饲料微生物学检测技术

《饲料微生物学检测技术》由会员分享，可在线阅读，更多相关《饲料微生物学检测技术（49页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、1微 生 物 制 剂 检 测 规 程广 州 金 水 动 物 保 健 品 有 限 公 司2010.11.6微 生 物 检 测 实 验 室 的 要 求1 检 测 区2微 生 物 实 验 室 的 区 域 要 求 做 如 下 的 特 定 操 作 ： 接 收 、 贮 存 、 制 备 和 样品 处 理 ； 培 养 基 和 设 备 的 制 备 和 灭 菌 ； 分 析 操 作 ： 称 重 、 稀 释 、 接 种 、传 代 、 培 养 、 菌 株 的 保 存 等 ； 设 备 的 去 污 与 清 洁 、 分 析 废 弃 物 的 处 理 。2.检 测 试 验 室 的 位 置微 生 物 分 析 的 环 境 不 应 影

2、 响 分 析 的 可 靠 性 。谨 慎 选 取 检 测 试 验 室 的 位 置 ， 避 免 交 叉 污 染 的 危 险 。注 意 避 免 极 端 环 境 如 高 温 、 灰 尘 、 潮 湿 、 水 蒸 汽 、 噪 音 、 振 动 或 直 接被 阳 光 曝 晒 等 。检 测 区 应 足 够 大 ， 以 保 持 工 作 区 域 干 净 整 齐 。 在 整 个 检 测 实 验 室 房 舍区 内 ， 建 议 每 个 检 测 人 员 的 人 均 工 作 平 面 面 积 约 为 20m2。在 检 测 期 间 ， 只 有 操 作 人 员 才 能 进 入 检 测 区 。以 下 工 作 应 设 立 单 独 的

3、房 间 、 区 域 和 /或 特 定 区 ：样 品 的 接 收 和 贮 存 ；样 品 的 制 备 ， 尤 其 是 原 始 材 料 （ 如 含 大 量 微 生 物 的 粉 状 制 品 ） ；培 养 基 和 玻 璃 仪 器 的 制 备 、 准 备 与 灭 菌 ；玻 璃 器 皿 和 其 它 器 材 的 清 洗 以 及 器 材 污 染 的 清 除 和 已 经 污 染 的 培 养 基的 处 置 ；食 品 无 菌 状 态 的 检 查 。对 以 下 区 域 也 应 考 虑 隔 离 ：培 养 基 制 备 区 和 培 养 基 、 器 材 的 灭 菌 间 ；污 染 净 化 区 和 洗 涤 区 。培 养 箱 、 冰

4、 箱 和 冷 冻 柜 可 专 门 放 于 合 适 的 房 间 。3.无 菌 间 和 洁 净 装 置接 种 、 移 种 等 无 菌 操 作 在 无 菌 室 或 洁 净 装 置 内 进 行 。 实 际 上 ， 无 菌 室 或洁 净 装 置 并 不 是 绝 对 无 菌 ， 只 是 要 求 空 气 达 到 一 定 的 洁 净 程 度 。 空 气 洁净 程 度 用 洁 净 度 等 级 来 衡 量 ， 空 气 中 的 尘 埃 粒 子 数 则 用 尘 埃 粒 子 计 数 器测 量 。 无 菌 操 作 应 在 达 到 100 级 的 空 气 中 进 行 。3无 菌 室 的 洁 净 程 度 有 时 也 可 用

5、菌 落 数 来 评 价 ， 通 常 是 将 无 菌 平 板 开 盖 暴露 20-30 min， 经 培 养 后 ， 如 平 板 上 菌 落 数 少 于 3 个 即 合 格 。无 菌 室 空 间 不 宜 太 大 ， 一 般 为 4-6m2， 高 约 2-2.5 m。 为 了 减 少 外 界空 气 的 干 扰 ， 要 设 1-2 个 缓 冲 间 ， 无 菌 室 一 般 用 拉 门 和 固 定 双 层 玻 璃窗 。 墙 面 、 地 坪 和 天 花 板 的 表 面 应 光 滑 、 无 裂 缝 。 墙 角 砌 成 圆 弧 形 ， 地坪 有 1/500 坡 度 。 室 内 的 固 定 设 备 应 昼 尽

6、量 简 单 ， 工 作 台 最 好 嵌 在 墙 上 ，管 道 、 电 线 等 设 施 则 以 铺 设 暗 线 为 佳 。无 菌 室 通 常 用 36 英 寸 30W 紫 外 灯 灭 菌 （ 新 灯 波 长 2300-2540A） ， 使用 前 照 射 30 min。 一 般 ， 一 支 紫 外 灯 能 用 2500 h， 喷 洒 或 揩 擦 用 的化 学 灭 菌 剂 包 括 ： 0.25-0.5%新 洁 尔 灭 ， 0.5%过 氧 乙 酸 ， 75%酒 精 ，0.5-1%漂 白 粉 等 。 必 要 时 ， 可 用 甲 醛 （ 每 米 3 空 间 用 10-15 mL 甲 醛和 5 g 高 锰

7、酸 钾 ） 薰 蒸 12-24 h。完 善 的 无 菌 室 应 具 备 空 气 调 节 系 统 ， 引 入 净 化 空 气 以 维 持 室 温 22-25 和 70%左 右 的 相 对 湿 度 .室 内 保 持 24.5-73.5 Pa 的 正 压 ， 换 气 次数 为 5-12 次 /h。洁 净 装 置 最 初 用 于 预 防 放 射 性 尘 埃 ， 后 来 则 在 电 子 、 计 算 机 、 医 药 和 微生 物 工 程 等 领 域 得 到 广 泛 的 应 用 ， 它 的 工 作 原 理 是 使 空 气 经 过 高 效 过 滤器 的 过 滤 而 得 以 净 化 ， 并 因 呈 单 向 、

8、平 行 、 均 匀 地 流 动 的 层 流 状 态 而 达到 洁 净 工 作 区 的 目 的 ， 常 用 流 速 为 0.2-0.8 m/s。洁 净 装 置 按 其 结 构 可 分 为 洁 净 工 作 室 和 洁 净 工 作 台 两 类 ， 按 照 空 气 在 工作 区 内 的 流 动 方 向 ， 则 可 分 为 垂 直 式 和 水 平 式 两 类 。洁 净 工 作 台 主 要 由 箱 体 ， 空 气 过 滤 器 、 风 机 、 工 作 区 、 配 电 箱 和 照 明 灯具 等 构 成 ， 空 气 过 滤 器 有 两 级 或 三 级 之 分 。 初 效 和 中 效 过 滤 器 常 用 一 定孔

9、 径 的 聚 氨 酯 泡 沫 塑 料 和 涤 纶 -晴 纶 无 纺 布 材 料 为 过 滤 介 质 ， 常 规 使 用3 个 月 左 右 就 最 好 清 洗 一 次 过 滤 介 质 ， 以 减 轻 高 效 过 滤 器 的 负 担 ， 高 效过 滤 器 的 常 用 过 滤 介 质 为 超 细 玻 璃 纤 维 纸 或 其 他 微 孔 滤 膜 。一 般 ， 洁 净 工 作 台 放 置 在 环 境 清 洁 的 实 验 室 中 使 用 即 可 ； 如 无 菌 要 求 很高 时 ， 可 考 虑 将 洁 净 工 作 台 放 入 无 菌 室 内 。 操 作 时 ， 应 尽 量 避 免 明 显 扰乱 工 作 区

10、 气 流 的 动 作 。44.室 内 设 施（ 1） 为 减 少 被 灰 尘 和 微 生 物 污 染 的 可 能 性 ， 检 测 室 应 配 备 以 下 设 施 ：实 验 室 用 的 墙 、 天 花 板 和 地 板 应 是 平 滑 、 易 清 洗 、 耐 清 洁 剂 和 消 毒 剂的 腐 蚀 ；楼 顶 上 的 输 液 管 道 不 能 穿 过 房 屋 ， 除 非 被 密 封 起 来 ；如 果 没 有 特 殊 原 因 ， 窗 户 外 面 应 装 有 日 光 辐 射 防 护 系 统 ；门 窗 应 能 密 合 关 闭 ， 以 免 检 测 时 受 气 流 影 响 ； 而 且 ， 其 设 计 应 使 它

11、们避 免 形 成 吸 尘 死 角 ， 且 便 于 清 洁 。（ 2） 环 境 温 度 和 空 气 质 量 （ 微 生 物 含 量 、 湿 度 、 尘 埃 分 布 等 级 等 ） 应 适合 进 行 检 测 的 要 求 。 为 此 ， 建 议 在 空 气 入 口 安 装 通 风 过 滤 系 统 。当 在 低 污 染 气 氛 下 进 行 检 测 时 ， 房 间 应 专 门 装 有 一 个 层 流 式 超 净 工 作台 或 （ 和 ） 一 个 安 全 的 工 作 台 。（ 3） 实 验 室 台 面 和 桌 柜 应 用 平 滑 、 无 渗 透 的 材 料 制 成 ， 以 便 于 清 洁 和消 毒 。 如

12、 果 可 能 ， 橱 柜 应 达 至 天 花 板 ， 以 防 灰 尘 堆 积 。实 验 室 内 桌 柜 的 设 计 应 便 于 地 板 的 清 洗 （ 如 用 可 移 动 桌 柜 ） 。应 有 封 闭 的 贮 存 设 施 ， 对 样 品 、 培 养 基 和 试 剂 等 的 操 作 文 件 进 行 保 存 。注 意 ： 不 常 用 的 文 件 或 书 应 放 在 检 测 区 外 。（ 4） 房 屋 应 有 很 好 的 照 明 设 施 ， 避 免 反 射 光 干 扰 。 应 尽 可 能 地 避 免 工 作区 和 敏 感 的 仪 器 设 备 （ 特 别 是 培 养 箱 ） 直 接 曝 露 在 阳 光

13、 下 。5、 维 护 和 检 查地 板 、 墙 壁 、 天 花 板 、 实 验 室 里 的 台 面 和 桌 柜 定 期 维 修 ， 不 能 有 裂 缝 。因 为 脏 物 可 能 会 堆 积 于 裂 缝 中 而 成 为 污 染 源 。为 使 环 境 条 件 达 到 检 测 要 求 ， 检 测 实 验 室 区 应 定 期 进 行 清 洁 和 消 毒 。定 期 检 修 、 维 护 通 风 和 过 滤 装 置 ， 必 要 时 更 换 过 滤 器 。定 期 监 测 表 面 和 空 气 的 微 生 物 学 质 量 。表 面 污 染 可 直 接 用 含 适 当 中 性 试 剂 的 接 触 平 板 检 查 估

14、 测 。 空 气 质 量 可 用含 非 选 择 性 琼 脂 培 养 基 的 皮 氏 培 养 皿 （ 如 平 板 计 数 琼 脂 ） 暴 露 15 min 后 检 验 。5注 ： 表 面 污 染 和 空 气 污 染 程 度 也 可 用 其 它 方 法 检 查 。无 菌 间 操 作 规 程1.无 菌 室 应 保 持 清 洁 ， 严 禁 堆 放 杂 物 ， 以 防 污 染 。2.严 防 一 切 灭 菌 器 材 和 培 养 基 污 染 ， 已 污 染 的 应 停 止 使 用 。3.无 菌 室 应 备 有 工 作 浓 度 的 消 毒 液 ， 如 70 的 酒 精 ， 0.1 的 新 洁 尔灭 溶 液 等

15、 。4.无 菌 室 应 定 期 用 适 宜 的 消 毒 液 灭 菌 清 洁 ， 以 保 证 无 菌 室 的 洁 净 度 符 合要 求 。5.需 要 带 入 无 菌 室 使 用 的 仪 器 ， 器 械 ， 平 皿 等 一 切 物 品 ， 均 应 包 扎 严 密 ，并 应 经 过 适 宜 的 方 法 灭 菌 。6.工 作 人 员 进 入 无 菌 室 前 ， 必 须 用 肥 皂 或 消 毒 液 洗 手 消 毒 ， 然 后 在 缓 冲间 更 换 专 用 工 作 服 ， 鞋 ， 帽 子 ， 口 罩 和 手 套 (或 用 70%的 乙 醇 再 次 擦 拭双 手 )， 方 可 进 入 无 菌 室 进 行 操

16、 作 。7.无 菌 室 使 用 前 必 须 打 开 无 菌 室 的 紫 外 灯 辐 照 灭 菌 30min 以 上 ， 操 作完 毕 ， 应 及 时 清 理 无 菌 室 ， 再 用 紫 外 灯 辐 照 灭 菌 20min。8.供 试 品 在 检 查 前 ， 应 保 持 外 包 装 完 整 ， 不 得 开 启 ， 以 防 污 染 。 检 查 前 ，用 70%的 酒 精 棉 球 消 毒 外 表 面 。9.每 次 操 作 过 程 中 ， 应 做 阴 性 对 照 ， 以 检 查 无 菌 操 作 的 可 靠 性 。10.接 种 针 每 次 使 用 前 后 ， 必 须 通 过 火 焰 灼 烧 灭 菌 ， 待 冷 却 后 ， 方 可 接 种培 养 物 。11.带 有 菌 液 的 吸 管 ， 试 管 ， 培 养 皿 等 器 皿 应 浸 泡 在 盛 有 5%来 苏 尔 溶液 的 消 毒 桶 内 消 毒 ， 24h 后 取 出 冲 洗 。12.如 有 菌 液 洒 在 桌 上 或 地 上 ， 应 立 即 用 5%石 碳 酸 溶 液 或 3 的 来 苏 尔倾