《常见缓冲液的配方》由会员分享，可在线阅读，更多相关《常见缓冲液的配方（17页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、一.常用贮液与溶液1mol/L 亚精胺（ Spermidine）: 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20。1mol/L 精胺（ Spermine）：溶解 3.48g 精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。10mol/L 乙酸胺（ ammonium acetate）：将 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至 1L 后，用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml 牛血清蛋白(BSA）：加 100mg 的牛血清蛋白（组分 V 或分子生物学试剂级，无 DNA 酶）于 9.5ml 水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不
2、是将水加入蛋白） ，盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存于-20。1mol/L 二硫苏糖醇（ DTT）：在二硫苏糖醇 5g 的原装瓶中加 32.4ml 水，分成小份贮存于-20。或转移 100mg 的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾（ potassium acetate）：溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中，加水定容到 100ml。1mol/L 氯化钾（ KCl）：溶解 7.46g 氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L 乙酸钠（ sodiu
3、m acetate）：溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml水中，用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液（0.5mol/L） ，混合后形成 EDTA 的三钠盐。或称取 186.1g 的 Na2EDTA2H2O 和 20g 的NaOH，并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES：将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调pH（6.8-8.2） ，然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl：加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml
4、 IPGT：溶解 250mg 的 IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml 水中，分成小份贮存于-20。1mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl26H2O 于足量的水中，定容到 100ml。100mmol/L PMSF：溶解 174mg 的 PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到 10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20。20mg/ml 蛋白酶 K（proteinase K）：将 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶 K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。10mg/mlRnase（无
5、DNase） （DNasefree RNase）：溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中（pH 5.0） 。溶解后于水浴中煮沸 15min，使 DNA 酶失活。用 1mol/L 的 TrisHCl 调 pH 至7.5，于 -20贮存。 （配制过程中要戴手套）5mol/L 氯化钠（ NaCl）：溶解 29.2g 氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N 氢氧化钠（NaOH）：溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌） ，氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。10SDS （十二烷基硫酸钠）：称取 100gSDS 慢慢转
6、移到约含 0.9L 的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。2mol/L 山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使终体积为 100ml。100三氯乙酸（TCA） :在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。 （稀释液应在临用前配制）2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3- 吲哚- 半乳糖苷）：溶解 25mg 的 Xgal于 1ml 的二甲基甲酰胺（DMF）, 用铝箔包裹装液管，贮存于-20。100Denhardt 试剂（ Denhardts regent）成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成
7、分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400 型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分 V）水 2g2g2g加水至总体积为 100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。10标准 DNA 连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer） （粘端、平端连接）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA（组分 V） （可选）水 5ml 1mol/L 贮液1ml
8、1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（ dNTP solutions）可以购买到 100mmol/L 纯 dNTPs 贮液，-80 可贮存至少 6 个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度 配制 20ul 溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul
9、100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量质量浓度为 20聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水 20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠补足 100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积 100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20SSC成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）3mol/L 氯化钠水 88.2g175.3g补足 1L 溶解柠檬酸三钠（
10、二水）和氯化钠于约 0.9L 水中，加几滴 10N NaOH 溶液调 pH 为 7.0，用水补足体积至 1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加 100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的体积分数为 0.1。在 37温浴至少 12h，然后在 15 psi 条件下高压灭菌 20min，以使残余的 DEPC失活。DEPC 会与胺起反应，不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌 1h，可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂
11、后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化） 。磷酸缓冲液（phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和 1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需 pH 的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解 138g 于足量水中，使终体积为 1L;1mol/L 磷酸氢二钠（ Na2HPO4）贮液:溶解 142g 于足量水中使终体积为 1L。1mol/L 磷酸二氢钠（ ml） 1mol/L 磷酸氢二钠（ml） 最终 pH 值877850815775735685625565510450390330280 12
12、3150185225265315375435490550610670720 6.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE（用于悬浮和贮存 DNA）成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0 ，25 ）200ul 0.5 mol/L EDTA（ pH 8.0）98.8ml Tris 缓冲液（ Tris-HCl buffer）将 121g 的 Tris 碱溶解于约 0.9L 水中，再根据所要求的 pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N
13、） ，用水调整终体积至 1L。浓盐酸的体积（ml） pH8.6142128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50Tris-乙酸（ TAE）缓冲液成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml 的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml 的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足 1L 5Tris-硼酸（TBE ）缓冲液成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量445 mmol/L Tri
14、s 碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足 1L 染料1溴酚蓝（bromophenol blue）加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青 FF（xylene cyanole FF）溶解 1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到 100ml。10mg/ml 的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取 1g 溴化乙锭，转移到广口瓶中，加 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于 4贮存。凝胶上样液（gel
15、 loading solutions）6碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18聚蔗糖（400 型）0.15溴甲酚绿0.25二甲苯青 FF水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg补足到 10ml 6聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA15聚蔗糖（400 型）水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH
16、8.0）1.5g补足到 10ml 6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.25溴酚蓝0.25二甲苯青 FF15聚蔗糖（400 型）水 2.5ml 1溴酚蓝2.5ml 1二甲苯青 FF1.5g 补足到 10ml 6甘油凝胶上样液（4贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA50甘油水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）3ml 3.9ml 6蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mm
