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1、Waters 600E-2487 高效液相色谱系统操作规程1. 目的规范 Waters 高效液相色谱系统的使用和维护。2. 范围本规程适用于 Waters 高效液相色谱系统的使用和维护。3. 职责质检室仪器分析员负责 Waters 高效液相色谱系统的日常使用和维护。4. 系统组成本系统由 Waters 600E 多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵） 、Waters 在线脱气机、Rheodyne 7725i 手动进样阀、Waters 2487 双通道紫外检测器、Millennium32 色谱工作站/电脑等组成，另外还包括打印机、UPS 和通风柜等辅助设备。5. 程序5.1. 准备5.1.1
2、. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用 0.45m 滤膜过滤） 、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制） ，更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。5.2. 开机和泵操作5.2.1. 开机5.2.1.1. 接通 UPS 的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E 泵、2487 检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。5.2.1.2. 打开 Millennium32 软件，按Login. ，输入用户名和密码，按OK注册进入系统主界面。
3、在 Project 档内选择所需的项目，右击Run Samples图标，选择色谱系统“600_2487”后打开QuickSet 窗口。5.2.2. 更换溶剂5.2.2.1. 打开 600E 泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至 RUN 位置；5.2.2.2. 将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器） ；5.2.2.3. 按Direct键使其显示直接控制屏幕，设流速为 1ml/min（梯度配比阀在 0ml/min 时不工作） ；5.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为 100%，其它为 0%；5.2.2.5. 将输液管从原有溶剂瓶中取
4、出，放入一干净的空瓶中；5.2.2.6. 逆时钟转动手柄至 DRAW 位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约 2ml 溶剂；5.2.2.7. 再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；5.2.2.8. 转动手柄至 RUN 位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。5.2.2.9. 重复 5.2.2.4.5.2.2.8.直至所有即将使用的溶剂更换完毕。5.2.3. 排气泡5.2.3.1. 打开参照阀，换流动相为 100%超纯水，设流速为 10ml/min（注意：确认参照阀是打开的，否则可能损坏安装好的柱） ；5.2.3.2. 转动进口集合管阀手柄至 DRAW 位置，用启动
5、注射器抽出约 10ml 水；5.2.3.3. 顺时钟转动手柄至 INJ 位置，缓慢用力使水通过泵头从参照阀出口管排出（注意不要将气泡注入泵中） ；5.2.3.4. 按Stop flow屏幕键停泵，关上参照阀。5.2.3.5. 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下泵出口管，用塑料管连接至塑料烧杯中，设流速为 10ml/min，冲洗 25min（或更长时间）后停泵，重新接上柱。5.3. 平衡系统（分两种情况进行）5.3.1. 等度模式5.3.1.1. 每次以 0.1ml/min 的增量加大流速至 1ml/min，以超纯水冲洗系统 10min。5.3.1.2. 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏
6、液，如漏液应予以排除。5.3.1.3. 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的 510%以内。如超出此范围，可初步判断为柱前管路仍有气泡，重复 5.2.3.下的步骤。5.3.1.4. 压力波动平稳后，换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前，让最少 56倍柱体积的流动相通过系统。5.3.1.5. 在 QuickSet 窗口下的 Instrument Method 档内选择所需的仪器方法，按Monitor （此后泵由软件控制） ，观察基线和压力变化。如果冲洗至基线漂移 ；5.5.2.2. 划入一段包含噪声的基线，按Next ；5.5.2.3. 划入一段要积分的区间，按Nex
7、t ；5.5.2.4. 根据情况选择最小峰面积和最小峰高，按Next 、 Next ；5.5.2.5. 在 Name 档内输入各组分峰的名称，按Next 、 Next ；5.5.2.6. 在 Method Name 档内填写方法名称，按Finish 。退出 Review 窗口。5.5.3. 修改标准选中所有标准，右击后选“Alter Sample”进入 Alter Sample 窗口。5.5.3.1. 在 Sample Type 档内将 Unknown 改成 Standard；5.5.3.2. 按Amount图标（左上第六个）进入 Component Editor 窗口；5.5.3.3. 按C
8、opy from Process Method图标（左上第五个） ，选择刚建立的处理方法，按Open ，在 Value 和 Units 档内分别输入标准所含各组分的数值和单位，完成后按OK回到 Alter Sample 窗口；5.5.3.4. 按Save图标存盘，退出 Alter Sample 窗口。5.5.4. 积分先选中所有标准，再选中所有未知样品，右击后选“Process”进入 Background Processing & Reporting 窗口，选 Use specified processing methods，在右边档内选择刚建立的处理方法，按OK 。5.5.5. 打印在 Pr
9、oject 窗口下选Results标签。5.5.5.1. 选中要打印的标准/样品，右击后选“Preview”进入 Open Report Method 窗口，选合适的打印方法，按OK进入 Report Publisher (Preview)窗口，预览打印的结果。按打印(Print)图标（左上第二个）即可打印结果。5.5.5.2. 按Close可进入 Report Publisher 窗口对报告方法进行修改，完成后按Print图标（右数第二个）即可打印结果。5.5.6. 数据处理完成后，关闭所有窗口，在主界面下按Logout退出系统，关闭 Millennium32 软件，再依次关闭电脑主机、显示
10、器、打印机。5.6. 清洗系统和关机5.6.1. 数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗 10min 后，换水冲洗。5.6.2. 清洗进样阀5.6.2.1. 用启动注射器吸 10ml 超纯水；5.6.2.2. 将注射针导入口冲洗头（Rheodyne 部件号 7125-054）连接到注射器出口上（不要针） ，并将它们一起接到进样口上；5.6.2.3. 使进样阀保持在 Inject 位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。5.6.3. 清洗柱5.6.3.1. C18 柱先用超纯水以 1ml/min 冲洗 40min 以上，再用甲醇或
11、乙腈冲洗 20min。5.6.3.2. Protein PAK60 柱先用超纯水冲洗 90min 以上，再用甲醇或乙腈冲洗 40min。5.6.4. 用水冲洗柱后，分别用 20ml 超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。5.6.5. 清洗完成后，先将流速降到 0，再依次关闭泵、脱气机、UPS，断开电源。5.6.6. 填写使用记录。Waters 高效液相色谱系统操作规程制定人：1. 目的规范 Waters 高效液相色谱系统的使用和维护。2. 范围本规程适用于 Waters 高效液相色谱系统的使用和维护。3. 职责室仪器负责 Waters 高效液相色谱系统的日常使用和维护。4. 系统组成本系统由 W
12、aters 输送系统（输液泵）、Waters 在线脱气机、进样阀、检测器、色谱工作站 /电脑等组成，另外还包括打印机、断电保护器和通风柜等辅助设备。5. 程序5.1. 准备5.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用 0.45m滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。5.2. 开机和泵操作5.2.1.开机及测试样品 5.2.1.1 先打开色谱仪、检测器；后打开电脑及软件； 5.2.1.2 选 project、
13、use name； 5.2.1.3manage breeze 看 system，连接情况； 5.2.1.4view method 设参数：如波长、流速（1.0 ）、溶剂（甲醇：水）等；保存； 5.2.1.5 检查：流动相放好、使用 A 泵或 B 泵； 5.2.1.6 灌注、冲洗：用流动相充分浸润泵，排除气泡； 5.2.1.7 平衡系统：equilibrate 选择方法、平衡 20min 左右；5.2.1.8 进样：make single injection、next 、取样、出现对话框后、在 load 注入、马上移到 inject、拔出进样器；2min 后将 inject 拨回 load；停止
14、按 stop。 5.3.数据处理 5.3.1 设定 process parameter：find data 在 channel 中选一个数据、点 review、点 guide、选 start、选峰的范围（用鼠标拉）、next、next、在 peak1 命名、next 、next、选 external给 process parameter 起名（可以是仪器参数的方法名或重新起名）、finish、保存； 5.3.2 设标准曲线横坐标：find data 中选所有要做标准曲线的点、右键 alter sample、把 unknown 改为 standard、点 edit 中 component、点 e
15、dit 中 copy、选过程方法、填写每个点的浓度、OK、保存； 5.3.3 做标准曲线：find data 中选所有要做标准曲线的点、右键 process、选过程方法、选 clear、OK、右键 view as 中 result、选所有要做标准曲线的点（看时间、是刚刚生成的）、右键 review、点校正曲线、查看信息； 5.3.4 定量分析：find data 中选样品点、右键 process、选过程方法、选 useluo、OK、右键 view as 中 result、选数据点（看时间、是刚刚生成的）、右键 review。 5.4.登记仪器使用记录，填写实验记录及出具报告。6.注意事项 1.流动相过滤、配比、超声除气须严格按操作规程； 2.打开、关闭泵时，要控制流动相的流量以多次小幅度增减，以保护色谱柱； 3.做完实验后，要用甲醇（水）交替冲洗整个流路（包括进样口）。
