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1、1硅胶的活化：DCM（CH 2CL2 清洗硅胶）(进口的不需要清洗，国产的要清洗)：将硅胶装于玻璃柱中3 倍于硅胶体积的甲醇清洗（大约 8001000mL 的甲醇）同体积的 DCM 清洗（大约 500ML 的 DCM）将硅胶置于铝箔纸上，通风厨过夜让溶剂挥发干净（或者 N2 吹干）马福炉中 550烘烤至少 12hrs,然后降温到 180停留至少 1hr取出在干燥器中降温后，转制烧瓶中加塞密闭，于干燥器中备用。Note: 在玻璃柱中清洗时防止硅胶有断层出现酸性硅胶的配制30酸性硅胶的配制于烧瓶中称取 100g 活化硅胶于硅胶上逐滴滴入浓 H2SO4 共 40g(硫酸密度为 1.84g/mL)计算
2、公式为 x/(x+100)=30， x=42.86g, 42.86/1.84=23.3mLNote 边加边摇，以防结块，或置于摇床上至硅胶为均匀流动状态置于干燥器中保存若配制时用 50g 硅胶，那么 H2SO4 取 11.65mL(大约为 21.4g)22%酸性硅胶：8mL 浓 H2SO4 加 50g 活化硅胶44%酸性硅胶：43mL 浓 H2SO4 加 100g 活化硅胶44%酸性硅胶：21.5mL 浓 H2SO4 加 50g 活化硅胶431.84/(100+431.84)= 44%2Note: 楼上的方法不能用于楼下，因为所用的硅胶不同，色谱行为就不同，即使柱形一样。因为楼上用的硅胶与楼下
3、的不同，所以不能方法混用。楼上硅胶是国产，楼下的是进口的。碱性硅胶的配制（1.2%）100g 活化硅胶滴入 30g 1 N 的 NaOH(1N NaOH: 1.2gNaOH 溶于 30mL 水)注意：不要使硅胶沾到烧瓶的内磨口上，否则盖子关上后容易粘住打不开楼上用的是 33%的碱性硅胶 （水NaOH）/( 水NaOH+硅胶)33%1g NaOH 加到 25mL 水里，即配制成了 1mol/L 的溶液，然后加入到 50g 活化硅胶中。氧化铝：酸性氧化铝的活化酸性氧化铝装于烧瓶中（体积不超过一半）用铝箔纸疏松的盖住瓶口在干燥烘箱中 130过夜（至少 12hrs）干燥器中加塞密闭干燥器中备用3碱性氧
4、化铝：（最好在两周内使用，后者最好在 5 天内用完，否则易失活，可能需要重新活化）碱性氧化铝盛于蒸发皿中马福炉中 600烘至少 24hrs降温到 130停留至少 3hrs干燥器中降温后转至烧瓶中，于干燥器中备用弗罗里土：Florisil( 硅酸镁 )150mm5mmID 小柱底部用玻璃棉轻轻塞住取 1g 弗罗里土装于柱子中，并且轻轻拍动柱子让填料均匀沉降上层再装约 1cm 的无水 Na2SO450mL DCM 清洗小柱卸去四氟阀，放于通风橱中过夜，让溶剂挥发干整个柱子置于干燥烘箱中，140至少 24hrs如不使用则在 140下存放Note：使用时将柱取出降至室温，90 分钟内使用，否则重新活化
5、。4AgNO3 硅胶（10%）的配制5.6g AgNO3 溶于 21mL 超纯水中逐滴加入到 50g 活化硅胶中（或者 11.2g AgNO3+35mL 水+100g 硅胶）用铝箔纸将装 AgNO3 硅胶的烧瓶全部包裹住，烧瓶口用铝箔纸疏松地盖住，置于干燥烘箱中烘箱中 30烘 5hrs(至少 5hrs) 升温到 60停留 3hrs中间慢点升温升温到 180至少 12hrs干燥器中降温后加塞密闭（保存在棕色干燥器中备用）Note:如果在制作过程中发现 AgNO3 硅胶颜色加深或者局部变为灰黑色，应该弃去此次配制。变色原因：升温过快。Note:装 AgNO3 的小烧杯要尽快用超纯水洗净，否则 Ag
6、NO3 会粘到烧杯上，不容易洗干净。Na2SO4： 660下马福炉中烘至少 6 hrs（优级纯）注意：提取筒洗过后要在马福炉里 420烘一段时间纯化注意事项：1 所有纯化柱均采用干法装制；2 装好填料后轻拍柱子至填料表层平整；3 一旦加上洗脱液后，则不要再拍动柱子；4 一定量的 hexane 预淋洗进行稳定，并且除去部分污染杂质；5 预淋洗时流速控制在 2 滴/S;6 填料若出现断层则不能再使用；57 上柱样品后，用 1mL 正己烷清洗烧瓶；8 要等上一组分液面约 1mm 时再上样；9 若是做流出曲线，对体积要求就会严格一些，接流出物的量筒用铝箔包上，防止溶剂挥发。酸洗 or 酸性硅胶柱： 1
7、.5cm 内径（15mmID）结构式 SiO玻璃毛填充5g 44%酸性硅胶5g 22%酸性硅胶（这个是为了防止 44%硅胶发生炭化）2g 活化硅胶2 cm 无水 Na2SO450mL-70mL 的 Hexane 淋洗样品上样70mL-100mLHexane 洗脱旋转蒸发至 2-3mL2 cm 无水 Na2SO42g 活化硅胶5g 22%酸性硅胶5g 44%酸性硅胶6淋洗用的 Hexane 量由所加的硅胶量决定，若酸性硅胶（22%+44%）一共才 10克，就不用 100mLHexane 洗脱，70mL 足够，太多反而将杂质洗脱下来了。预淋洗用溶剂量也不一定要 50mL70mL,由硅胶量决定。酸洗
8、前一定要记住：一定要将溶剂置换为 Hexane 再酸洗。硫酸硅胶柱净化容量不足，杂质易与 dioxin 及 PCBs 竞争氧化铝及 florisil 的活性基位（Active sites） ，使 dioxin 及 PCBs 在流洗过程中损失，降低了回收率。故 acid silica 要不能被穿透为止（由管柱的颜色外观可以判定是否被穿透）Note：酸洗前，若样品溶剂为 DCM，要将 DCM 置换成 Hexane，CH2CL2 不能与 H2SO4 混合，过酸性柱前将甲苯溶剂也要置换为 Hexane,甲苯剩下的越少越好。酸洗：（注意酸洗最多次数不要超过 3 次，否则影响回收率）在溶液中加入 15g
9、酸性硅胶和搅拌磁子，在磁力搅拌器上搅拌 30mins取上清液过无水 Na2SO4 小柱剩下的硫酸硅胶用 1020 ML 的 Hexane 清洗两次（于磁力搅拌器上搅拌各 10分钟）每次清洗后过无水 Na2SO4 小柱，一并收集合并后收集浓缩酸性硅胶柱可以吸附许多离子或者非离子性官能基化合物，包括生物碱，糖脂，配糖物（醣） ，染料，碱金属离子，脂质，甘油，类固醇，可塑剂，多环芳香族化合物及酚类衍生物等。7酸碱硅胶柱纯化（复合硅胶柱）30cm15mmID底部有 200 目玻璃砂芯和四氟磨口阀1g 活化硅胶 1g 活化硅胶4g 碱性硅胶 4g 碱性硅胶1g 活化硅胶 1g 活化硅胶8g 酸性硅胶 8
10、g 酸性硅胶2g 活化硅胶 1g 活化硅胶1cm 无水 Na2SO4 2gAgNO3 硅胶100mLHexane 预淋洗2cm 无水 Na2SO475mLHexane 洗脱 100mLHexane 预淋洗上样后用 150mL (DCM/Hexane=5/95)洗脱82 cm 无水 Na2SO42cm 无水 Na2SO4 1g 活化硅胶2 g AgNO3 硅胶1g 活化硅胶8g 44%酸性硅胶1g 活化硅胶8g 酸性硅胶 3g 碱性硅胶1g 活化硅胶 1g 活化硅胶4g 碱性硅胶 1.5g 2 g AgNO3硅胶1g 活化硅胶 1g 活化硅胶楼下的方法 ：先用 100mLHexane预淋洗，上样
11、后用 150mL 洗脱。DCM/Hexane5/95楼上的方法 ：先用 70mL-90mLHexane预淋洗，上样后，用 100mLHexane 洗脱。注意：AgNO3 硅胶不要加得太多，它对 PCBs 有吸附作用，AgNO3 硅胶尽量称得准确些，它对流出曲线影响较大些（AgNO3 有一定的极性）分析 PBDE 时，要用铝箔纸将层析柱包上，防光（PBDE 与 AgNO3 都要防光）分析 PBDE 时是一样的柱子，一样的填料，洗脱是先 100mLHexane 预淋洗，上样后先用 70mLHexane 洗，弃去，再用 70mL 1：1（DCM/Hexane ）洗，这时洗下的就是含有 PBDE 的成
12、分。1cm 无水 Na2SO496 g 酸性 or 碱性氧化铝氧化铝纯化柱： 30cm15mmID 玻璃柱6 g 酸性 or 碱性氧化铝1cm 无水 Na2SO4100mL Hexane 预淋洗酸性氧化铝 碱性氧化铝DCM : Hexane (1:1,V:V) DCM:Hexane(1:1, V:V)40mL 洗脱 30mL40mL 洗脱旋蒸时留 1mL 左右，因为弗罗里土纯化柱太细，要减小上样的高度，洗脱时注意控制流速，不能太快，塞子不要垂直，倾斜既可弗罗里土纯化柱： 柱型 150mm5mmID玻璃棉1g 弗罗里土1cm 无水 Na2SO450mL DCM 清洗溶剂挥发（要卸下塞子）140下
13、至少烘 24hrs冷却后 90min 内使用（装上塞子）50mLHexane 预淋洗1035mL 收集 PCBs（30mL-35mL 洗脱）DCM:Hexane(5:95,V:V)DCM（二氯甲烷）40mL-45mL 收集 dioxins生物组织脂肪含量测定和去除：提取脂肪前烧瓶称重提取液转移至此烧瓶旋转浓缩近干后移至 N2 流下将多余溶剂吹走，直至天平称重无变化（百分位天平）称量提取后烧瓶重两次重量差即为脂肪含量脂肪含量【（提取后烧瓶重提取前烧瓶重）/提取样】（1组织水分百分含量）称脂后加 50mLHexane 溶解提取物15g 酸性硅胶，搅拌磁子搅拌 30mins过无水 Na2SO4 小柱
14、5mLHexane 清洗两次合并收集后浓缩楼上氧化铝 0.8 cmID,细柱，半湿法装柱若是 1.0cmID,则 Al2O3 用 10g柱中加 30mLHexane8g Al2O31cm Na2SO4预淋洗（30mL-40mLHexane 洗脱）11上样DCM/Hexane5：95 100mL 洗脱 PCBsDCM/Hexane1:1 50mL 洗脱 dioxins凝胶渗透色谱 GPC填料： Bio-Beads SX3GPC 柱型 30cm25mmID(柱子下面有砂芯)填料 30g 于烧杯中加入 DCM:Hexane（1：1，V：V）全部盖住铝箔纸盖住烧杯置于通风橱过夜，至少 12hrs,填料
15、充分溶胀搅动填料，并用吸管逐步将填料转移到柱中，中间打开四氟阀放去多余的溶剂全部转移后，上部留有 10cm 溶剂上端加塞，底部关阀整个柱子倒置后打开阀门振荡柱体，使填料逐渐整体均匀倒置关闭阀门，将柱子缓慢扶正，并且打开上面的磨口塞，可以看到填料均匀沉降直至完全应该无断层，无气泡，无沉降分界层500mL DCM：Hexane（1:1 ,V:V）淋洗， （注意要将溶剂混合均匀）滴速 23 滴/S不用时关阀加塞密闭，上层留有 5CM 以上的溶剂，GPC 使用溶剂均为DCM：Hexane（1：1，V:V）若长时间没用，纯化前用 100mL 溶剂预淋洗GPC 洗脱DCM：Hexane(1:1,V:V)100mL 预淋洗（量筒接）量筒 1上样后，先用 50 mL DCM：Hexane(1:1,V:V)去掉大分子（量筒接）量筒 212另外量筒接 70mL(DCM/H
