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1、精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 1 / 10脑梗死患者血清 NO 及 tNOS/iNOS 的测定 摘要 目的：通过观测正常人及脑梗死患者血清一氧化氮（NO）和一氧化氮合成酶（NOS）水平，NO、NOS 与脑梗死的关系探讨。方法：用硝酸还原酶法测定血清 NO。用 NOS催化 LArg 和分子氧反应生成 NO，NO 与亲核性物质生成有色化合物后，再采用比色的方法测定血清 NOS。测定 42 例脑梗死患者及 18 例健康人血清 NO、tNOS 和 iNOS 含量，分析上述指标的变化情况。结果：与健康对照组比较，脑梗死组 NO 含量明显降低（P0.05） 。结论
2、：血清 NO、tNOS 和iNOS 参与了脑梗死的病理生理过程，其测定有助于对脑梗死患者的诊断及康复治疗。 关键词 脑梗死；一氧化氮（NO） ；一氧化氮合成酶（NOS） Determination of serum nitric oxide (NO) and nitric oxide synthesis (tNOS, iNOS) in the patients with cerebral infarction WU Xiaohua, YAN Jinhui, YANG Xiaohui (Changzhou Medical College, Hebei Province, Changzhou 06
3、1001, China) Abstract Objective: By observing serum nitric oxide (NO) and nitric oxide synthesis (NOS) levels of normal subjects and patients with cerebral 精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 2 / 10infarction, to explore the relationship between NO, NOS and cerebral infarction. Methods: The levels o
4、f serum NO were determined by nitrate reductase. And with NOS catalytic LArg and molecular oxygen response to generate NO, NO and pronuclear substances to conduct a colored compound, then with colorimetric method determination of serum NOS. In 42 patients with cerebral infarction and 18 healthy volu
5、nteers, serum NO, tNOS and iNOS contents were determined and analysis of changes in these indicators. Results: Compared with the healthy control group, the serum NO decreased significantly in infarction group (P0.05). Conclusion: Serum NO, tNOS and iNOS have involved in the pathophysiology of cerebr
6、al infarction, the determination could help the diagnosis of cerebral infarction and rehabilitation. Key words Cerebral infarction; Nitric oxide (NO); Nitric oxide synthesis (NOS) 脑梗死发病与多种因素有关，由于缺血缺氧，脑组织产生一系列病理改变，引发“瀑布式”自由基连锁反应，精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 3 / 10产生大量自由基，造成广泛且严重的生物膜脂质过氧化，使膜通透性
7、增加，结构遭到破坏，导致神经细胞、胶质细胞和血管内皮细胞损伤。目前认为自由基是参与脑缺血性损害发生的重要因素之一1。血管内皮功能障碍是多种心脑血管疾病的共同病理机制，其突出表现为内皮依赖性血管舒张功能障碍，主要由 NO 减少及氧自由基增加所致2。本文中笔者检测急性脑梗死患者血浆一氧化氮（NO）及一氧化氮合成酶（NOS）含量的变化，进一步了解 NO 及其合成酶在脑梗死急性期的变化规律，探讨其对脑梗死发病过程的病理生理意义，有助于对脑梗死患者的诊断及康复治疗。 1 资料与方法 1.1 一般资料 本组患者均来自于河北省沧州市人民医院神经内科2009 年 3 月 4 日2010 年 2 月 2 日的住
8、院患者，且所有病例均经过头颅 CT 或 MRI 检查确诊，诊断符合全国第四次脑血管病会议标准。其中，脑梗死组患者 42 例，男 28 例，女 14 例；年龄最大 78 岁，最小 45 岁，平均（678）岁。对照组 18 例均为血站健康献血员，其中，男 7 例，女 11例；平均年龄（598）岁。所有脑梗死组患者的采血时间，最早为患者入院后第 1 天，最晚为入院后第 24 天，且均于清晨卧位时空腹抽取静脉血 2 ml，于 24 h 内通过抗凝、3 精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 4 / 10000 r/min 离心机离心 15 min 后提取血清，将每例患者
9、血清均分装于 4 个 EP 离心管中，封存于 80冰箱中成批备用。1.2 方法 1.2.1 仪器和试剂 采用上海 7200 型可见光分光光度计。NO 和 NOS 试剂测定盒购于南京建成生物工程研究所。 1.2.2 检测方法 严格按照试剂盒说明书中的操作程序进行，为了避免反复冻融影响标本质量，笔者将 NO、tNOS及 iNOS 所有指标统一测定，并且采用编号双盲的方法检测所有标本。按照试剂盒标注方法配制各种试剂，配置及测定步骤严格按照操作规程完成，应用分光光度仪 550 nm，0.5 cm 光径，采用分光光度仪比色法检测各管吸光度值。 1.2.3 计算方法根据各测试管所测吸光度值，按说明书给出的
10、计算公式计算 NO、tNOS 及 iNOS 的含量，结果分别以 mol/L、U/ml 和 U/ml 表示。 1.3 统计学处理 数据以均数标准差（xs）表示，配对比较采用t、t检验和方差分析。 2 结果 脑梗死患者血清 NO、NOS 含量变化，见表 1。与健康对照组比较，脑梗死组 NO 含量明显降低（P0.05） 。 精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 5 / 10表 1 脑梗死患者血清 NO、NOS 含量变化（xs） Tab.1 Change of NO, NOS of the serum in the patients with cerebral inf
11、arction (xs)与健康对照组比较，P0.05，*P0.05 但有降低趋势，P0.05 但有上升趋势3 讨论 自从 NO 被认识以来，其在脑血管病发病中所起的作用一直是研究的重点。近来研究的结果有分歧，研究较为一致的观点认为 NO 是由 NOS 催化 L 精氨酸生成的一种含氮化合物，可以使血管平滑肌松弛，且能抑制血小板聚集。大量研究表明，内皮细胞可以在生理条件下不断合成基础量的 NO，并不断释放以抑制血管对收缩因子的反应，抑制血小板聚积和黏附，从而维持血管的舒张状态，保持生理水平所需的脑血流量3，但产生过多或过少的 NO 都将导致脑组织的病理性损伤4。 NOS 是合成 NO 的关键因素，
12、在脑缺血中发挥神经元保护和神经毒性的双重作用5。它有三种亚型，神经元型（nNOS） 、内皮型（eNOS） 、诱导型（iNOS） ， 均已在中枢神经系统中得到实验证实，神经元型（nNOS）和内皮细胞精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 6 / 10型（eNOS）在生理状态下即有表达，统称为原生型酶（cNOS） 。有多种细胞可产生 NOS。在脑缺血时 eNOS 活性升高，从而引起 NO 生成增多，致缺血区脑血管扩张，改善缺血区血供，对缺血脑组织起到保护作用。相反nNOS、iNOS 在脑缺血后起损害作用，nNOS 在脑缺血较早阶段起损害作用，iNOS 的损害作用发生
13、在脑缺血稍后阶段6。脑梗死患者血清 NO 含量的改变，国内报道不一。有研究表明，脑血管病急性期，脑组织缺血后可同时诱导内皮性 NOS 和神经元性 NOS 的表达及活性上调，并合成释放大量的 NO，致脑梗死急性期 NO 升高7。也有研究报道，脑梗死组患者血浆 NO 含量较健康对照组显著降低， 尤其在伴有高血压的脑梗死患者中更为明显8。本实验研究显示，脑梗死患者的血清 NO 含量显著降低。急性脑血管病患者均具有不同程度的脑动脉血管硬化，其中部分患者还合并有高血压疾病，这些患者的动脉内皮细胞受到损伤，合成和释放的 NO 减少9。当脑梗死急性发作时，大脑局部的组织出现缺血、缺氧及细胞肿胀，进一步加重了
14、颅内血管内皮细胞的损伤，而缺氧不仅可直接抑制内皮细胞释放 NO，还可产生超氧化物等自由基使 NO 灭亡，从而导致 NO 的合成和释放更进一步减少，导致血管痉挛，加重了脑梗死。 本实验显示 NOS 含量变化不显著，但是 tNOS 有降低趋精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 7 / 10势、iNOS 有上升趋势。有报道提示，广泛分布于脑组织中的 NOS 受到 NO 的负反馈调节10。当 NO 含量降低时反馈性导致 NOS 的降低减缓或使其有所升高，但也有研究发现，在脑缺血亚急性期出现的炎性浸润等改变可以激活 iNOS，而产生大量的 NO，并且可促使非毒性刺激因素
15、（感染、血压波动、脱水等）进一步加重脑组织损伤11，而通过应用 iNOS 抑制剂可阻断 NO 介导的毒副作用。本研究显示 NOS 含量变化不明显，也可能是因为观察例数、时间限制所致。 有研究人员通过动物实验发现，NO 含量于脑缺血病灶处显著增多，而多数报道表明，脑梗死患者脑脊液中的 NO含量增多，血清中的 NO 含量减少12。本实验结果提示，急性脑梗死患者的血清 NO 含量下降，可能是由于脑梗死发生时血管内皮细胞受到损伤，致 cNOS 的活力下降，导致 NO生成和释放减少。脑梗死形成过程中产生的大量氧自由基及超氧阴离子可与 NO 反应，生成过氧亚硝酸阴离子，从而缩短 NO 的半衰期4，致使 NO 含量下降。 本实验结果显示，脑梗死患者血清 NO 含量明显降低，NOS 虽无显著性改变，但 tNOS 有降低趋势、iNOS 有上升趋势，提示 NO
