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1、槐米中芦丁的提取、分离和鉴定张景清（广西科技大学生物与化学工程学院 广西柳州 545006）1.摘要:本实验以槐米为原料，采用碱提酸沉法从槐米中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体作方法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。该方法提取率高达 26.3%，对提取的芦丁做了薄板识别及紫外分析，并与标准品做对比，结果表明提取的芦丁与标准品的纯度大致相等。2.引言芦丁,亦称芸香苷,广泛存在于植物界中,现已发现的含芦丁的植物有 50 种以上,其中以槐米和荞麦叶中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。芦丁属于黄酮类化合物,在心脑血管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用,具有 VP 样作用。有助于保持毛细血管
2、正常弹性,同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作用。其临床效果肯定,副作用少,同时也是一种植物原料药1。黄酮类化合物的提取方法较多主要是依据其溶解性及酸性。黄酮类化合物的提取方法一般有：热水提取法 醇提法 碱提酸沉法 系统溶剂提取法 本实验碱提酸沉法通过从槐米中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体操作方法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。 3.实验原理槐米中含芦丁、槲皮素、皂苷、白桦、酯醇等多种成分。芦丁是其主要成分，含量为16%-25%。芦丁属于黄酮类化合物，结构中含有多个酚羟基，呈酸性，苷元为槲皮素，糖基为芸香糖。芦丁为浅黄色细小针状结晶，95-97脱水，熔点 314，可溶于沸乙醇、无水
3、乙醇、乙酸乙酯、丙酮，不溶于石油醚和水。芦丁可溶于碱液中，呈黄色酸化后又析出，故可采用碱提酸沉法得到芦丁产品。然后利用在冷水中不溶，在热水中微溶的溶解度差精制，可获得纯度高的微细针状结晶，最后利用芦丁、槲皮素、及糖的性质予以鉴定。4.实验部分4.1 实验药品槐米（市售） ，氧化钙 AR（西陇化工股份有限公司） ，盐酸 AR（西陇科学有限公司） ，四硼酸钠 AR（广东省台山市化工厂） ，甲醇 AR（天津市大茂化学试剂厂） ，三氯甲烷AR（成都市科隆化学品有限公司）,氯仿（分析纯，成都市科龙化工试剂厂） ，乙醇（分析纯）4.2 实验仪器JJ200 电子天平（常熟市双杰测试仪器厂） ，SHZ-D（I
4、II）循环水式多用真空泵（河南爱博特科技发展有限公司） ，ZNLC-GS 130*60 智能磁力搅拌器（河南爱博特科技发展有限公司） ，薄层色谱展开缸，紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）4.3 实验步骤4.3.1 芦丁的提取方法一：称取槐米 10.0g，在研钵中稍加研碎后，置于 500ml 烧杯中，加入 250ml 水，加热搅拌下添加石灰乳，保持 PH=8-8.5。加热至 80左右时加入硼砂 0.2g，搅拌下加热至沸 20min，稍置，倾出上清液过滤。对残渣用 200ml 水重复提取一次。弃去残渣，合并滤液。用 10%盐酸调 PH 为 5，静置过夜，过滤，用少量蒸馏水洗 2-3 次，抽干即可得
5、芦丁粗品。方法二：称取槐米 10.0g，在研钵中稍加研碎后，置于 500ml 烧杯中，加入沸蒸馏水250ml，加热搅拌下继续加热至沸 30min，稍置，趁热倾出上清液，以脱脂棉过滤。对残渣用 200ml 水重复提取一次。趁热过滤，合并滤液。用 1%盐酸调 PH 为 5，静置过夜，过滤，用少量蒸馏水洗 2-3 次，抽干即可得芦丁粗品。4.3.2 芦丁精制取粗品 2.0g 转入烧杯中，加入适量蒸馏水（350ml 左右） ，加热至沸添加适量蒸馏水，使之刚好溶解完全，趁热抽滤，静置过夜，使晶体析出。抽滤，用少量水洗 2 次，在 70-80下干燥结晶，即可得精制芦丁。4.3.3 芦丁的薄板识别将实验所得
6、的芦丁用甲醇溶解，并与标准芦丁的甲醇溶液分别点在聚酰胺板上，用氯仿：甲醇（5:4）展开。紫外灯下观察荧光，喷 2%三氯化铝乙醇溶液后再观察荧光变化，计算 Rf 值。4.3.4 紫外光谱的鉴定配置标准芦丁的甲醇溶液测其之外光谱。取 0.5g 研磨好的槐米粉末，加 10ml 甲醇，在超声波下提取 5min，过滤，滤液作为芦丁样品溶液。向比色皿中滴加 1-2 滴芦丁样品溶液，并加入适量甲醇溶液，测其紫外光谱，并与标准芦丁的紫外光谱作对比。5.结果与讨论5.1 结果5.1.1 提取率方法一抽滤后得到了 1.45g 芦丁样品，提取率为 14.5%；方法二抽滤后得到了 2.63g 芦丁样品，提取率为 26
7、.3%；5.1.2 芦丁收率取 2.0g 粗产品进行重结晶，最后得芦丁精品 1.8g，收率为 90%5.1.3 芦丁识别及 Rf 值得测定 号板：a 标 =1cm，a 样 =2cm，b=5.1cm 。则 Rf 标 =0.196，R f 样 =0.392号板：a 标 =1.5cm，a 样 =2cm，b=4.5cm 。则 Rf 标 =0.333，R f 样 =0.4445.1.4 紫外光谱的鉴定102030405060708090-.20.20.4.60.81.21.4丁 (T) 丁丁 丁 (cm-1) 丁由紫外谱图看出，两峰的位置及形状基本一致，可定性的判断为同一种物质。5.2 讨论在使用方法一
8、提取芦丁时，收率较低。是因为在碱提时 pH 调的不够高，影响芦丁的提取率；在酸沉时调的不够低，降低了芦丁的析出。比较 1 号和 2 号的薄板识别，溶剂的前沿和芦丁样品到起始点的距离大致相等，而 1号和 2 号的芦丁标准品的爬板距离明显不同，1 号板标准芦丁和芦丁样品的 Rf 值相差较大，应舍去。2 号板标准芦丁和芦丁样品的 Rf 值相差较小，可能是因为芦丁样品不纯所致。根据标准芦丁和芦丁样品的紫外谱图可以看出，两样本的出峰位置及形状大致相同，可以判断出实验提取的芦丁较纯。但是在波数为 360cm-1 处两峰存在少许差异，应该是芦丁样品不纯所致。6.建议方法二操作简单、辅助试剂使用量少，建议优先
9、使用。方法一较方法二的收率低，使用方法一的 pH 最优条件：碱提加热调节 pH 要高于 8，酸沉静置调节 pH 要低于 4。在 50以下时，随着提取温度的升高，产率不断增加。但提取温度在 50以上时，产率无明显改变，所以提取温度以 50-60为宜。提取时间也会影响提取率，提取时间小于 20min 时，随着时间的增加，提取率不断增加。30min 后，提取率开始下降。所以提取时间保持在 20-30min 为宜。静置析出晶体时，常温静置析出的效果要高于在冰箱内静置析出。随着静置时间的增加，产率也随着增加，但到了 6h 后，产率变化平缓，综合考虑静置时间为 6h-8h 为宜。7.参考文献1钱彦丛，等 . 槐叶和龙抓槐叶中芦丁的 J. 黑龙江医药， 2002.435：436.2常瑛，等. 辣蓼中芦丁的薄层及紫外光谱鉴别 J. 现代生物医学进展， 46：47,51.3李慧，等. 槐米中芦丁的提取结晶及含量的测定 J. 陕西中医，2011.1412(32)：1413.
