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1、形态学鉴定 .1唯一碳源利用(编码特征 1-19).1过氧化氢酶试验(编码特征 20).1氧化酶试验(编码特征 21).2石蕊牛乳试验(编码特征 22-27) .20.1美兰牛乳试验(编码特征 2829) .2耐酸碱试验(编码特征 30-35) .2生长温度范围试验(编码特征 36-41) .2耐盐性测定(编码特征 42-47) .2硝酸盐还原反应(编码特征 48).2七叶苷水解(编码特征 49).3联苯胺反应试验(编码特征 50).3柠檬酸盐利用试验(编码特征 51).3葡聚糖产生试验(编码特征 52).3吲哚产生试验(编码特征 53).3硫化氢产生(编码特征 54).3明胶液化试验(编码特
2、征 55).3V_P 反应 (编码特征 56).3甲基红(编码特征 57).3苯丙氨酸脱氨酶测定(编码特征 58).4纤维素分解试验(编码特征 59).4脲酶测定(编码特征 60) .4精氨酸产氨试验(编码特征 61).4精氨酸水解试验(编码特征 62).4丙二酸利用试验(编码特征 63).4药敏试验(编码特征 6572) .4全部接种菌株均为MRS液体培养基中培养24h的菌株。形态学鉴定将分离纯化的菌种分别涂到MRS固体培养基， 30培养24h，观察菌落特征，取典型菌落涂片，并进行革兰氏染色，芽孢染色，鞭毛染色，油镜下观察菌体形态，拍照。唯一碳源利用(编码特征 1-19)试验中以甘露醇、D-
3、海藻糖、D山梨醇、木糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖，葡萄糖、葡萄糖酸钠、棉籽糖、纤维二糖、D阿拉伯糖、D核糖、鼠李糖、淀粉、甘油，肌醇、马尿酸钠等18种含碳化合物作为唯一碳源，根据要求不同在PY基础培养液中浓度分别为1和05。结果用BTB-MR指示剂检测(凌代文，东秀珠，1999)。葡萄糖发酵同时检测产酸产气的情况(MJ佩尔扎，RD里德，ECS詹，1984)。过氧化氢酶试验(编码特征 20)将供试菌株接种于MRS培养液中，37培养18h，用接种环挑取一环涂于干净的载玻片上，放置约20min后，在其上加一滴3的H202，若有气泡产生则为阳性反应，无气泡为阴性反应(凌代文，东秀珠，1999)。氧化酶试验(
4、编码特征 21)用l四甲基对苯二胺盐酸浸湿新华滤纸，置于培养皿中，然后用灭菌竹签挑取供试菌在滤纸上划线，10s内若划线部分变为紫色者为阳性反应，不变色者为阴性(东秀珠，蔡妙英，2001)。石蕊牛乳试验(编码特征 22-27)将25的石蕊水溶液与脱脂乳按4：100(vv)的比例混合，使牛乳呈丁香花紫色；分装试管，110C灭菌20min。接种供试菌，37(2培养，持续观察14d，记录结果(东秀珠，蔡妙英，2001；赵斌，何绍江，2002)细菌对牛奶的作用有以下几种情况：(1)产酸一细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红。(2)产碱细菌分解酪蛋白产生碱性物质，使石蕊变蓝。(3)胨化细菌产生蛋白酶，使酪蛋白分解
5、，故牛奶交得比较澄清。(4)酸凝固细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红，酸度很高时，可使牛奶凝固。(5)凝乳酶凝固有些细菌能产生凝乳酶，使牛奶中的酪蛋白凝固，此时石蕊常呈蓝色或不变色。(6)还原细菌生长旺盛，使培养基氧化还原电位降低，因而石蕊还原褪色。0.1美兰牛乳试验(编码特征 2829)将脱脂乳分装试管，110灭菌20min。接种供试菌，37培养3天后加入l滴O1的美蓝溶液，蓝色褪去者为美蓝还原阳性，蓝色不褪去者为阴性(张丽萍，艾玉琴，杨焕民，1995；沈萍，范秀容，1999)。耐酸碱试验(编码特征 30-35)本试验测定了供试菌株对酸碱的耐受性。先将MRS液体培养基灭菌后用无菌HCI和NaOH将
6、培养基的pH调至pH30、pH 40，pH 45、pH80、pH 92、pH 96，以pH64的液体做阳性对照。接种、培养、观察和记录结果，与阳性对照同样浑浊的记为阳性，否则为阴性(凌代文，东秀珠，1999)。同时生长温度范围试验(编码特征 36-41)选择10、15、18、45、50、60C(30min)等6种不同温度范围的反应，MRS液体培养基培养，结果用接种菌株于37C培养为阳性对照，每隔2 h测定其吸光值(OD600)。(凌代文，东秀珠，1999)。耐盐性测定(编码特征 42-47)在3%、4%、65%、8%、12%、15%等6种不同NaCI浓度范围的反应在MRS液体培养基培养，结果以
7、不含NaCI的MRs液体培养基作对照(凌代文，东秀珠，1999)。硝酸盐还原反应(编码特征 48)将硝酸盐还原液体培养基分装试管，8mL管，37C培养48h，另保留一支不接种硝酸盐培养基作为对照检查方法如下：在比色皿中，加入一滴菌液，再加Griess试剂A、B液各一滴，如出现橙色或红色为硝酸盐还原阳性；如无橙色或红色出现，则再加一滴二苯胺试剂进一步检查，若呈现蓝色反应，则为阴性结果，不呈现蓝色，则为阳性结果(赵斌，何绍江，2002)。七叶苷水解(编码特征 49)在PY基础培养基中加入七叶苷，其浓度为59L，分装灭菌，培养2d后取少许培养液于比色皿中，同时以未接种的七叶苷培养液为对照，分别滴加柠檬酸铁试剂，如为黑色，则为阳性反应，不显色，为阴性(凌代文，东秀珠，1999)。联苯胺反应试验(编码特征 50)将供试菌株接种于含联苯胺指示剂的半固体琼脂中，37培养，观察菌株还原联苯胺情况(李季伦等，198
