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1、广山楂及其叶质量分析研究更新日期：2010-12-21 点击： 陈勇甄汉深董艺 提要对广山楂及其叶中所含的黄酮类、有机酸类等成分进行了定性定量的初步研究，并对广山楂叶作了显微鉴别研究，旨在为广山楂及其叶的质量评价提供了一定的科学依据。 关键词广山楂；广山楂叶；芦丁；熊果酸；总黄酮；总有机酸 Quality Analysis for Fruits and Leaves of Malus doumeri (Bois) Chev. Chen Yong, Zhen Hanshen, Dong Yi Guangxi College of TCM, Nanning 530001 AbstractA qua
2、litative and quantitative study on flavonoids and organic acids etc. in fruits and leaves of Malus doumeri (Bois) Chev. was taken. Microscopical identification on the leaves was also studied. The study provids a scientific basis of the quality evaluation for the fruits and leaves of Malus doumeri (B
3、ois) Chev. Key wordsFruits of Malus doumeri (Bois) Chev.;Leaves of Malus doumeri (Bois) Chev.;Rutin;Ursolic acid;Total flavonoids;Total organic acid 山楂具有消食健胃、行气散瘀等作用，用于肉食积滞、瘀血经闭、高血脂症等。 中国药典1995 年版收载的山楂品种为山里红(Crataegus pinnatifida Bge. var major N. E. Br.)、山楂(C. pinnatifida Bge.)的干燥成熟果实1 。商品名俗称“北山楂”
4、。台湾林檎Malus doumeri (Bois) Chev. ，别名尖嘴林檎、大果山楂，为蔷薇科苹果属植物，其果实及其叶在广西作为山楂使用已久2 ，商品名俗称“广山楂”及“广山楂叶” 。广山楂与北山楂在外形上有较大差异3 ，广山楂个大色淡，而北山楂果小，果外皮有白色小凸点。但两者在成分含量方面有何差异，则未见有报道。为考察广山楂及其叶的质量，本文对广山楂及其叶中黄酮类、有机酸类等成分进行了定性定量方面的初步研究，对广山楂叶作了显微鉴别研究，现报道如下。 1实验材料及仪器 广山楂、广山楂叶(为新嫩叶，为旧老叶；均购自广西靖西县药材公司，经我系周子静教授鉴定为蔷薇科苹果属植物台湾林檎Malus
5、doumeri (Bois) Chev.的干燥果实和叶；北山楂(为市售品，购自南宁市医药总公司，经鉴定为药典收载品种山楂果实)；芦丁、熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所提供)；硅胶 G(青岛海洋化工厂)，其余实验所用试剂均为分析纯。 UV-160A 紫外分光光度计(日本岛津)；ZF-1 型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)；PBQ-型薄层自动铺板器(重庆南岸新力电器厂)。 2广山楂叶显微鉴别 2.1横切面组织特征：叶横切面表皮细胞 1 列，微管束排列呈半月形，叶柄基部至主脉上部的横切面，均可见韧皮部外侧有纤维束及厚壁细胞群连成半月形，叶片栅栏组织由 2 列细胞组成，主脉有簇晶及方晶散在，海
6、绵组织细胞排列疏松。广山楂叶主脉显微简图见图1A、B。 2.2叶表面观：上表皮细胞类多角形或方形、细胞壁明显增厚，可见壁孔，角质层纹不明显，偶有分泌细胞。下表皮细胞壁念珠状增厚，气孔不定式。嫩叶非腺毛众多。叶上、下表面观显微详图见图 1。 图 1A-新叶横切面 B-嫩叶横切面 C-叶上表面 D-叶下表面 3薄层鉴别 3.1黄酮类成分 3.1.1对照品溶液制备：取芦丁对照品适量制成 1 mg/ml 甲醇溶液。 3.1.2对照药材溶液制备：取北山楂对照药材粗粉 2 g，用石油醚适量浸泡 1 d，弃去石油醚，残渣加甲醇浸泡过夜，滤液浓缩至适量备用。 3.1.3供试品溶液制备：取广山楂及其叶供试品粗粉
7、各 2 g，按对照药材溶液制备方法处理，即得。 3.1.4薄层层析；分取上述 5 种溶液各 510 l，点样于同一块碱性硅胶 G 层析板(取 4%醋酸钠溶液 100 ml，加入 0.7 g CMC-Na 制成的上清液铺板，晾干，105活化 1 h)上，以醋酸乙酯丁酮甲酸水(10711)为展开剂，展距 12 cm，取出晾干，10%三氯化铝甲醇液喷雾显色，在可见光和紫外灯下(365 nm)分别检视。供试品色谱在与对照药材及对照品色谱相应位置上显示相同颜色与亮蓝色荧光斑点，结果见图 2。 3.2单体有机酸成分4 3.2.1对照品溶液制备：分别取草酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸和琥珀酸分析纯试剂品适量，制
8、成 1 mg/ml 的乙醇溶液。 3.2.2对照药材溶液制备：取北山楂对照药材粗粉约 1 g，加入 pH=8 氨水 15 ml 浸泡 1 d，滤过，取滤液约 7 ml 加入阴离子交换树脂约 8 g，浸泡 1 d，将树脂转移至层析管(120 cm)中，用蒸馏水洗树脂至流出液呈中性，先用甲酸甲醇(4060)45 ml 洗脱，后用甲酸甲醇(7030)10 ml 洗脱，合并洗脱液，于蒸发皿中在 80以下水浴挥干溶剂，残渣用乙醇 2 ml 溶解即得。 3.2.3供试品溶液制备：取广山楂粗粉约 1 g 按对照药材溶液制备方法处理，即得。 3.2.4薄层层析：取上述 7 种溶液分别点于同一块硅胶 G CMC
9、-Na 层析板上，以乙醚氯仿甲酸甲醇(521.50.5)为展开剂，展开，展距 12 cm，取出晾干，于 120烘箱内干燥 23 h，以除尽甲酸，用 0.04%溴酚蓝溶液(用 1 mol/L 氢氧化钠溶液调至呈微碱性)喷雾显色，在可见光下观察层析斑点，结果见图 3。 3.3熊果酸 3.3.1对照品溶液制备：取熊果酸对照品适量制成 1 mg/ml 的甲醇溶液。 3.3.2对照药材溶液制备：取北山楂对照药材粗粉 2 g，用石油醚适量浸泡 1 d，弃去石油醚液，残渣加甲醇适量浸泡过夜，滤过，滤液浓缩至适量备用。 3.3.3供试品溶液制备：取广山楂及其叶供试品粗粉各约 2 g，按对照药材溶液制备方法处理，即得。 3.3.4薄层层析：取上述 5 种溶液分别点样于同一块硅胶 G CMC-Na 层析板上，以环己烷氯仿醋酸乙酯(2058)为展开剂，展距 12 cm，取出晾干，用 10%硫酸乙醇溶液喷雾，105加热烘 5 min 显色，供试品色谱在与对照药材及对照品色谱相应位置上显相同的紫红色斑点，在紫外灯下(365 nm)观察显橙黄色荧光斑点。结果见图 4。 4含量测定 4.1总黄酮含量测定5 4.1.1芦丁对照品溶液制备：精密称取 120干燥至恒重的芦丁对照品 5 mg，置 25 ml 量瓶中，加甲醇适量使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀， 即得(含芦丁 0.2 mg/ml)。
