《基因文库中目的基因的筛选》由会员分享，可在线阅读，更多相关《基因文库中目的基因的筛选（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、基因文库中目的基因的筛选克隆基因的方法有很多，根据研究基础的不同，可以使用以下的方法克隆目的基因： 1. PCR 或 RT-PCR 法2. 从基因文库中分离基因3. 从 cDNA 文库中分离基因4. 转座子标签法5. 图位克隆法6. 差减杂交法、扣除杂交、差异显示法7. 人工合成法本章中主要介绍从基因文库中筛选目的基因的几种方法。获的目的克隆的方法有两种1） 目的基因的直接选择2） 从基因文库中筛选称为鸟枪射击法，建立一个包含所有基因或大部分基因的克隆，从中筛选目的克隆。一、直接选择直接选择的基因比较少，如抗生素抗性基因。如克隆一个 kan 抗性基因，在 R6-5 质粒上含有四种抗性基因：ka
2、n, 氯霉素、链霉素、硫胺类药物， kan 抗性基因存在于 13 个 EcoRI 片段中的一段中。将 R6-5 的片段插入 pBR322 的 EcoRI 位点中，连接混合物中将含有 13 个不同片段的大量重组拷贝，其中部分是 kan 抗性的。只有含 kan 的克隆才能在含有 kan 的培养基上正常生长。1.1 标记援救可以扩大直接选择的范围利用 E. coli 的突变系可扩展该项技术。例如要从 E. coli 中克隆 trpA 基因，编码色氨酸合成酶，一个突变系不能合成色氨酸，只有加入色氨酸后才能存活。因此 E. coli 的突变体可以用来克隆 trpA 基因。首先从一个正常个体中提取总 DNA，然后酶切，连接产生大量重组 DNA 分子，其中一个将携带完整的 trpA 基因。连接混合物用来转化缺陷型 E. coli 细胞，大部分转化子是缺陷型的，携带 trpA 的重组子将是野生型的，可以在基本培养基上生长。1.2 标记援救的范围和限制存在两个限制因素：1） 必须存在着目的基因的突变品系2） 需要一种只有野生型能够生长的培养基。一般而言，标记援救适用于微生物的合成酶，可以在基本培养上选择。
