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1、一项体外对比研究确定 Oxygene(由 Oxyfresh 生产) 与其它的漱口水相比的杀菌活性【An In Vitro Comparative Study Determining Bactericidal Activityof Oxygene (from Oxyfresh) and other Oral Rinses】作者简介David Drake：美国爱荷华大学牙科学院，道斯牙科研究所。 Alissa L. Villhauer：美国爱荷华大学牙科学院，道斯牙科研究所。摘要目的：这项研究旨在确定 Oxygene（含有 Patented Zinc 的漱口水）的杀菌活性，并与目前市场上出售的产品
2、进行比较。方法：将与牙龈炎和牙周炎有关的口腔细菌置于漱口水中一分钟和五分钟。检测放在放置之前和之后每毫升（CFU / ml）菌落的数量来确定杀菌活性。结果：与预期的一样，Chlorhexidine 和 Crest Pro-Health 可以在五分钟内杀死所有的细菌。Breath Rx 的杀菌效果则是所有产品当中最差的。Oxyfresh 和 Crest Pro-Health 漱口水可以在 1 分钟内 100%杀死牙周致病菌；在某种情况下，Oxyfresh 漱口水比Crest Pro-Health漱口水在一分钟时的杀菌效果更强。总结：结果显示，在针对口腔健康的治疗中，Oxyfresh 漱口水的疗效
3、非常好，尤其是对于担忧漱口水的口感以及牙齿着色的患者来说无疑是最好的选择。引言牙龈炎是指发生在牙龈结缔组织上的炎症。牙龈炎发生之前是未被破坏的牙菌斑生物膜。研究表明，如果停止所有口腔卫生护理，那么牙菌斑将会不断地积累，牙龈炎也将会在未来 10-21 天内迅速发展。牙龈炎可以通过常规口腔护理来预防，但是如果不治疗后期可能会发展成为严重的牙龈疾病-牙周炎。牙周炎是指由牙菌斑引起的牙周支持组织（例如结缔组织和牙骨质）的炎症。其中慢性牙周炎最为常见，大约有 20的美国成年人口受到影响。近期使用基因组学、蛋白质组学和代谢组学的研究描述了从低水平到组织水平的临床疾病可表现出的发生在细胞和分子之间多重相互作
4、用的复杂模型。牙菌斑是可以引发一系列免疫介质最可识别的前体之一，其可根据个体的遗传情况和环境因素而产生表观遗传反应，临床口腔疾病即可在此基础上发展。微生物群落中成分的转变是牙菌斑生物膜群落在口腔中的一项重要变化，转变为由厌氧细菌主导。牙菌斑被认为是具有高度结构化的、基质嵌入的、并且拥有多种微生物群体和细菌物种的特异性生物膜。由于生物膜的体积和结构保护了在其内部生存的细菌，从而可能会降低抗菌剂的功效。治疗牙龈炎和慢性牙周炎主要是通过加快去除和破坏牙菌斑生物膜来实现的。对于牙龈炎而言，有效的家庭口腔护理通常是以一天两次的护理为标准的。典型的干预措施通常包括口腔卫生的指导，从而进行彻底的牙龈下清创术
5、（如刮牙术和牙根整平术） 。处方漱口水，例如含有葡萄糖酸氯己定的那些，其对于牙龈炎治疗是有效的，但是，并不适合长期使用，因为可能会对牙齿造成破坏，并且会有令人感到不是十分愉快的味道。非处方漱口水，例如 Crest Prost Health（ProcterGamble，Cincinnati，OH，USA） ，其被授予美国牙科协会的印章，并被批准为抗牙菌斑和抗牙龈炎的产品。然而，这款漱口水的酒精含量较高，并且会着色，对于一些消费者来说，是不会感到愉快的。含 Oxygene 成分的漱口水在市面上是可以买到的（具有 Patented 的 Oxyfresh 漱口水，Oxyfresh / 21 Ten I
6、nc，ID） ，其不会损坏牙齿也不会着色，并与其它漱口水有着一样抗菌的功效。Oxygene（来自 Oxyfresh）是一种具有抗菌特性的化合物，尤其是对抗口腔中的细菌。临床和实验数据表明，Oxygene（来自 Oxyfresh）漱口水可以有效地减少口腔中细菌的数量，并且基本上可以消除口腔恶臭，从而减少由口臭引起的一系列疾病。再者，其杀菌效果与其它同类口腔产品是相当的，同时，又不含酒精、且不着色，从而被广大消费者所接受。虽然在这项研究中没有评估其美白效果，但是没有任何文献表明使用过本产品后会出现着色或色素沉着等情况。这项研究的目的是比较 Oxygene（来自 Oxyfresh）漱口水与市面上在售
7、的其它漱口水在体外的杀菌活性效果。本研究评估与口腔疾病相关的细菌包括：粘性放线菌、内氏放线菌、口腔链球菌、变异链球菌、粪肠球菌、牙龈卟啉单胞菌、血红链球菌、微消化链球菌、龋齿放线菌、黑色普雷沃菌、放线杆菌。测试到的其它细菌均与口腔疾病无关，但是会潜伏在人体内威胁人们的健康，包括肺炎克雷伯菌（院内感染） ，铜绿假单胞菌（院内感染） ，金黄色葡萄球菌（全身性感染）和流感嗜血杆菌（全身性感染） 。数据评估由于评估的生物体数量非常多，运用的动力学方法也很多，所以难以多次地重复评估，由此得出，明确所研究产品的差异而不进行推论统计是一个较为明确的数据评估方向。材料和方法本研究使用时间杀菌动力学的方法测定漱
8、口水的杀菌活性。将细菌（0.1 至 0.5ml）放入五十毫升营养液培养基中，根据被检测过的细菌的特异种类，并按照特定的要求对其进行培养。经过一段时间的培养后，通过离心的方法来分离细胞（7,500g） ，并将其重新悬浮于巴特菲尔德缓冲液中。在 A660 的分光光度计中测量其吸光度，并参照每个生物体预定的标准曲线来调整悬浮液，使其达到所需测定的浓度（107CFU / ml） 。通过对所有培养物进行革兰氏染色来证实其培养的纯度。将标准悬浮液放入每个漱口水中：Oxyfresh，Listerine，Crest Prost Health（ProcterGamble，Cincinnati，OH，USA）;
9、Breath Rx（Discus Dental，Culver City，CA，USA）; 和 Peridex（3M ESPE，Panorama City，CA，USA） 。其杀菌活性检测过程如下：将一百毫升实验漱口水倒入有搅拌棒的、且容量为 250ml 的无菌烧杯中，并置于搅拌盘上进行缓慢搅拌。然后将 10 毫升细菌悬浮液倒入烧杯中，并开始计时。一分钟后取出一毫升样品，同理，五分钟后也取同样的量。将每个样品加入到 9 毫升Neutralizing Broth（Neogen Corporation，Lansing，MI，USA）中，并在这些试管中在进行 10:1 的稀释。在将细菌加入到特菲尔德缓
10、冲液（阴性对照）后，立即对其进行成分鉴定。在经过上述实验过程后，使用 Autoplate 4000 系统（Advanced Instruments Inc.，Norwood，MA，USA）将每个试管中的生物体螺旋镀在适合的介质上。并将琼脂平板放在 5CO2 或厌氧（Coy Chamber）环境下培养 24-96 小时。根据标准螺旋镀方法，在制定的时间点测定试管中活菌的数量。并将原始数值转换为 log10 值，以计算数据方差。结果表 I 显示了在一分钟和五分钟后不同漱口水的杀菌活性（从基线开始对数降低） 。数据显示，Oxyfresh 漱口水对口腔细菌和其它机会性病原体的光谱具有强烈的杀菌作用。O
11、xyfresh 杀死了除口腔链球菌、粪肠球菌、血红链球菌和铜绿假单胞菌之外的所有细菌。在大多数试验中，细菌可在出现的第一分钟内消除。在大多数情况下，含 Oxyfene 成分的漱口水Oxyfresh，可在一分钟内完全消灭细菌;它可在五分钟内完全杀死粘性杆菌，并减少口腔中口腔链球菌、粪肠球菌、血红链球菌和铜绿假单胞菌的数量。Listerine 在五分钟内将所有细菌完全杀死，而氯己定也需要五分钟。Crest Pro-Health 在五分钟后完全杀死金黄色葡萄球菌，并在第一分钟内杀死其它细菌。Breath Rx 总体呈现较弱的杀菌水平，仅在一分钟内完全杀死放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌、黑色普雷沃菌和流感嗜
12、血杆菌，以及五分钟后杀死血红链球菌和铜绿假单胞菌。Oxyfresh 与其它被检测的漱口水相比，在第一分钟时针对放线杆菌（涉及牙周病和牙髓病感染）和微消化链球菌（发现于牙周病）而言，Oxyfresh 的杀菌活性超过与其进行阳性对照的氯己定。对于变异链球菌（其可引起龋齿）和粘性放线菌（可导致口腔感染） ，含氯己定的样品在第一分钟时的杀菌活性较高，但在 5 分钟之后，Oxyfresh 和氯己定样品均显示可以 100杀死悬浮液中的细菌。对于牙龈卟啉单胞菌（与慢性牙周炎的进展密切相关） ，放线杆菌（局部侵犯型牙周炎的病原体） ，龋齿放线菌（与深龋和慢性牙周炎有关）和黑色普雷沃菌（发现于牙髓感染） ，Ox
13、yfresh 和 Listerine 均在一分钟内达到 100杀死这些细菌的效果。除了口腔链球菌，粪肠球菌，血红链球菌和铜绿假单胞菌外，Oxyfresh 在这项研究中杀死了所有的细菌。在对抗金黄色葡萄球菌时，与其它漱口水相比，Oxyfresh 显示出了更强的杀菌活性，虽然其不一定是口腔病原体，而是金黄色葡萄球菌感染的致病因子，Oxyfresh 在一分钟内均将其 100杀死。讨论牙菌斑中的细菌是引发几种口腔疾病的主要病原体，包括牙龈炎和牙周炎。在口腔护理中，无创伤性非处方产品对于减缓牙齿表面牙菌斑生物膜的形成是非常有用的，从而降低了患口腔疾病的风险。含 Oxygene 的漱口水（来自 Oxyfr
14、esh）对与牙龈炎、牙周炎以及其它机会性致病菌有关的口腔细菌有着显著的杀菌作用。这个结果与以前的研究评估含Oxygene 成分的漱口水对微生物悬浮液和生物膜环境有破坏作用是一致的。对于 Oxyfresh 产品作为刮牙术和牙根整平术的辅助疗法在治疗和管理牙周炎上进行了首次研究。两份被发表的临床研究评估了含 Oxygene 成分的漱口水和牙膏对牙龈炎和口腔软组织的影响。实验研究要求受试者每天使用两次。并测量和评估牙周炎和牙周袋。 探针的评分结果为（67.4） ，并从4 毫米减少至3 毫米在 3.4 个月时。第二次回顾性临床研究通过测量 4 毫米处或更长深度探测部位的出血次数，来比较使用Oxyfre
15、sh 漱口水和牙膏与不使用这两种产品对口腔产生的影响。再次进行口腔护理探测时，使用过漱口水和牙膏的，其出血部位显示比没有使用的平均减少了 71.85。少数参与者停止使用这些产品后，其出血量增加了 157。当再次使用这些产品时，出血量即由原来的 71.87%降至 44。此外，体外研究表明 Oxyfresh 漱口水可以对抗各种口腔病原体.这些研究表明，Oxyfresh 漱口水可在 10 秒内杀死与口腔疾病发展相关的 99的口腔细菌，并且漱口水在体外对人的牙龈细胞的毒害性比氯己定低。进行的另外一项研究表明，通过使用漱口水作为超声洁治术的漱口水来进一步控制口腔感染。这项研究表明，Oxyfresh 安全
16、地将微生物气溶胶的暴露减少了 60。对于一些测试生物体来说，Oxyfresh 漱口水对其的杀菌活性较低，相比于chlorhexidine。然而，本研究中使用的单一培养方法，难以直接从培养板这个区域中推断出漱口水杀菌活性的水平。这是实验迈出的第一步，可以说是非常重要的，其提供了有关对抗口腔细菌活性水平的有价值信息，且这些信息均在是在非常标准化的实验室环境中获得的。运用杀菌动力学的方法来获得漱口水中生物体的数据。很明显，还需要进行更复杂的实验研究评估，并应涉及多种微生物膜和运用多种实验方案。事实上，我们已经完成了许多类似的实验，并在国际会议上报告了这些发现。当然，还需要进行精心设计试验，以便在更长的时间内充分评估这些漱口水对口腔菌群的影响。从而我们就可以鉴别可能引起口腔疾病的菌群的组成成分，实现临床意义上的重大变化。针对可引起牙周膜感染、牙龈感染、龋齿和金黄色葡萄球菌感染的病原体，Oxyfresh对这些口腔细菌的杀菌效果十分好，以及对愈合细胞（成纤维细胞）的形成是十分有利的，总而言之，Oxyfre
