3′-Full RACE Core Set Ver.2.0TaKaRa Code包装量价格说明书购物车D31420 次1,800 元■ 制品内容 (20 次量)制品内容 1～9 项为用于 3′RACE 实验的反转录用试剂，可用于 20 次反转录反应 (约 100 次 3′RACE PCR 反应) ；10 ～12 为Control 实验用试剂，可进行 5 次 Control 实验Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-) (200 U/μl) 10 μlRNase Inhibitor(40 U/μl) 10 μl5 × M-MLV Buffer 40 μldNTP Mixture (10 mM each) 20 μl3′RACE Adaptor (5 μM) 20 μlRNase Free dH2O 1 ml1 × cDNA Dilution Buffer II 1 ml3′RACE Outer Primer (10 μM ) 200 μl3′RACE Inner Primer (10 μM ) 200 μlControl HL60 Total RNA (500 ng/μl)* 10 μl3′RACE Control Outer Primer (10 μM)* 10 μl3′RACE Control Inner Primer (10 μM)* 10 μl* 用于扩增 Human Prohibitin (PHB) 基因。
■ 制品说明本试剂盒是高灵敏度、高特异性扩增 cDNA 3′末端全长的试剂盒对 RNA 结构进行分析时，一般先通过 RT-PCR 反应扩增目的区域，然后再对扩增出的目的 DNA 片段进行克隆、序列分析等一般的 RT-PCR 反应很难得到全长的 cDNA 片段，然而在基因工程研究中，分析遗传基因的全长 cDNA 序列又是十分重要的RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) 法能有效地解决这一问题TaKaRa 3′-Full RACE Core Set Ver.2.0 能够通过已知的 cDNA 序列，高灵敏度、高特异性地扩增 cDNA 的 3′末端的全长序列 本试剂盒中含有完成 3′-RACE 操作的主要试剂试剂盒中使用的 Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-) 经过了本公司的特殊改良，反转录性能良好，无 RNase H 活性，大大增加了反转录性能结合使用 TaKaRa LA Taq (TaKaRa Code：DRR02AM) 进行 PCR 扩增时，其 3′RACE 的扩增性能大大优于其他同类产品本试剂盒应用了套式 PCR 原理，增加了 PCR 扩增的特异性与灵敏度，可以对少量样品或低丰度的基因进行 3′RACE 实验，并且对长片段的 3′RACE 扩增具有明显优势，我们曾经使用本试剂盒成功扩增了 8 kbp 的 3′RACE DNA 片段。
使用 TaKaRa LA Taq 扩增得到的 PCR 产物 3′端附有一个“A” 碱基，其产物可直接克隆于 T-Vector 中反转录引物 3′RACE Adaptor Primer 含有由TaKaRa 独特设计的 dT 区域，反转录效率高3′RACE Inner Primer 中含有 BamH I 酶切位点，为克隆实验提供了方便制品中的 Control RNA 及 Control Primer 可以用于 Control 实验 ■ 各种引物的序列引物名称 各引物序列 (5′→3′)3′RACE Adaptor 含有由 TaKaRa 独特设计的 dT 区域及 Adaptor Primer 部分3′RACE Outer Primer TACCGTCGTTCCACTAGTGATTT3′RACE Inner Primer CGCGGATCCTCCACTAGTGATTTCACTATAGG3′RACE Control Outer Primer GAGTGCAGGACATTGTGGTAGGG3′RACE Control Inner Primer ATCTTTGACTGCCGTTCTCGACC■ 试剂盒原理进行 3′RACE 实验时，首先由 Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-) 将 Poly(A)+ RNA 反转录成 cDNA，然后再使用TaKaRa LA Taq (TaKaRa Code: DRR02AM)，以反转录的 cDNA 为模板，进行套式 PCR 反应。
3′RACE Adaptor Primer 作为反转录引物用于 cDNA 合成 (具体原理见图 1)图 1. 3′-Full RACE Core Set Ver.2.0 的实验原理图1. 以 Total RNA 为模板，使用 3′RACE Adaptor 引物进行反转录反应，合成 1st Strand cDNA2. 使用上游外侧特异性引物 (GSP1)和 3′RACE Outer Primer 进行 1st PCR 反应如果 1st PCR 反应未能得到目的产物，再使用上游内侧特异性引物 (GSP2)和 3′RACE Inner Primer 进行 2nd PCR 反应 3. PCR 产物可以直接进行 DNA 测序或 TA 克隆如果使用含有 BamH I 酶切位点的上游内侧特异性引物进行 2nd PCR 扩增时，可以使用限制酶 (BamH I)对 PCR 产物进行酶切反应，然后克隆至相关的载体中 ■ 注意事项1. 同时需要进行数次反转录反应或 PCR 反应时，应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix；其中包括 RNase Free dH2O、Buffer 、dNTP Mixture 等)，然后再分装到每个反应管中。
这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差 2. 使用 Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-)、RNase Inhibitor 等酶类时，应轻轻混匀，避免起泡，分取之前要小心地离心收集到反应管底部由于酶保存液中含有 50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取 3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存 4. 为了防止 Control RNA 分解，应尽量避免反复冻融有条件的实验室最好保存于-70℃～-80℃ 5. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染 ■ 其他说明详细内容请参考说明书5′-Full RACE KitTaKaRa Code包装量价格说明书购物车D315RT反应10次PCR反应50 次3,980 元■ 制品内容□ For RNA Treated Reactions (10 次量)Alkaline Phosphatase (Calf intestine) (16 U/μl) 10 μl10 × Alkaline Phosphatase Buffer (MgCl2 Free) 50 μlTobacco Acid Pyrophosphatase (0.5 U/μl) 10 μl10 × TAP Reaction Buffer 10 μl5′RACE Adaptor (15 μM) 10 μlT4 RNA Ligase (40 U/μl) 10 μl5 × RNA Ligation Buffer*1 80 μl40% PEG#6000 200 μl3 M CH3COONa (pH5.2) 400 μlNA Carrier 40 μlRNase Inhibitor (40 U/μl) 35 μlReverse Transcriptase M-MLV (RNase H-) (200 U/μl) 10 μl5 × M-MLV Buffer 20 μldNTP Mixture (10 mM each) 10 μlRandom 9 mers (50 μM) 10 μlRNase Free dH2O 1 ml × 2□ For 5′RACE PCR Reactions (50 次量) 1 × cDNA Dilution Buffer II 400 μl5′RACE Outer Primer (10 μM) 100 μl5′RACE Inner Primer (10 μM) 100 μl□ For Control Reactions (5 次量) Control HL60 Total RNA (1 μg /μl)*2 10 μl5′RACE Control Outer Primer (10 μM)*2 10 μl5′RACE Control Inner Primer (10 μM)*2 10 μl*1 此 Buffer 带有颜色，长时间保存有时会产生沉淀，请离心后取上清使用，不会影响反应性能。
2 用于扩增 Human Prohibitin (PHB) 基因 5′末端约 750 bp 的 DNA 片段 ■ 制品说明本试剂盒是高灵敏度、高特异性扩增 cDNA 5′末端全长的试剂盒使用 RT-PCR 方法扩增目的 DNA 时，一般很难得到全长的 cDNA 片段，在基因工程研究中，分析遗传基因的全长 cDNA 序列十分重要RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) 法能有效解决这一问题TaKaRa 5′-Full RACE Kit 能够通过已知的cDNA 序列，高灵敏度、高特异性地扩增 cDNA 的 5′末端的全长序列 本试剂盒应用了“去帽法”原理，Tobacco Acid Pyrophosphatase (TAP) 可以去掉 mRNA 的 5′帽子结构，使用 T4 RNA Ligase 将 5′RACE Adaptor 连接到 mRNA 的 5′端后，可以使用 5′RACE Adaptor 上的引物与已知序列部分的引物进行 RT-PCR 反应，高特异性地扩增 cDNA 5′末端的全长序列本试剂盒中含有完成 5′RACE 操作的主要试剂试剂盒中使用的 Reverse Transcriptase M-MLV (RNase H-) 经过了本公司的特殊改良，反转录性能良好，无 RNase H 活性，大大增加了反转录性能。
结合使用TaKaRa LA Taq (TaKaRa Code：DRR02AM) 进行 PCR 扩增时，其 5′RACE 的扩增性能大大优于其他同类产品 本试剂盒应用了套式 PCR 原理，增加了 PCR 扩增的特异性与灵敏度，可以对少量样品或低丰度的基因进行 5′RACE 实验，并且对长片段的 5′RACE 扩增具有明显优势5′RACE Inner Primer 中含有 BamH I 酶切位点，为克隆提供了方便使用 TaKaRa LA Taq 扩增得到的 PCR 产物的 3′端附有一个“A”碱基，可直接克隆于 T-Vector 中试剂盒中提供的 Control HL60 Total RNA 可作为 Control RNA，使用 Control Primer 可扩增 Human Prohibitin (PHB) 基因 5′末端约 750 bp 的 DNA 片段 本试剂盒具有以下特点： 1. 扩增 cDNA 的 5′末端全长序列应用了 “去帽法” 原理，可以有效扩增 cDNA 的 5′末端全长序列 2. 高灵敏度的 5′RACE 扩增采用了套式 PCR 法，对低丰度的基因或极少量的 RNA 样品同样可以进行5′RACE 实验。
3. 高特异性的 5′RACE 扩增套式 PCR 法的使用，大大提高了 5′RACE DNA 片段扩增的特异性 4. 长片段 5′RACE 扩增。