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1、四国药典有关药品微生物限度标准的比较日期：2005-2-21 来源： 作者：胡敏1 胡昌勤* 刘文英 2 字体：大 中 小 四国药典有关药品微生物限度标准的比较微生物限度规定的作用，是为药品生产提供一个标准或指导，以确保药品使用的安全。各国药典标准分为强制性的和非强制性的可达到的限度标准，这些指标正确、有效地规范了药品生产、检定和监督的程序。药品要能反映不引起生物降解物和没有药源性污染的微生物存在是必要的，严格控制条件致病菌及致病菌。一、CP 、USP 、 BP、JP 的微生物限度要求的特点及其发展趋势各国药典收载微生物限度检查法的时间不同(见表 1)表 1 各国药典收载微生物限度检查法的时间
2、各国药典CP USP BP JP收载微生物限度检查法的时间1995 版* 1975（19）1973-方法1988-品种 *第十三改正版*1978 年颁布第一个药品卫生标准；1986 年颁布了修改的药品卫生标准；1989 年下发药 品卫生标准补充规定和说明 1995 年版中国药典收载微生物限度检查法（标准仅为少数剂型）*品种 98 版 43 个，其中原料药品种 38 个，制剂品种仅 5 个。*仅有 6 个品种。品种不断扩大USP 版本（年代）19（1975） 22（1990） 23（1995） 24（2000）微生物限度品种数 35 140 150 217*217 种包括原料药品种 72 个（占
3、 1/3） ；制剂品种（占 2/3） 。活菌数要求各有特点活菌数（个/1g 或1ml）CP BP JP USP需气菌 1023104 102107 102103 10104真菌 0102 102105 5105102 10103控制菌的要求各有特点CP BP JP USP大肠杆菌 + b + b + b + a 沙门菌 + b +a + b + a 铜绿色假单胞菌 +b + b + b +a金黄色葡萄球菌 +b + b + b + a破伤风杆菌 + b 梭菌 +c肠道菌及其他某些革兰阴性杆菌 + c 支原体 +分枝杆菌 +病毒的其他因子 +活螨 + d a 10g 或 10ml 样品不得检出。
4、b 1g 或 1ml 样品不得检出。c 仅为个别品种要求 10103/1g 或 1ml。*d 不列在剂型项内而以说明提出，意即不作为常规检查，如有检出，以不合格处理的依据。二、稀释剂的种类CP BP USP一般制剂 0.9%的氯化钠溶液pH7.2 磷酸盐缓冲液肠溶胶囊（片）PH6.8 磷酸盐缓冲液pH7.0 缓冲氯化钠-蛋白胨水*乳糖肉汤培养基*其他合适培养基pH7.2 磷酸盐缓冲液大豆酪蛋白消化培养基*乳糖肉汤培养基*非水溶性的制剂（膏剂、油剂）1%吐温-80 0.9%的氯化钠溶液5 克吐温-20 或吐温-80吐温-20其他助溶剂* pH7.0 缓冲氯化钠-蛋白胨水：磷酸二氢钾 3.56g，
5、磷酸氢二钠 4.30g，蛋白胨（肉胨或酪胨 1.0g 纯水 1000ml/L。溶解以上成份，加入 110g 吐温-20 或吐温-80 。121高压蒸汽灭菌 30min。作用：可调节供试液 pH 至近中性，其中蛋白胨对菌细胞有保护作用，有利于菌数及控制菌的测定。吐温加入对含油性供试品的助溶具有作用。* USP、BP 微生物限度（污染）检查用稀释剂，除磷酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲胨水外，尚采用以上两种培养基，直接稀释供试品并作增菌培养.。三、稀释剂的用量关于供试品于稀释剂的配比，国外药典普遍规定为称（量）取供试品 10 g（或 10.0 g）或 10 ml（或 10.0 ml） ，加稀释剂使成为 10
6、0 ml，与我国药典的稀释剂固定加量有所不同。四、抑菌性供试品的判定及处理原则对供试品抑菌性的判定，应在检查前确定。 国外药典一般方法是以加有供试液和不含供试液的检样中加入定量的已知菌（控制 菌为 10100 个、菌数测定为 50200 个/ ml） ，经培养后检查。加入的对照菌能正常检出，加有供试液的菌落数和未加有供试液的菌落数相比较，后者不应超过前者 5 倍(JP13)及 10倍（BP1998） ，否则表明供试品具有抑菌性，必须采用相应的处理方法。方法：薄膜过滤法、稀释法和中和法。 我国微生物限度检查是根据不同稀释度的菌数变化和控制菌的阳性对照试验是否正常检出来判断的。菌数测定可根据报告规
7、则或培养基稀释法来报告抑菌性药品的菌数，尚未提供其他方法对供试品的抑菌性成分进行处理。控制菌的检查，需根据供试品的不同情况，适当地进行处理，以消除抑菌成分干扰。方法：稀释法、离心沉淀法、薄膜过滤法、中和法及树脂吸附法。五、活菌计数的方法比较CP BP USP JP平皿法 a + + + +d试管法(MPN)b + +薄膜过滤法 c + +a 是一种有条件的计数方法。其限制条件有三：.细菌计数是以平板上生长的菌落数为基础。 受特定培养基和培养条件限制。 有繁殖能力的菌细胞才能被认定“活菌” 。b MPN 适用于不完全溶解的供试品。一般采用三级 3 管制；此法所得的菌数与平板法所得的菌数不一定平行
8、。c 计数的薄膜，直径要大，最好有方格便于计数。遇到抑菌药物时，冲洗次数 23 次，冲洗量每次约 50100ml。d 平板涂布法：将供试液涂布在琼脂平板的表面，经培养后计数表面生长的菌落数。六、霉菌、酵母菌菌数测定的培养基及时间CP BP USP JP培养基 玫瑰红钠琼脂酵母浸出粉胨葡含抗生素的沙氏葡萄糖琼脂沙氏葡萄糖琼脂大豆酪蛋白消化含三种抗生素*的沙氏葡萄糖琼萄糖琼脂 大豆酪蛋白消化物琼脂物琼脂 脂培养时间（天） 3 5 57 5*有苄星青霉素、四环素等.七、控制菌鉴定方法的比较表 1 大肠杆菌CP BP USP方法 MI 法 IMViC 法 IMViC 法检验量（g 或 ml） 1 1
9、10稀释剂 09%氯化钠溶液pH7.2 磷酸盐缓冲液乳糖肉汤预增 25 小时3537增菌 胆盐乳糖增菌培养基35371824 小时麦康凯肉汤43451824小时乳糖液体培养基30352448 小时分离 EMB、Mac. 琼脂平板35371824 小时麦康凯琼脂平板43451824小时EMB、Mac. 琼脂平板30352448 小时生化试验培养温度 37 43.544.5 37生化试验判断模式 + + - - 或 - + - - + + - -或 + + - + + + - - 或 - + - -表 2 铜绿假单胞菌*CP BP USP检验量（g 或 ml） 1 1 10稀释剂 09%氯化钠溶液
10、pH7.2 磷酸盐缓冲液pH7.0 缓冲氯化钠-蛋白胨水大豆酪蛋白消化培养基增菌 胆盐乳糖增菌培养基35371824 小时大豆酪蛋白消化培养基353724 小时大豆酪蛋白消化培养基35372448 小时分离 溴化十六烷基三甲铵琼脂平板35371824 小时溴化十六烷基三甲铵琼脂平板353724 小时溴化十六烷基三甲铵琼脂平板35372448 小时生化试验 + + +*国外药典对某些原料药、口服制剂及外用制剂均作为特定菌控制。中国药典对外用制剂必检。表 3 金黄色葡萄球菌CP BP USP(JP13)检验量（g 或 ml） 1 1 10稀释剂 09%氯化钠溶液pH7.2 磷酸盐缓冲液pH7.0
11、缓冲氯化钠-蛋白胨乳糖肉汤液体大豆酪蛋白消化培养基增菌 营养肉汤（或含亚碲酸甲）培养基35371824 小时大豆酪蛋白消化肉汤培养基3537 2448 小时大豆酪蛋白消化液培养基35 2448 小时分离 甘露醇氯化钠琼脂平板、卵黄氯化钠琼脂平板35372448 小时BP 琼脂平板3537 2448 小时甘露醇氯化钠琼脂平板或 BP 琼脂平板或VJ 琼脂平板35372448 小时血浆凝固酶试验 + +* +*对过氧化氢酶阳性球菌，可用血浆凝固酶试验和脱氧核糖核酸酶试验。表 4 沙门菌CP BP USP检验量（g 或 ml） 1 10 10稀释剂 09%氯化钠溶液pH7.2 磷酸盐缓冲液乳糖肉汤
12、乳糖液体培养基增菌 营养肉汤培养基35371824 小时乳糖肉汤 乳糖液体培养基35372448 小时二次增菌 TTB 培养基35371824 小时TTB 培养基42431824 小时SC、TTB 液体培养基35372448 小时分离 EMB、Mac.C、 DHL、SS 琼脂平板35371824 小时DC、XLD.琼脂平板43452448 小时BG、XLD、BS 琼脂平板35372448 小时生化试验 + + +八、结果判断及复试CP BP USP控制菌 一次检出为准 一次检出为准 不符合标准规定，取大于 25g 的样品复试需气菌和真菌第一次试验结果超过规定的标准，重新抽样复试两次，三次结果平均报告测定结果在规定的限度标准 5 倍以内均为合格同上九、微生物限度标准的收载方式表 1 收载方式CP BP USP各论项下 + + +制剂通则 + +专论 + + +表 2 制剂通则中规定微生物限度的剂型CP BP USP注射剂、眼膏剂、
