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1、精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 1 / 9广西壮族腰椎间盘突出症血瘀证患者与 TGF作者：许建文钟远鸣陈晶欧伦谢伟星尹利军张家立杨光韦家鼎李桂焕【摘要】 目的探讨腰椎间盘突出症血瘀证患者及部分危险因素与 TGF1 509C/T 基因多态性的关联性。 方法筛选符合既定相关标准的广西壮族人群腰椎间盘突出症患者 88 例,分为血瘀证组 30 例与非血瘀证组 58 例，进行 TGF1 509C/T 基因多态性检测，并观测患者的腰椎负荷强度等指标，观察部分危险因素以及部分危险因素和TGF1 509C/T 基因多态性的交互作用与腰椎间盘突出症中医证型的关联性。 结果
2、经非条件 Logistic 回归Forward（LR）法分析显示广西壮族重度腰椎负荷强度者患腰椎间盘突出症血瘀证的风险是轻中度腰椎负荷强度者的3.911 倍（95%CI:1.334 1.872）(P 【关键词】 腰椎间盘突出症中医证型 危险因素TGF1 509C/T 基因多态性Abstract: ObjectiveTo investigate the relationship between the blood stasis syndrome and parts of the risk factors of lumbar intervertebral disk protrusion (LIDP
3、)and transforming growth factor 1 (TGF1) 509C/T site gene polymorphisms. 精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 2 / 9MethodsA total of 88 Zhuang ethnic patients from Guangxi Zhuang Autonomous Region were selected according to standard of LIDP, 30 with blood stasis syndrome and the other 58 without , th
4、en, their single nucleotide polymorphism (SNP) of TGF1 509C/T and risk factors like lumbar burden intensity were tested, and their relationship with the traditional Chinese medicine syndrome of LIDP were analyzed.ResultsIt was showed by logistic regression Forward (LR) analysis that risk of syndrome
5、 of blood stasis pattern of LIDP in patients with severe lumbar burden was 3.911 times （95%CI:1.3341.872）of that in patients with mild and middle lumbar burden (P 1 临床资料1.1 一般资料随机抽取 2007 年 112 月在广西中医学院第一附属医院骨科临床确诊为腰椎间盘突出症并中医辨证为血瘀证的患者 30 例作为观察组，均为无血缘关系的广西地区壮族人，对照组选自同期在本院骨科就诊并年龄、性别、家族史等暴露背景与观察组相匹配的腰椎间
6、盘突出症非血瘀证患者 60 例，最终纳入研究对象共 88 例，男 49 例，女 39例，其中血瘀证组 30 例，非血瘀证组 58 例，两组患者年精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 3 / 9龄、性别及家族史等基本资料比较无显著性差异 (P 0.05)，具有可比性。1.2 病例诊断及中医辨证标准西医诊断标准参照胡有谷1主编的腰椎间盘突出症 （2005.9）及胥少汀2主编的实用骨科学（2005.4） ；中医辨证参照国家卫生部及中医药管理局相关行业标准3、4 ，中医辨证为血瘀证者归入血瘀证组，中医辩证为寒湿证、肝肾亏虚证及湿热证者归入非血瘀证组。1.3 病例选择及
7、纳入标准(1)确诊为腰椎间盘突出症的患者；(2)年龄 1958岁；(3)无可查亲缘关系、向上追溯三代均为壮族的个体；(4)临床资料完整；(5) 患者知情同意，自愿参加调查，无医学理论学争议。1.4 病例排除标准(1)合并肝肾疾病、心脑血管、呼吸系统或精神病患者；(2)合并血液病、糖尿病、自身免疫性疾病、肿瘤等；(3)体质指数(body mass index,BMI) 小于 18.5 kg/m2 或大于 28.0 kg/m2；(4)吸烟指数大于 300 支/dy 者；(5)临床资料不完整。1.5 临床指标观测方法1.5.1 吸烟指数（smoking index,SI）：按平均每天精品文档2016
8、 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 4 / 9吸烟数目乘以吸烟年限评价，参考 Battie 等方法5划分为不吸烟和吸烟两个等级，不吸烟指从未吸过烟和SI100 的个体，吸烟指吸过烟而且 SI100 的个体。具体计算方法为 SI支/年。由三位经过培训的课题调查员通过问卷调查后提出分类意见。1.5.2 体质指数(BMI)：采用国际通用方法，超重、肥胖判定标准根据国际生命科学会办事处肥胖问题工作组对成人体质指数分类的推荐意见中建议标准6 ，分为过轻、超重、肥胖及正常体重四个等级。其中 BMI24 为超重，BMI28 为肥胖，BMI18.623.9 为正常体重，具体计算方法为 BM
9、I体重(kg）/身高 2（m2） 。由三位经过培训的课题调查员测量研究对象的身高、体重并将计算结果同以上相应数据进行比较归类。1.5.3 腰椎负荷强度7：根据瑞典斯德哥尔摩肌肉骨骼疾病研究中心的体力负荷评估问卷进行判断，包括坐位作业（sitting） 、弯腰扭腰（bending/twisting） 、全身振动（whole body vibration） 、提举重物（lifting）及重体力作业（heavy work）等，分为轻度（low） 、中度（middle）和重度（high）腰椎负荷三个等级。由三位经过培训的课题调查员通过问卷调查并提出分类意见。同时记录研究对象的性别、年龄、民族、婚姻状况
10、及精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 5 / 9家族史等。2 实验研究2.1 主要仪器及试剂：多通道荧光定量 PCR 扩增仪，美国 ABI 公司产品；原位 PCR 仪，德国 Eppendorf 公司产品；超低温冰箱， 美国 Harris 公司产品；冰冻高速离心机，德国 Eppendorf 公司；凝胶电泳成像分析系统， 美国BioRad 公司出品；ABI373OAvant 测序仪，美国 ABI 公司。全血基因组 DNA 提取试剂盒（Bsco6s1） ，Biospin 公司产品；各基因片段所需引物，上海生物工程技术公司产品；限制性内切酶：Saul 、TSP45I
11、 Fermentas 公司产品；限制性内切酶：Ddel，Promega 公司产品。2.2 实验方法2.2.1 标本收集方法：抽取符合纳入标准的患者外周血作为检测样本, 所有研究对象抽血前空腹 10 h，均于上午 78 点抽取静脉血标本 2 ml，然后注入含肝素抗凝剂的真空管中混匀，置于 4冰箱保存待用。2.2.2 检测指标及方法简介8：检测 TGF1 基因509 位点，运用聚合酶链反应结合限制片段长度多态酶切（polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphisms，PCRRFLP）技术进行基因多态性检测并对其进行基因
12、分型，基因检测及分型由广西中医学院第一附属医院分子生物学实验室专人负责，采用单盲法。精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 6 / 9基因多态性分析的主要步骤包括：外周血白细胞 DNA 提取过程的操作方法按照试剂的说明书进行，全部受试者均取外周静脉血 2 ml，EDTA 抗凝，采用 Biospin 抽提试剂盒提取基因组 DNA，按照既定方法和步骤提取 DNA；聚合酶链反应(PCR)扩增，设计引物；限制性内切酶消化；凝胶电泳；基因分型。3 统计学分析基因型与等位基因频率采用频率计数法计算，研究对象基因型与等位基因频率的比较均采用卡方检验，两组均数比较采用 t 检验
13、，比值比(odd ratio,OR)计算采用Logistic 回归分析。所有数据均应用 SPSS 13.0 For Windows 统计软件包进行统计分析，P 4 结果用非条件 Logistic 回归 Forward（LR）法分析腰椎间盘突出症血瘀证潜在的危险因素，按 =0.05 检验水准上，筛选出 3 个因素与 LIDP 血瘀证的发生有统计学意义(P0.05)的危险因素,各危险因素的参数估计值及相对危险度的估计值结果见表 2 所示。表 2 LIDP 血瘀证型相关危险因素（略）5 讨论既往研究结果显示，椎间盘退变（intervertebral disc degeneration，IDD)是 L
14、IDP 的根本原因，实验及临床研究表明慢性机械劳损、年龄、职业、吸烟等环境暴露精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创 7 / 9因素与 IDD 相关，但退变的具体过程及机制未明，目前也未见以上因素与 LIDP 血瘀证关联性研究方面报道。中医临床上把腰椎间盘突出症归属于腰腿痛、痹证范畴， 且“痹久多瘀” ，血瘀是腰椎间盘突出症的病因，也是腰椎间盘突出症的主要中医证型。国外学者研究报道9LIDP 很可能是传统危险因素与基因交互作用的结果，国内学者叶伟等10、11研究显示 TGF1 基因 509C/T 单核苷酸多态性与椎间盘的退变相关，笔者8前期研究显示与转化生长因子 1 基因 509 位点 TT 基因型相比，携带转化生长因子 1 基因 509 位点 CT 基因型的广西壮族 LIDP 患者患血瘀证的风险较高(P 【参考文献】1胡有谷.腰椎间盘突出症M.第 3 版.北京:人民卫生出版社,2005，9.2胥少汀,葛宝丰,徐印坎，主编.实用骨科学M.第三版.北京：人民军医出版社,2005，4.3中药新药临床研究指导原则S.北京：中华人民共和国卫生部，2002.4中医病证诊断疗效标准中医骨伤科病证诊断疗效标准腰椎间盘突出症的诊断依据、证候分类、疗效评精品文档2016 全新精品资料-全新公文范文 -全程指导写作 独家原创
