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1、第一章 饲料质量分析与检验概论第一节 饲料质量分析与检验技术发展史1、简史：18世纪，初步有了评价饲料营养价值的体系；19世纪初, 1864年，Henneberg 、Stohmann 在德国的Weende试验站改进并建立了饲料概略成分分析体系，沿用至今；20世纪后，饲料纯养分分析与仪器分析的发展。2、饲料质量分析方法方法：化学分析内容：概略养分；纯养分；养分的生物学效价第一章 饲料质量分析与检验概论物理分析分析内容：饲料及原料的质量和是否搀假第二节饲料样品的采集与制备饲料原料和配合饲料的变异(1)自然变异 (2)加工 (3)搀假 (4)损坏和变质样品的采集目的 ：是通过对样品的理化指标的分析，
2、客观地反映受检饲料原料或产品的品质。样品的分析结果有不同的用途：(1)为饲料配方选择原料 (2)选择原料供应商 (3)接收或拒绝某种饲料原料 ()判断产品的质量是否符合规格要求和保证值。以决定产品出厂与否或仲裁买卖双方的争议(5)判断饲料加工程度和生产工艺控制质量。(6)分析保管贮存条件对原料和产品质量的影响程度。(7)保留每一批饲料原料或产品的样品，以备急需时用。()分析测定方法的准确性和实验室或人员之间操作误差的比较 。结论：采样比分析更为重要 采样的要求 :(1)样品必须具有代表性 (2)必须采用正确的采样方法采样要做到随机、客观，不同代表性的区域取样点，然后充分混合成为整个饲料的代表样
3、品 。(3)样品必须有一定的数量 注意点:原料和饲料成品的水分、粒度和平行样的多少采样步骤:(1)采样前纪录记录与原料或产品的生产厂家、生产日期：批号，种类，总量、包装堆积形式、运输情况、贮存条件和时间、破损、霉变等。(2)原始样品 初级样品采集 原始样品一般不得少2kg(3)次级样品 平均样品采集平均样品一般不少于1 kg(4)分析样品 实验样品分析样品的数量根据分析指标和测定方法要求而定 采样基本方法：(1)几何法指把整个一堆物品看成一种具有规则的几何立体，如立方体、圆柱体等取样时首先把这个立体分成若干体积相等的部分，这些部分必须在全体中分布均匀，从这些部分中取出体积相等的样品，这些部分的
4、样品称为支样，再把这些支样混合即得样品。几何法常用于采集原始样品和大批量的原料 2四分法 是指将样品平铺在一张平坦而光滑的一张方形纸或塑料布等上(大小视样品的多少面定)，提起一角，使饲料流向对角，随即提起对角使其流回，如此法，将口角轮流反复提起，使饲料反复移动混合均匀，然后将饲料堆成等厚的正四方形体或圆锥，在饲料样品方体上划一十字，将样品分成4等份，任竟弃去对角的2份，将剩余的2份混合，继续按前述方法混合均匀，缩分，直至剩余样品数量与测定所需要的用量相接近时为止。 不同饲料样品的采集 :1散装2装袋 粉状饲料取样袋数不少于总袋数的3%，总袋数在100袋下，取样不少于10袋，每增加100袋需增加
5、1袋，取样袋数至少为总袋数的10% 。3仓装 原始样品在饲料进入包装车间或成品库的流水线或传送带上，贮塔下、料斗下、秤上或工艺设备上采集 。饲料库中的散状产品按高度分层采样，即采样前将层表面划分分为6个等份，在每一部分的正方形对角线的四角和交叉点5个不同地方采样。液体饲料 7桶以下，取样桶数不少于5桶。10桶以下，取样桶数不少于7桶。 10一50桶取样桶数不少于10桶。51100桶，取样桶数不少于)5桶。101桶以上，按不少于总桶数的15取。固体油脂对在常温下呈固体的动物性油脂的采样，可参照固体饲料采样方法，但加热熔化棍匀后，才能采集次级样品。黏性液体黏性浓稠饲料如糖蜜，可在卸料过程中采用抓取
6、法 。 7块饼类 大块状饲料从不同的堆积部位选取不少于5大块，从每块中切取对角的小三角形块，捶碎混合后再用四分法取分析样品200g左右。 小块的饼粕，要选取具有代表性者数l0片，粉碎后充分混合用四分法取分析样品约200g左右。8 副食及酿造加工副产品取样方法是：在贮藏池、木桶或贮堆中分上、中、下3层取样，每层取5l0个点，在60一65恒温干燥箱中干燥供制风干样品用 。9块根、块茎和瓜类10新鲜青绿饲料及水生饲料 第一章 饲料质量分析与检验概论11青贮饲料 原始样品质量为5001000g青贮壕和青贮窖的采样点视青贮壕长度和青贮窖深度大小分为若于段，每段设采样点分层取样。 第一章 饲料质量分析与检
7、验概论3.样品的制备样品的制备指将原始样品或次级样品经过一定的处理成为分析样品的过程.样品制备方法:包括烘干、粉碎和混匀，制备成的样品可分为半干样品和风干样品。风干样品的制备风干饲料是指自然含水量在15%以下的饲料。1原始样品的采集 2次级样品的采集 3分析样品制备半干样品的制备 新鲜的青饲料、青贮饲料等测定饲料的初水含量后制成半干样品，以便保存，供其余指标分析备用 注意： 登记样品名称、种类、规格型号、批号、产地、贮存条件、采样部位、采样人、采样日期、生产厂家、通讯地址等。4.样品的保管用不与其发生反应的材料包装，外加布袋或牛皮纸袋，贴上标签及封条，加盖公章；为特殊目的需长期保存的可用锡铝纸
8、软包装经抽真空充氮后密封，冷库中保存第二章 饲料中一般成分的分析第一节 氨基酸的分析氨基酸分析是指把以肽键结合的氨基酸残基构成的蛋白质经过加热水解，生成游离的氨基酸，再通过液相色谱等进行分析其氨基酸构成比例的种简单而有效的方法 .一.待测样品的前处理方法酸水解法一般使用重蒸5.7molL盐酸(恒沸点盐酸)，在密封的水解管中，于105115水解20h以上。用盐酸水解后，得到的氨基酸不消旋，但色氨酸全部被破坏，丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和半胱氨酸也有某种程度被破坏，对这些氨基酸的破坏率，需要用不同水解时间测定这些氨基酸的含量，然后外推到水解时间为0时，算得的氨基酸含量，即代表了真正数值 ；碱水解法 碱
9、水解法是盐酸水解法的互补法，碱水解时，可使多数氨基酸遭到破坏，仅色氨酸是稳定的，所以此法仅限于测定色氨酸的含量；磺酸水解法为盐酸水解法的改进法，磺酸是非氧化性的强酸，此方法可以测定除半胱氨酸、胱氨酸和蛋氨酸以外的所有氨基酸；酶水解法是用一组混合的蛋白酶水解肽链，可以保持所有的组成氨基酸不被破坏，缺点是水解不完全，另外，因为酶本身也是蛋白质，对样品的测定结果会有干扰。二.氨基酸的定性与定量 一般采用纸层析法、薄层层析法、离子交换柱层析法等进行分析.柱前衍生法、柱后衍生法 .三.高效液相色谱法(HPLC)的分析测定 反应原理:经过水解后的所有氨基酸，在室温下与 6氨基喹啉N羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸
10、酯(6aminoqulnolylnhydroxysuccinimidycMrbai21&tc，AQC)很快发生衍生反应，生成稳定的荧光衍生物AQc氨基酸，它可以经WatcrsAccQTag分析柱分离氨基酸，用荧光检测器测定。仪器设备(1)分析天平：精确至0.1mg(2)恒温干燥箱。(3)浓缩器或旋转蒸发器。(4)PH计。(5)超声波水浴(6)涡旋发生器。(7)高效液相色谱仪。(8)AccQTag氨基酸分析柱。(9)微量移液管。(10)玻璃器皿：水解管、衍生试管、量筒、容量瓶刻度试管、移液管等。5流动相A溶液 称19.04g分析纯三水乙酸钠，加 1L纯水溶解，用稀磷酸(1：1，：) 调整pH至
11、5.2，加1 m1 EDTA溶液(1 mgm1)。加0.1g叠氮化钠，加2.37mL三乙胺，用磷酸缓冲液调整PH至4.95,用0.45um滤膜过滤。使用超声脱气。6流动相B溶液 经0.45um滤膜过滤的色谱纯乙氰与超纯水按3：2(V ：V)比例配制。在超声水浴中脱气20秒。76mol盐酸水解液 将优级纯的盐酸与蒸馏水按照 l：1；(V ：V)比例混和均匀即可。8过甲酸溶液 88%甲酸与30%的过氧化氢按9:1(v:v)室温下放置1h后移至0下保存。9氢溴酸(40，分析纯)10从AQC试剂四。测定步骤1样品的前处理(1)分析样品的准备：待测饲料样品必须具有代表性。用于氨基酸分析的试样需经磨碎，通
12、过100目筛孔。由于氨基酸在氧及碳水化合物存在下易被破坏(Maillard反应，赖氨酸碳水化物)，在粉碎样品时其温度应低于50。样品磨碎后，可增加其表面积。应在室温下放24小时，使其含水量恒定。样品用量：通常是用样品中氮的含量来计算适用于氨基酸分析的样品用量，样品中氮的含量决定分析样品的用量。样品用量(g)32mgN(CP XO.16X10) 。为使测定的各种氨基酸在标准曲线的线性范围内，应使供分析的氨基酸溶液的浓度与标准氨基酸溶液的浓度相近。 一般用于氨基酸分析的样品中应含有约 32mg的氮。同时要测定样品的干物质含量，可由分析天平(精确至0.1mg)称量。(2)过甲酸水解处理：在蛋白质酸水
13、解过程中，常伴有(半)胱氨酸及蛋氨酸的损失，为避免这种损失，通常可用过甲酸氧化反应使(半)胱氨酸及蛋氨酸分别转变成半胱磺酸及甲硫氧砜，这两种化合物在酸水解中是稳定的，且易与其他氨基酸分离。待过氧化反应结束后，要去除过量的甲酸，可以将加入HBr 时应在冰浴中，边搅动边小心加入，每隔5min加数滴。加几滴丁醇去除气泡，如样品很快澄清即可 样品的酸水解法在氧化与未氧化两种样品中分别加入一定量的盐酸煮沸回流水解小时未氧化的样品水解时要充氮气最后水解完成后要在多孔玻璃器上过滤得到分析液水解工作液的制备分析掖浓缩至干后加入氨基丁酸标准储备液 贮存备用衍生反应生成各种氨基酸衍生物5色谱条件及分离(梯度洗脱)
14、(1)柱温：对于一般缸基酸分析为37，含硫氨基酸一般为47 。(2)检测器：荧光检测器 (激发波长245nm，发射波长 39anm)或紫外检测器(波长254nm)。(3)通过不同的梯度洗脱进行氨基酸的分离：HP系统配置不同，所 用梯度表不同 五氨基酸的自动分析经典的氨基酸分析方法是采用离子交换层析来分离各种氨基酸，分离后的氨基酸与茚三酮进行柱后反应，然后定量测定，但茚三酮法灵敏度差、检测限较低，样品中氨基酸含量在 200 5pmol 时，即仅能在纳克（ ng ）水平上进行检测，当样品中氨基酸含量低于 00pmol 时，与柱前衍生法相比，分析的准确性要降低一个数量级，而且此法受到流动相速度低这一
15、限制，分析速度相对较慢。.分离测定原理其强弱顺序为：碱性氨基酸芳香族氨基酸中性氨基酸酸性氨基酸及羟基氨基酸。测定步骤采样除了纯蛋白等本身均匀的样品外，一般样品特别是均匀度差的样品，应有几毫克原始风干样品，使样品具有代表性。粉碎原始风干样品要先进行粗粉碎，棍匀后用四分法缩分取出约 5g, 再用高速离心磨细磨，使其颗粒全部能通过 80 日筛孔，应避免磨温过高对某些氨基酸的损失。磨好的样品混匀，装人样品瓶中，保存于干燥阴凉处。脂肪含量 高的样品脱脂。为便于换算和对比，在样品水解的同时，应测定样品的含水量和蛋白质含量。样品的水解处理盐酸水解法除色氨酸和胱氨酸以外的氨基酸测定样品的水解用此法。 原理：常规水解法是使饲料蛋白在 110 、浓度 （ HCL ) 为 6mol / l 盐酸溶液作用下，水解成单一氨基酸，再经离子交换色谱法分离，并以荀三酮做为个 柱后衍生测定。水解过程中色氨酸全部坏不能测定。胱氨酸和蛋氨酸部分被氧化，使测定结果偏低碱水解法分析色氨酸样品的水解用此法。 原理：由于酸水解对色氨酸有破坏作用，因此需采用碱水解法来测定色氨酸，但碱水解会破坏精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、胱氨酸及半胱氨酸等，故本法只限于测定色氨酸，色氨酸在碱性条件下很稳定。过甲酸氧化处理一盐酸水解结合法含硫氨基酸 （
