多聚赖氨酸的配置

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1、多聚赖氨酸的配置、保存、使用一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者 PBS，浓度一般为用 0.1 mg/ml 进行包被。二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例) ：49456826.snap 三、我配成 1mg/ml 的储存液，用 Mini-Q(超纯水)配制，放在20储存，使用时稀释 10倍（也用超纯水） ，即终浓度 100ug/ml，过滤后使用。工作液过滤使用，如一次用不完，放在 4储存。 多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。 四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用 PBS 配,但没写 PH,浓度，向各位请教。 答：PH 应该在 7.07.4，PBS：取氯化钠 7.

2、650 g，无水磷酸 氢二钠 0.724 g，磷酸二氢钾 0.210g 溶于蒸馏水 1000 mL 中，以 1N 氢氧化钠 溶液调 pH 值为 7.07.4，经 121灭菌15 分钟 五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？ 答：Sigma 的产品说明书上写的很明白的。 另外，有本书上是这么写的，供参考： Poly-lysine-coated tissue culture surfaces To coat coverslips: Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polylysine i

3、n 4.73 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-m filter. Store in 100-l aliquots at ?20C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 g/ml working

4、 solution. Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working solution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry. To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolving 100 mg p

5、oly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-m filter. Store in 5-ml aliquots at ?20C. When ready to use, dilute 1 part stock solution with 9 parts water to

6、 prepare 100 g/ml working solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working solution and incubate 1 hr in a humidified 37C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuum aspiration and allow surface to dry. Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4C. Use diluted solu

7、tions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4C. 你可以配置好 PLL 后单独将其过滤除菌，分装，待用。玻片也是事先泡洗洁精，泡酸，双蒸水洗，烘干后高压灭菌，待用。培养的前一天包被培养板时先把玻片放入培养孔然后把 PLL 加到玻片上，静置 15 分钟，洗出多余的 PLL，然后用高压过的双蒸水洗板，培养板放入 37 度烘箱里过夜就可以用了。 六、多聚赖氨酸消毒该怎么办？ 答：紫外照射消毒我没试过，但用 0.22um 的滤器消毒是没问题的（小的一次性滤器可以过滤 200ml)。在液体消毒

8、时，如果所含成份经过高温，钴 60 照射发生变性者，建议用滤器（0.22） ，多聚赖氨酸为氨基酸类，建议用滤器，如果要求程度高，可以两个滤器过滤两次。 七、资料：多聚赖氨酸溶液（Poly-L-Lysine Solution）Conc.: 0.1% w/v, in water Storage: 18-26Thimerosal, 0.01%, added as preservative 多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂，该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。 适用组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等使用的玻片的防脱片处理，以防实验操作过程中组

9、织掉片。也可用于细胞培养，增加细胞贴壁能力。 八、使用说明 操作步骤（可直接在玻片上涂布） 1.灭菌的 ddH2O 1:10 稀释该多聚赖氨酸溶液。 2.用之前将稀释的多聚赖氨酸溶液放在室内，使其温度到室温 18-26 3.将玻片浸在稀释的多聚赖氨酸溶液 5 分钟。注意增加时间不会提高包被效果。 4.在 60烘箱 1 小时干燥，或室温 18-26过夜干燥待用。 九、注意事项 1.每 100mL 已稀释的多聚赖氨酸溶液要包被的玻片 40-90 张， 超过 90 张片子将影响其黏合力。 2.用之前的玻片必须保持清洁。必要时用含 1% HCl 的 70%乙醇溶液来清洗。 3.不要在用过的稀释液中加新

10、的溶液。 4.释过的多聚赖氨酸溶液要放在 2-8，至少在 3 个月内是稳定的。 5.用过的稀释液要过滤，若出现浑浊或长菌要丢弃。 十、将 0.5%多聚赖氨酸溶液加入细胞培养皿中，浸泡 5-10 分钟并自然晾干待用即可。 十一、多聚赖氨酸(poly-l-lysine) ：常用包被培养皿的基质之一 .。 1. 配制硼酸缓冲液（PH8.4） A 液：硼砂溶液1.907g 溶于 100ml 三蒸水（0.05M） B 液：硼酸溶液1.237g 溶于 100ml 三蒸水（0.2M） 4.5mlA 液5.5mlB 液硼酸缓冲液（PH8.4） 2. 多聚赖氨酸 5mg 溶于 50ml 硼酸缓冲液中，配成 10

11、0g/ml 的多聚赖氨酸溶液。过滤除菌，20 度保存。 3. 使用时 4 倍稀释，可以重复使用 3 次！ 十二、听说一般买来的多聚赖氨酸都是用了做免疫组化时用的，一般都加了防腐剂，不利于细胞培养。所以我以前都是自制鼠尾胶原。请教 midas 主任，不知道这种说法是否正确？答:我不知道别的地方 PLL 的来源，不过我们这里是 sigma 的粉剂，而且注明是for cell culture。 如果多聚赖氨酸中有防腐剂那么肯定不适合细胞培养！ 十三、一些参考书上有的用三蒸水，有的用 PBS 配置，这与你说的很有出入，是不是三种配法都可以？不知道那一种更合理些？ 答：其实都可以，不过这是推荐的方法！（

12、用硼酸缓冲液）十四、主任，按照您的配方，多聚赖氨酸的使用浓度应该是 0.025mg/ml，目前我们实验室的使用浓度是 0.1mg/ml，这个浓度来源于上海脑所我想请问一下，我们用的浓度是否偏高，我培养的是大鼠星形胶质细胞，如果用您推荐的浓度，细胞是否容易贴壁谢谢！ 答：有些文献上也是用的 0.1mg/ml，但是我们在实际工作中用 0.025mg/ml 是完全可以的。 方法是至少包被 4h 以上，过夜也可以（可重复用 3 次）！之后无菌水清洗，晾干后即可使用。 用于配养细胞的多聚赖氨酸分子量要求70,000，一般常见的分子量有70,000150,000，150,000300,000 和300,0

13、00，分子量越大，黏附力越强，但相对完全溶解较困难，所以我推荐使用 150,000300,000 比较好。 多聚赖氨酸的工作浓度各家文献报道相差很大，从 0.25 mg/ml 到 0.01mg/ml 都有，因为多聚赖氨酸对细胞有毒性，所以在保证贴附的前提下，浓度越低越好，还省钱。我现在用的是 0.01mg/ml。 多聚赖氨酸的配制浓度在各个书上不一，我也在做原位杂交，浓度是 0.01mg/ml 比较好吧 十五、请问多聚赖氨酸（150000300000）如何配置？保存？工作浓度？ 答：多聚赖氨酸应该是避光保存的 我们实验室使用的方法如下，希望对你有用： 多聚赖氨酸（Poly-L-Lycine,P

14、LL） 试剂：多聚赖氧酸 5g 蒸馏水 1000ml 配制方法：称取 PLL，溶于 H2O，充分混合即可，此液浓度为 0.5%，可适当稀释配成 0.010.5%浓度。4保存，也可 -20备用。PLL 可反复冰冻，效果无明显影响，工作液常再稀释 1050 倍。 我的使用方法如下： 先配制成 10mg/ml 的浓缩液，使用前按照 1：80 稀释，制成工作液，浓度 25ug/ml,可用于包被培养皿。 十六、各位老师，有几个关于多聚赖氨酸包被培养板的问题请教 1、pll 到底溶于硼酸缓冲液还是溶于三蒸水或双蒸水 2、使用前是用灭菌的去离子水稀释吗，可不可以用双蒸水或别的 答：多聚赖氨酸溶于硼酸缓冲液或

15、者无菌培养用水； 多聚赖氨酸包被培养板使用前是用灭菌的去离子水稀释，最好不要用双蒸水或别的，因为多聚赖氨酸包被的原理是通过改变器皿表面的电荷而促进细胞的黏附。 十七、请问：多聚赖氨酸包被培养板和培养瓶时，该注意什么问题？ 答：我的方法是：浓度为 50ng/1ml 的多聚赖氨酸，加入培养板或培养瓶能均匀覆盖底部就可，放置在无菌操作台中过夜。第二天早上用时先用双蒸水冲洗三遍再用。 十八、我的问题是多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长时间，太长了会有影响吗？ 答：我曾用过多聚赖氨酸包被培养瓶,但浓度是 0.1mg/ml,我都是放一夜,第二天吸掉晾干就用,当然要紫外消一下.我觉得时间长点没什么大碍。 我们这

16、里的老师说，多聚赖氨酸不能用紫外线照射。 1.用赖氨酸包被培养板和培养瓶时，应该选用多聚左旋赖氨酸(分子量为 15-30 万) ； 2.感觉你“浓度为 50ng/1ml”有些低，我一般最后多聚赖氨酸使用浓度达到 2030ug/ml ； 3.包被时间一般为 67h，或者过夜也可； 4.使用时应该先用灭菌水洗三次PBS（起平衡盐作用）洗一次，洗液的量应该大于包被液的量； 5.“多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长时间，太长了会有影响吗？”，我包被时间最长的经历 有过 48h,最后只是多聚赖氨酸随着时间延长蒸发一些而量变少了，但是对细胞生长并无大碍，这是我曾经有过的经历，所以我会负责地告诉你；6.“多聚赖氨酸能在 4 度冰箱里放多久？”，最好置于20 度保存，放置数月乃至半年都可以。 我问过博士德公司，他们分装的多聚赖氨酸是用来作免疫组化的，没有做过细胞培养实验，他们不保证能否用在细胞培养中，建议你买其他公司的吧，有固体的，分子量为