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1、常用鉴定试剂的配制和应用一、通用试剂1、碘试剂检查一般有机化合物。（1）碘蒸气 预先将盛有碘结晶的小杯置于密闭的玻璃容器内，使容器空间被碘蒸气饱和，将薄层置于容器内数分钟即显棕色斑点。有时，于容器中加放一小杯水，增加容器内的湿度，可提高显色的灵敏度。（2）0.5碘的氯仿溶液 喷洒试剂，置空气中待过量的碘挥发后，喷 1淀粉溶液，斑点由棕色转为蓝色。2、硫酸试剂检查一般有机化合物。5硫酸乙醇溶液作为色谱显色剂用。喷洒后，置空气中干燥 15min，100烤至斑点呈色（不同化合物呈不同颜色） 。3、重铬酸钾硫酸试剂检查一般有机化合物。5g 重铬酸钾溶于 l00ml40硫酸中。喷该试剂后，150加热至斑
2、点出现( 不同化合物呈不同颜色)。4、磷钼酸试剂检查还原性成分。5磷钼酸乙醇溶液。喷洒后，120加热至呈蓝色斑点。5、磷钨酸试剂检查还原性成分20磷钨酸乙醇溶液。喷洒后，120烘烤，还原性物质呈蓝色斑点。6、硝酸银氢氧化铵试剂检查还原性成分。溶液 I： 0.1molL 硝酸银溶液。溶液：10氢氧化铵溶液。临用前溶液 I 和以15 混合。喷洒后 105加热 5l0min，至深黑色斑点出现。7、中性高锰酸钾试剂检查易还原性成分。0.05高锰酸钾溶液。喷洒后粉红色背景上显黄色斑点。8、碱性高锰酸钾试剂检查还原性成分。溶液 I： 1高锰酸钾溶液。溶液：5碳酸钠溶液。溶液 I 和等量混合使用，喷洒后，粉
3、红背景上显黄色斑点。9、四唑蓝试剂检查还原性成分。溶液 I： 05四唑蓝甲醇溶液。溶液：25氢氧化钠溶液。临用前两液等量混合。喷洒后，微热或室温放置显紫色斑点。10、荧光素溴试剂检查不饱和化合物。溶液 I： 0.1g 荧光素溶于 l00ml 乙醇中。溶液：5g 溴溶于 l00ml 四氯化碳中。先喷洒溶液 I，然后将薄层板放入盛有溶液的缸内，黄色斑点出现后，于紫外光灯下检视，红色底板上显黄色荧光斑点。11荧光显色试剂检查一般有机化合物。（1）0.22，7-氯荧光素乙醇溶液。（2）0.01荧光素乙醇溶液。（3）0.1桑色素乙醇溶液。（4）0.05罗丹明 B 乙醇溶液。喷洒任一溶液，不同的化合物在荧
4、光背景上可显黑色或其它荧光斑点。二、苷类鉴定试剂1、糖鉴定试剂（1） 萘酚硫酸试剂检查还原糖。溶液 I：10 萘酚乙醇溶液。溶液：硫酸。取 lml 样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液 I 23 滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。15 萘酚乙醇溶液 21m1、硫酸 13ml、乙醇 87ml 及水 8ml 混匀后使用。喷洒于薄层板上，100烤 36min，多数糖显蓝色，鼠李糖显橙色，所显颜色于室温可稳定 2 天3 天。（2）斐林试剂检查还原糖。 溶液 I： 6.93g 结晶硫酸铜溶于 l00ml 水中。溶液：34.6g 酒石酸钾钠、10g 氢氧化钠溶于 l00
5、ml 水中。取 lml 样品热水提取液，加入 45 滴用时配制的溶液、等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。如检查多糖和甙，取 lml 样品水提液，加入 lmll0盐酸溶液，在沸水浴上加热l0min，过滤，再用 10氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。（3）氨性硝酸银试剂检查还原糖。硝酸银 1g，加水 20ml 溶解，小心滴加适量氨水，边加边搅拌，至开始产生的沉淀将近全部溶解为止，过滤。取 lml 样品的水溶液，加入 lml 试剂，混匀后，40微热数分钟，管壁析出银镜或产生黑色沉淀为阳性反应。本试剂也可作为色谱显色剂，喷洒后于 110加热数分钟，显棕黑色斑点为阳性
6、反应。还原性物质如醛类、邻二酚类等有干扰。（4）茴香醛硫酸试剂检查糖类化合物。硫酸 lml 加到含茴香醛 0.5ml 的乙酸溶液 50ml 中，需临用前配制。喷洒于薄层板上，105加热至显示色斑，不同糖显不同颜色。（5）苯胺邻苯二甲酸试剂检查糖类化合物。苯胺 0.93g 和邻苯二甲酸 1.66g 溶于 100ml 水饱和的正丁醇中。作色谱显色剂用。喷后 105烤 5min，显红棕色斑点。（6）l,3二羟基萘酚磷酸试剂检查酮糖、醛糖。0.21，3-二羟基萘酚乙醇溶液 50ml 与 85磷酸 50ml 混合均匀后使用。喷后105烤 5min10min，酮糖呈红色，醛糖显淡蓝色。（7）苯胺二苯胺磷酸
7、试剂检查糖类化合物。苯胺 4ml、二苯胺 4g 及 85磷酸 20ml 溶于丙酮 200ml 中。喷洒于薄层板上，85加热 10min，不同糖显不同颜色。（8）2，3，5三苯基氯化四氮唑(TTC)试剂检查还原糖。溶液：4TTC 甲醇溶液。溶液：4氢氧化钠溶液。临用时将溶液和等体积混合。喷洒后，100加热 510min，显红色斑点为阳性反应(醛类无干扰)。（9）三氯化铁冰醋酸(KK)试剂检查 去氧糖，常用于强心甙。溶液 I： 1三氯化铁溶液 0.5ml，加冰醋酸至 l00ml。溶液：硫酸。取样品乙醇提取液 lml，置试管中，水浴上蒸去乙醇，残渣用 0.5ml 溶液 I 溶解，沿试管壁缓缓加入溶液
8、lml，静置分层，上层渐显蓝色，下层显红色或棕色为阳性反应(其颜色随苷元羟基和双键的位置和个数不同而不同)。（10）占吨氢醇试剂检查 去氧糖(常用于强心甙)。10mg 占吨氢醇溶于 100ml 冰醋酸中，再加入 lml 硫酸混合。取 lml 样品，加入试剂 lml，置水浴上加热 30min，显红色为阳性反应。（11）Gregg-Gisvold 试剂检查 26去氧糖。溶液 I： 10三氯化铁溶液。溶液：1盐酸甲醇溶液(97.2ml 甲醇中含28ml 盐酸)。0.5ml 溶液 I 与 100ml 溶液混合。将样品的乙醇溶液点于滤纸片上，晾干后，喷洒上述混合试剂，110加热 5min，显蓝色为阳性反
9、应。（12）3，5二氨基苯甲酸磷酸试剂检查 2去氧糖。3，5二氨基苯甲酸二盐酸盐 1g 溶于 80磷酸 25ml，加水稀释至 60ml。喷洒后，100加热 15min，2去氧糖在日光下显棕色，在紫外光下显黄绿色荧光。（13）对硝基苯胺过碘酸试剂检查去氧糖。溶液 I：饱和偏高碘酸溶液 1 份加水 2 份混匀。溶液：1对硝基苯胺乙醇溶液 4 份与盐酸 1 份混合。先喷溶液 I，放置 10min，再喷溶液，去氧糖显黄色，紫外光下显强荧光，再喷 5氢氧化钠甲醇溶液，颜色转绿，乙二醇同样显色。2、酚类鉴定试剂（1）三氯化铁试剂检查酚类化合物、鞣质。15三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。取 1m1 样
10、品的乙醇溶液，加入试剂 12 滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或蓝色斑点为阳性反应。 （2）4氨基安替匹林铁氰化钾(Emerson)试剂检查酚羟基对位无取代基的化合物。溶液 I： 24氨基安替匹林乙醇溶液。溶液：8铁氰化钾溶液。作色谱显色剂用，先喷洒溶液 I，再喷洒溶液，用氨气熏，显橙红或深红色斑点为阳性反应。（3）Gibbs 试剂检查酚羟基对位无取代基的化合物。溶液 I： 0.52，6溴( 氯)苯醌氯亚胺的乙醇溶液。溶液：1氢氧化钾乙醇溶液。取 lml 样品的乙醇溶液，滴加溶液，使 pH910，再加入 1 滴2 滴溶液 I，显深蓝色为阳性反应。（4）铁氰化钾三氯
11、化铁试剂检查酚类、芳香胺类及还原性物质。溶液 I： 1铁氰化钾溶液。溶液：2三氯化铁溶液。临用前等体积混合。喷洒后酚性成分呈蓝色斑点，再喷 20盐酸，能使颜色加深。纸色谱可用稀盐酸洗去喷洒液。（5）重氮化(Pauly) 试剂检查酚羟基对位无取代基化合物。溶液 I： 0.35g 对硝基苯胺溶于 5ml 盐酸中，加水稀释至 50ml。溶液：5g 亚硝酸钠溶于 70ml 水中。取 1m1 样品的乙醇溶液，加入 1m13碳酸钠溶液，在沸水浴中加热 3min，再在冰水浴中冷却后，加入 12 滴溶液与的混合液(临用时，在冰水浴中等量混合)，显红色为阳性反应。作色谱显色剂用，将溶液 I 与 各 l0ml 混
12、合，再加 20ml 1碳酸钠溶液 (均临用时在冰水浴中混合)，喷洒后，显黄、红、紫等色斑点为阳性反应。（6）牢固蓝 B 盐试剂检查酚类化合物。溶液 I：新配的 0.5牢固蓝 B 盐的溶液。溶液：0.5氢氧化钠溶液。先喷溶液 I，再喷溶液，呈棕、紫、或绿色者为阳性反应。能偶合的芳香胺类有干扰。3黄酮类鉴定试剂（1）盐酸镁粉试剂检查黄酮（醇） 、二氢黄酮（醇）类化合物。取 lml 样品的乙醇溶液，加入数毫克镁粉，滴加数滴盐酸，必要时水浴上微热，显红紫色为阳性反应。（2）Shinoda 试剂采用含 2锌粉（W W ）硅胶薄层板，展层后喷 20盐酸溶液，黄酮（醇）类呈红紫色。（3）三氯化铝试剂检查具有
13、邻二酚羟基或 3羟基、4酮基或 5羟基、4酮基的黄酮类化合物。1三氯化铝乙醇溶液或 5三氯化铝乙醇溶液。喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察，呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应。也可在滤纸上和试管中进行。（4）中性醋酸铅或碱式醋酸铅试剂检查具邻二酚羟基或酚羟基的黄酮化合物。饱和中性醋酸铅或碱式醋酸铅溶液。取 1ml 样品的乙醇溶液，加 12 滴试剂，产生黄色沉淀。（5）锆柠檬酸试剂检查具 3羟基或 5羟基的黄酮类化合物。溶液 I： 2二氯氧锆甲醇溶液。溶液：2柠檬酸甲醇溶液。取 1mg 样品，用甲醇溶解，加入溶液 I lml，呈鲜黄色示有 3羟基或 5羟基；再加入溶液1m1，黄色不褪，示有 3
14、羟基；黄色褪去，加水稀释后变为无色，示无 3羟基，但有 5羟基。也可在滤纸上进行，得到的锆盐络合物多呈黄绿色，并具荧光。（6）氨性氯化锶试剂检查具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物。溶液 I： 1氯化锶甲醇溶液。溶液：氨蒸气饱和的甲醇溶液。取 1mg 样品的甲醇溶液，加入 3 滴溶液 I，再加 3 滴溶液，产生绿棕黑色沉淀为阳性反应。（7）醋酸镁试剂检查黄酮类、二氢黄酮类化合物，及羟基蒽醌类衍生物。1醋酸镁甲醇溶液。在滤纸或薄层板上，点 1 滴样品醇溶液，挥去醇后，点 l滴试剂于样品斑点边缘，加热干燥，于紫外灯下观察，黄酮类显黄色荧光，二氢黄酮类呈天蓝色荧光。显橙红色为大黄素型蒽醌，显紫色为茜草型
15、蒽醌。（8）硼氢化钾试剂检查二氢黄酮类化合物。2四氢硼钾的甲醇溶液。取样品 12mg 溶于甲醇中，加等量试剂 lml 后，加数滴盐酸，呈红-紫红色为阳性反应。薄层色谱上喷试剂，5min 后放人盐酸蒸气槽内呈色。4醌类化合物鉴定试剂（1）Borntrager 试剂检查羟基蒽醌衍生物。2氢氧化钠或 2碳酸钠溶液(或甲醇溶液)。取 lml 样品的乙醇溶液，加 lml 试剂，呈红色为阳性反应。在薄层色谱上喷洒试剂，显橙黄或红色斑点。黄酮类化合物遇碱也能反应生成黄、橙、红色等。（2）菲格尔(Feigl)试剂检查醌类衍生物。溶液 I： 25碳酸钠溶液。溶液：4甲醛的苯溶液。溶液：5邻二硝基苯的苯溶液，取 1 滴样品的苯溶液，加入上述 3 种试液各 1 滴，混匀，置水浴上加热 l4min，呈显著的紫色为阳性反应。（3）硼氢化钠二甲基甲酰胺试剂检查蒽醌及其衍生物。20g 硼氢化钠溶于 100ml 二甲基甲酰胺中。作色谱显色剂用。喷洒试剂后，于紫外光灯下观察，显强的黄、绿或蓝色荧光为阳性反应。（4）硼酸试剂检查羟基蒽醌类化合物。1硼酸溶液。作色谱显色剂用，喷洒后，置紫外光灯下观察，呈黄、橙、红色荧光为阳性反应。（5）对亚硝基二甲基苯胺试剂检查蒽酮类衍生物。0.1对亚硝基二甲基苯胺的吡啶溶液。取 1m1 样品的乙醇溶液，置水浴上蒸干，残渣用吡啶溶解，再滴试
