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1、反相高效液相色谱法在医学临床中的应用引言反向高效液相色谱法是色谱中的一种特种技术。应用本法研究药物在正常人体内的药动学，具有简便，迅速，准确等特点。RP-HPLC-UV 的分析检测方法，该方法不需要特殊的设备，而且分析方法的稳定性好，精密度高，时间段，过程简单，可以作为药物定量分析方法。自从反相高效液相色谱法应用以来，有关此理论和实际应用的文献已经大量出版。目前，反相高效液相色谱法已经为许多实验室的常规手段。理论概要 建立反相高效液相色谱法测定人体内某部位药物浓度。化合物坚持扭转高水流动相色谱法柱喝反相高效液相色谱法列高有机流动相洗脱。在反相高效液相色谱法或何物分离的基础上他们的疏水性。肽可以
2、分开运行的有机溶剂的线性渐变。研究运行 6060 梯度chromatographing 未知时。6060 梯度，梯度开始接近 100的水和坡道在 60 分钟内以60的有机溶剂。大部分肽长度在 10 至 30 个氨基酸残基洗脱时间梯度达到 30的有机。医学上的应用1.用药后的房水进行定量测量：眼内药代动力学实验：双眼滴入眼液，将获取的房水用反相高效液相色谱法进行定量测量。结果滴眼后不同时间测定的房水中的药物浓度不同，实验结果提示局部点眼获得的房水浓度低于对大多数真菌的最低抑菌浓度说明单独点眼效果不好。所以应配合全身用药，改进用药途径增加眼内穿透力，以及增加点眼次数来克服此弊端。因此频繁点眼也是增
3、加眼内穿透性，缩短病程的重要手段。病例病程较长滴眼次数过少可能事原因之一。2.测量人体组织液中药物浓度：本研究采用乙酸乙酯直接提取血浆样品，操作简便，提取后样品中杂质干扰少，各药物的萃取回收率高，均在 75%以上，且通过有机溶剂的提取和浓缩，测定的灵敏度进一步提高。由于乙酸乙酯比重较轻，与血浆混合后不易乳化，且液面处于上层，所以实验操作更方便。在进行流动相条件筛选时，考察不同配比的分离效果，发现在甲醇：水65:35时，各色谱峰及内标间分离效果好，且峰形尖锐，柱效高，完成一次测定只需 15min。选择 230nm 波长是经过分析发现目标成分在 230nm 紫外吸收系数均比较大，可以提高灵敏度。由
4、于本方法流动相中无缓冲盐和改性试剂，因此测试过程中平衡和冲洗色谱系统的时间比较短，有利于提高测定效果，更合适临床应用。3.药物腹腔注射在家兔房水中的药代动力学研究：测定腹腔注射药物后不同时间家兔房水中的质量浓度，计算其药代动力学参数，研究药代动力学特点。关于样品的处理和流动相选择，以甲醇处理样品和选择甲醇：水：磷酸缓冲液或甲醇：水为流动相的报道较多。也有选用高氯酸处理血样和甲醇：水：冰醋酸为流动相的报道。我们采用高氯酸沉淀放水中的微量蛋白，一甲醇：水：冰醋酸=35:65:0.2为流动相，色谱柱为 Diamonsil C18 不锈钢柱，在波长为 250nm 紫外光下对腹腔注射药物量浓度的测定。通
5、过高氯酸空白，防水空白和房水溶解药物标准品对照测定，以及回收率测定为 87.60，日内 RSD 为 4.0，日间 RSD 为 5.32，无其他峰干扰。结果表明，本方法具有特异，灵敏，快速等优点，使用于对房水药物质量浓度的测量。4.药物在玻璃体内注射的药代动力学研究：取玻璃体样品，用反相高效液相色谱法测定玻璃体腔内 N 质量浓度。用 DAS 软件计算主要的药代动力学参数。增殖性玻璃体视网膜病变的治疗主要是通过手术促使增生性病变的视网膜复位，但仍有 10左右的患者术后发生增殖性玻璃体视网病变。因为玻璃体手术虽然能切除已形成的增生膜，但不能完全取出增生细胞，甚至会刺激细胞分化，增生，又形成增殖性玻璃
6、体视网膜病变。所以，药物防治增殖性玻璃体视网膜病变是非常必要的。近年来多种抗细胞增生药或抗炎药防治增生性玻璃体视网膜病变的实验研究取得了一些进展，主要有抗肿瘤，抗过敏，降血压，酪氨酸激酶抑制剂等，但是目前在临床上仍无理想药物可供使用。5.其他应用：5.1 甲锭反应液中甲锭含量：用反相高效液相色谱方法建立了甲锭的分析测定方法，并分离了甲锭及其衍生物。以甲醇：水=40:60 为流动相，流量 0.12mlmin,在 Thermo Hypersil ODS 柱2.1mm100mm,3m,检测波长 276nm 的色谱条件下，甲锭及其衍生物得到了很好的分离。在选用的色谱条件下，甲锭在 0.5-10m,检测
7、范围内有良好的线性关系。在0.5mgml,2.5mgml和 10mgml 两个浓度的相对标准偏差分别为 2.717和 1.818。本法操作简便，快速，准确，可适用于甲锭化合物的定性与定量研究。5.2 测定丙酮酸发酵液中丙酮酸：应用反相 C18 色谱柱 ODS-2HYPERSIL250mm4.6mm5m,以 0.05moll NH4H2PO4用 H3PO4 调 pH2.6为流动相，发酵液经稀硫酸预处理后直接进样分离定量，每一样品的分析过程不超过 5min,可及时了解丙酮酸发酵过程中丙酮酸的变化，适于发酵液中丙酮酸的测定。5.3 测量色盐杆菌新种 ST307 的 DNA G+Cmol含量：采用 9
8、0重蒸水 10甲醇为流动相，检测波长 260nm，流速 1mlmin, 在 VenusilMP C18 柱上对四种碱基进行分离。 DNA 碱基分离效果好，以外标法计算得到标准含量。实验条件1.流动相比例：2.标准碱基的分离及校正曲线：用所选色谱条件对标准碱基进行了分析。为了制作校正曲线，使用了 5 个浓度的标准碱基。0.4标准碱基，0.2标准碱基。4 种碱基完全分离，杂质峰不干扰碱基峰的测定。输入参数后，色谱工作站自动做出校正曲线。3.样品测定色谱图：参考文献：1. 伊曲康唑治疗真菌性角膜炎的实验和临床研究 孔玲朱军曹卉李健美朱怀甫王旭 2004 年 3 月2. 周亮.五官科学.北京：北京医科
9、大学出版社，2000，364.3. 反相高效液相色谱法测定血浆中多奈哌齐浓度 余勤，梁茂植 ，黄英，秦永平，邹远高（四川大学华西医院临床药理研究室，四川成都 483398）4. 四种神经肽的反相高效液相色谱法分离 刘雪松田津斌(北京医科大学神经科学研究中心, 北京100083)5. 反相高效液相色谱法测定饲料中三聚氰胺的含量 王亚吨, 林海丹, 邓国东梁祺琦, ( 农业部饲料质量监督检验测试中心, 广东广州)6. 反相高效液相色谱法测定人体胺碘酮血药浓度 王儒强 1 ,冯燕娴 2 ,李晶晶 2 ,裕海明1(安徽省蚌埠市第三人民医院 1. 药剂科、2. 心内科,安徽蚌埠233000)7. 反相高
10、效液相色谱法(RP-HPLC)测定丙酮酸发酵液中丙酮酸 高年发，吴迪，张健(天津市工业微生物重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津300222)8. 高效液相色谱柱前衍生法测定牛磺酸含量 颜京霞宋秀君卞小芸勾凌燕王仁杰张亚超9. 血浆同型半胱氨酸高效液相色谱法测定 余意君 邵姣梅 张帆 严江涛 汪道文10反向高效液相色谱法测定荭草中原儿茶酸的含量 周 雯，刘丽娜，兰燕宇，王爱民，李勇军，何 迅，王永林11反向高效液相色谱测定法同时测定人血浆中5种镇静催眠药浓度 梁湘辉1，戴智勇2，刘文恩1 (中南大学湘雅医院1检验科；2药剂科，长沙410008)12. 反相高效液相色谱法测定色盐杆菌新种ST307的DNA G+C t001含量 崔春晓1，李鹏飞2，曹文瑞2，戴美学1，夏志洁”13. 红枣环磷酸腺苷(cAMP)的提取工艺 米东，王瑛，李明润 (天津市医药科学研究所，天津300020)14. 葛根素腹腔注射在家兔房水中的药代动力学研究 邓新国! 胡世兴! 张清炯! 张晓慧! 钟国平! 汤丽芬! 吴珏珩 15. 反相高效液相色谱法分析甲锭反应液中甲锭含量 文介荣 (湖南省桃江县第一中学，湖南桃江413400)16. 吲哚美辛玻璃体腔内注射的药代动力学研究 温俊陈祖基李文生
