《20几种常用试剂配置方法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《20几种常用试剂配置方法（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1、30%丙烯酰胺(1)配制方法：将 29G 丙烯酰胺和 1g N，N-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 60ml 的水中，加热至 37溶解之，补加水至终体积为 100ml，用 Nalgene 滤器（0.45um 孔径）过滤除菌，查证该溶液的 pH 值应不大于 7.0，置之不理棕色瓶中保存于室温。 （2）说明：小心丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具螺积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。 一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约 0.2 体积的单床混合树脂
2、（MB-1 Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用 Whatman 1号滤纸以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酸和双丙烯酸。2、10%过滤酸铵 （ 1）配制方法：把 1g 过硫酸铵溶解于终量为 10ml 的水溶液中，该溶液可在 4 保存数周。3、1mol/L 氯化钙 （ 1）配制方法：在 20ml 纯水中（Milli-Ce 水或相当级别的水）溶解 54g Cacl2 ? 6H2O用 0.22um 滤器过滤除菌，分装成 10ml 小份贮存于-20 。 （ 2）说明：制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用纯水稀释至 100ml，用 Nalgene 滤器（0.45um 孔
3、径）过滤除菌，然后聚冷至 0。4、1mol/L 二硫苏糖醇（DTT） （ 1）配制方法：用 20ml 0.01mol/L 乙酸钠溶液（pH5.2）溶解 3.09g DTT，过滤除菌后分装成 1ml 小份贮存于-20 。 （2）说明：DTT 或含有 DTT 的溶液不能进行高压处理。 5、0.5mol/L EDTA（pH8.0） （ 1）配制方法：在 800ml 水中加入 186.1g=水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na ?2H2O ），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用 NaOH 调节溶液的 pH 值至 8.0（约需 20g Naoh 颗粒）然后定容至 1L，分装后高压灭菌备用。 （2）说明：EDTA
4、二钠盐需加入 NaoH 将溶液的 pH 值调至接近 8.0 时，才能完全溶解。 6、10mg/ml 溴化乙锭 （1）配制方法：在 100ml 水中加入 1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容光焕发器或转移至棕色瓶中，保存于室温。 （2）说明：小心：溴化乙锭 是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。这些溶液使用后应按附录 E 提供的方法之一进行净化处理。7、100mmol/L IPTG配制方法：IPTG 为异丙基硫式- -D-半乳糖苷（分子量为 238.3D），在 8ml 蒸馏水中溶解 2g IPTG 后，用蒸馏水定容至 10m
5、l，用 0.22um 滤器过滤除菌，分装成 1ml 小份贮存于-20。8、1mol/L 硫酸酶 （1）配制方法：在 800ml 水中溶解 214.46g 四水乙酸镁，用水定容至 1L，过滤杀菌。 9、 巯基乙醇（BME）（1）配制方法：一般得到的是 14.4mol/L 溶液，应装在棕色瓶中保存于 4 ； （2）说明：BME 或含有 BME 的溶液不能高压处理 10、酚/氯仿（ 1）配制方法：一般得到的是 14.4mol/L Tris ?Cl（pH7.6）抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的 0.01mol/L Tris?Cl（pH7.6）液层，保存于4。 （2）说明：小心
6、，酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的皮肤部位应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。11、10mmol/L 苯甲基磺酰氟（PMSF） （ 1）配制方法：用异丙醇溶解 PMSF 成 1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20 ，如有必要可配成浓度高达 17.4mg/ml 的贮存液（100mmol/L）。（ 2）说明：小心：PMSF 严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸和，吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触 3PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被 PMSF 污染的衣服应予丢弃。PMS
7、F 在水溶液中不稳定，应在使用前从贮存液中现用现加入裂解缓冲液中。PMSF 在水溶液中的活性丧失速率高于 4。pH 值为 8.0 时，20umol/L 的 PMSF 溶液的半寿期大约为 35 分钟（James，1978），这表明将 PMSF 溶液调节为碱性（pH8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。12、磷酸盐缓冲溶液（PB S）（1）配制方法：在 800ml 蒸馏水中溶解 8g Nacl、0.2gKcl、1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4，用 HCL 调节溶液的 pH 值至 7.4 加水定容至 IL，在 15 16f/in 2 （1.034 10 5 Pa ）
8、高压下蒸汽灭菌 20 分钟，保存于室温。13、乙酸钾溶液（用于碱裂解）（1）配制方法：在 60ml 5mol/L 乙酸钾溶液中加入 11.5ml 冰乙酸和 28.5ml 水，即成钾浓度为 3mol/L，而乙酸根浓度为 5mol/L 的溶液。 14、3mol/L 乙酸钠 （1）配制方法：在 800ml 水中溶解 408.1g 三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pH 值至 5.2 或同稀乙烯调节 pH 值至 7.0，加水定容到 1L，分装后高压灭菌。15、5mol/L 氯化钠 （1）配制方法：在 800ml 水中溶解 292.2g Nacl 加水定容至 1L，分装后高压灭菌。16、10%十二烷基硫酸钠（S
9、DS） （1）配制方法：在 900ml 水中溶解 100g 电泳级 SDS，加热至 68 助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的 pH 值至 7.2，加水定容至 1L，分装备用。 （ 2）说明：SDS 的微细晶粒易于扩散，因此称量时要戴口罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的 SDS，10%SDS 溶液无须灭菌。 17、20SSC （ 1）配制方法：在 800ml 水中溶解 175.3g Nacl 和 88.2g 柠檬酸钠，加入数滴 10mol/L Nach 溶液调节 pH 值至 7.0 加水定量至 1L，分装后高压灭菌。18、100%三氯乙酸（1）配制方法：在装有 500g TCA 的瓶中加
10、入 227ml 水，形成的溶液含有 100%（W/V）TCA。19、1mol/L Tris （1）配制方法：在 800ml 水中溶解 121.1g Tris 碱，加入浓 HCL 调节 pH 值至所需值。 pH HCL 7.4 70ml 7.6? 60ml 8.0? 42ml 应使溶液冷至室温后方可最后调定 pH 值，加水定容至 1L，分装后高压灭菌。 （ 2）说明：如 1mol/L 溶液呈现黄色，应予丢弃，并置备质量更好的 Tris。尽管多种类型的电级均不能准确测量 Tris 溶液的 pH 值，但仍可向大多数厂商购得适合的电极。Tris 溶液的 pH 值因温度而异，温度每升高 1 ，pH 值大
11、约降低.03 个单位。例如：0.05mol/L 的溶液在 5、25和 37时的 pH 值分别为 9.5、8.9 和 8.6。 20、Tris 缓冲液溶液（1）配制方法：在 800ml 蒸馏水中溶解 8g Nacl、0.2Kcl 和 3g Tris 碱，加入 0.015g酚红并用 Hcl 调 pH 值至 7.4，用蒸馏水定容至 1L，分装后在 15 1bf/in2（1.034 10 5 Pa)高压下蒸汽灭菌 20 分钟，于室温保存。 21、X-gal（1）配制方法：X-gal 为 5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷，用二甲基甲酰胺溶解 X-gal 配制成 20mg/ml 的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有 X-gal 溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20，X-gal 溶液无须过滤除菌。
