甲醇( 色谱纯)，槲皮素(对照品，中国药品生物制品检定所)。样品采自吉林省延吉市市郊，由延边大学药学院刘永镇教授鉴定为真品。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱为 YMCpack ODSA(4.6 mm250 mm,5 m)色谱柱；流动相为甲醇 0.2%磷酸溶液 (5050)；柱温：25 ；流速：0.8 mlmin1。2.2 测定波长的选择取槲皮素对照品配制成一定浓度的甲醇溶液，在 200500 nm 波长范围内进行紫外光谱扫描，确定 370 nm 做为测定波长。2.3 标准曲线绘
7、制42.3.1 标准溶液的配制精密称取槲皮素对照品 8.9 mg，置于 50 ml 量瓶中，加入甲醇溶解，定容于 50 ml，然后精密吸取 1 ml 置于 10 ml 容量瓶中定容，备用。2.3.2 线性范围取上述槲皮素对照品溶液，分别进样5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，17.5 l，按色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准吸收曲线，得槲皮素(C)与峰面积 (A)的关系，C=599 3701.628 245A，相关系数 r=0.999 2。结果表明，槲皮素溶液浓度在 0.080.32 g 内，槲皮素峰面积(A) 与浓度(C) 之间呈良好的线性关系。HP
8、LC 色谱图见图 1。图 1 HPLC 色谱图2.4 精密度实验精密吸取对照品供试液，按“2.1” 项下条件，连续进样 5 次，10 l/次，测定峰面积积分值计算 RSD 值，结果RSD=1.04%，说明仪器和色谱条件均具有良好的精密度。2.5 重现性实验精密称取药品粉末 0.5 g 共 5 份，按“2.8” 项下样品溶液的制备操作，按“2.1” 项下条件连续进样 5 次，每次 20 l，测定峰面积计算得 RSD=1.35%，结果显示，该方法具有较好的重现性。52.6 稳定性实验在室温条件下，将样品按测定方法处理后，分别在 0，0.5，1.0，1.5，2.0 h 每次进样 20 l，测得峰面积
9、计算RSD=0.84%（n=5） 。结果表明，该溶液含量基本保持不变。2.7 回收率实验精密称取样品 0.5 g 共 10 份，其中 5 份按 2.8项下测定样品本底含量，5 份各加入槲皮素对照品溶液适量，溶解。按 2.8 项下采用高效液相色谱法测定槲皮素含量，计算回收率为96.75%，RSD 为 1.67%(n=5)。2.8 山楂叶提取物中槲皮素含量的测定称取干燥并切成细段的山楂叶 50 g，用 8 倍量 75%乙醇浸泡过夜，80 水浴里回流 3 h，提取两次，合并滤液，用旋转蒸发器减压浓缩，获山楂叶乙醇提取物粗粉，精密称取提取物 100 mg，加入少量甲醇溶解，移入 50 ml 量瓶中，定
10、容，摇匀，用微孔滤膜过滤，作为供试液，精密移取供试液 20 l，注入高效液相色谱仪，在 370 nm 处测定峰面积，根据线性回归方程，计算含量见表 1。表 1 山楂叶中槲皮素含量测定的结果序号 （略）3 讨论6本实验利用高效液相法测定山楂叶中槲皮素的含量尚属首次，该方法简便、准确，重现性好，为山楂叶药物的开发提供了质量控制标准。参考文献：1 张培成, 徐绥绪.山楂叶化学成分研究J.药学学报，2001:36(10):754.2 斯建勇 ,陈迪华 .云南山楂叶化学成分的研究J.中国中药杂志，1998,23(7):422.3 黄沛力,曾绍辉. 银杏叶、山楂叶对抗氧自由基的清除作用J. 中国中药杂志,1996,21(4):245.4 黄 飞.山楂叶多糖的功能活性测定研究J .广西轻工业,2001，(2):47.5 Zhang XW,Zhang XB,Quan JS,et al.Inhibitory effect of sorbifolia on DENinduced precancerous hepatic foci and its antioxidative activies in ratsJ.肿瘤防治杂志 ,2003,10(11):1137.
