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1、ICS 13 300 ： 13 020 40A 80 a目中华人民共和国国家标准GBT 2 1 830-2008化学品 潘类急性活动抑制试验Chemicals-Daphnia sp， acute immobilisation test2008-05-12 发布 20080901实施丰瞀鹘紫瓣警矬赞翼发 中国国家标准化管理委员会促 19GB T 21830-2008刖 昌 本标准等同采用经济合作与发展组织 (OECD)化学品测试导则 No 202(2004 年 ) 潘类急性活动抑制试验(英文版)。 本标准做了下列编辑性修改：将术语和定义从原文的附录调整为正文内容；将计量单位改为我国法定计量单位。
2、 本标准的附录 A为规范性附录，附录 B为资料性附录。 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会 (SAC TC 251) 提出并归口。 本标准负责起草单位：环境保护部化学品登记中心。 本标准参加起草单位：沈阳化工研究院安全评价中心、广东出入境检验检疫局、广东省微生物研究所。本标准主要起草人：菅小东、周红、赵圆、蔡磊明、赵玉艳、许崇辉、梅承芳。GBT 21830-2008化学品 潘类急性活动抑制试验1范围本标准规定了化学品 淫类急性活动抑制试验的原理、仪器和设备、试验准备、试验程序、质量保证 与质量控制、数据与报告。本标准适用于测试与评价可能暴露于水生生态环境的化学品对潘类急性活动的抑制作用
3、。2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。21半数效应浓度 (Ec50)median effective concentration引起 50的受试涵活动抑制的受试物浓度。2 2活动抑制 immobilisation轻晃试验容器，15 s内潘体不能游动，视为活动受到抑制。3受试物信息a)结构式； b)纯度； c)水中溶解度； d)蒸气压；e)在水中和光中的化学稳定性； f) 正辛醇一水的分配系数(P。)； g)在水溶液中的可靠的定量分析方法、回收率以及检测限； h)快速生物降解性试验结果。4 原理幼涵 (试验开始时潘龄小于 24 h)以一定的浓度范围暴露于受试物溶液中 48 h，相对于空白对
4、照 组，观察记录 24 h和 48 h受试物对潘类活动抑制情况。通过对结果分析计算 48 h的 EC；。亦可选24 h的 EC。结果。5参比物推荐使用重铬酸钾 (K。 Cr： O， )，其 24 hEC。值范围为o6 mg L 2 1 mg L，参见参考文献 1、 5。6仪器和设备6 1接触到试验溶液的试验容器和其他设备最好是全玻璃制品或由其他化学惰性材料制成。试验容 器通常为试管或烧杯，每次使用前必须按照标准的实验室程序清洗干净；试验容器应便于加盖，以减少 水分蒸发造成的损失，并避免灰尘进人溶液。挥发性物质应在足够大的完全密闭的容器中进行，以免溶 解氧受限或过低。1GBT 21830-200
5、86 2需用下列部分或全部仪器设备： 溶解氧仪 (带有微电极或其他能够测定少量样品的溶解氧浓度的适当装置 )pH计；适当的温度控制设备；一 总有机碳 (TOC) 测定仪；一化学需氧量 (COD)测定仪；测定水硬度的设备等。7试验准备7 1受试生物7 1 1受试生物的选择首选大型潘 (Daphniamagna Straus) ，也可以使用其他溢类，如蚤状淹 (Daphnia pulex) 。试验开 始时试验用潘应是小于 24 h的非头胎滔。试验用搔应来源于同一个保种培养的健康潘，即未表现任何 受胁迫现象 (如：死亡率高、出现雄潘和冬卵、头胎延迟、体色异常等 )。7 1 2受试生物的驯养 保种培养
6、的条件 (光照、温度、培养液 )应和试验条件一致，试验前最好设置驯养期，一般试验用淫应在试验条件下驯养至少 48 h。7 2试验条件7 2 1试验用水a)只要能够使潘类在培养、驯化及试验期间存活天然水 (地表地下水 )、重组水或去氯自来水及 其他水均可 (应符合附录 A规定 )。试验期问水质应保持稳定，重组水组成应为将已知特定含 量的分析纯的试剂添加到去离子水或蒸馏水中，重组水如附录 B所示，相关的参考文献见 1 、 E6 。注意：培养液中应含有已知的螯合剂，如附录 B中的 M4和 M7培养液应避免用于 含有金属的受试物的测试。对于大型淹 (Daphniamagna Straus) 来说，水质
7、条件为： pH值为6 9，硬度 (以 CaCO 。计 )为 140 mg L 250 mg L，如果用于其他潘类，也可以适当降低硬度。 稀释水在使用前应充分曝气使溶解氧浓度达到饱和。b) 如果采用天然水应至少每年两次 (或怀疑水质可能发生明显变化时 )取样测定水质，并测定 重金属 (如 Cu、 Pb、 Zn、 Hg、 Cd、 Ni等 )含量；如果采用去氯自来水，应每天分析残留氯的含量； 如果采用地表地下水，应测定电导率并分析水中的总有机碳 (TOC) 或化学需氧量 (COD) 。7 2 2试验液a)选择的试验液浓度一般由贮备液稀释而成。贮备液最好是将受试物加入到试验用水中配制而 成。应尽量避免
8、使用助溶剂、乳化剂或分散剂，尽管有时需要使用这些物质来配制适当浓度的 贮备液。有关助溶剂、乳化剂或分散剂的准则见参考文献 E4。任何情况下，受试物的浓度不 能超过其在试验用水中的溶解度。b)通常不能调节试验液的 pH值。如果溶液的 pH不在 6 9范围内，调节贮备液的 pH值同时 进行第二套试验。调节 pH值可以使用 HCI 或 NaOH ，但必须保证贮备液的性质、浓度不发 生改变，即不发生化学反应或沉淀作用。8试验程序8 1暴露条件8 1 1试验组和对照组a)试验容器中盛有适当体积的试验用水和受试物溶液。对照组和试验组的容器中的空气与溶液 的体积比应相同，然后放人潘。每个试验浓度组和对照组至
9、少 20只潘，分成 4组，每组 5只2GBT 21830-2008 潘。负荷量为每只潘不小于 2 mL。当受试物浓度不稳定时可以采用半静态或流水式系统进行试验。b)除受试物组外，还应至少设置一组空白对照组，如果使用溶剂还应包括溶剂对照组，溶剂对照 组中的溶剂浓度应与受试物组中的溶剂浓度一致。8 1 2试验浓度a)正式试验前应先进行预试验以确定浓度范围，除非受试物已有可用的毒性资料。因此先将潘 类暴露于较大范围浓度系列的受试物溶液中 48 h，每个浓度 5只潘，不设平行。若在短时间内 即能够确定可用的浓度范围，预试验的暴露期也可缩短 (24 h或更短 )。b)根据预试验的结果进行正式试验，在包括
10、使潘全部产生活动抑制的最低浓度和未产生活动抑 制的最高浓度之间 (即 EC。 Ec。 )以几何级数设置浓度系列。至少设 5个浓度，公比不大于2 2。如果试验浓度少于 5个，应在试验报告中给予合理解释。8 1 3培养条件温度 18 22 ，同一试验中，温度变化小于或等于 1 ；光照周期 (光暗比 )为 16 h：8 h，若受试物 易光解，亦可在完全黑暗的条件下进行测试。试验期间试验容器中不能充气，不能调节 pH值，不能喂食受试涵类。8 1 4试验周期 试验周期为 48 h。8 2观察试验后24 h和 48 h分别观察每个试验容器中试验搔类的受抑制情况。除了活动受抑制外，其他 任何异常症状或表现均
11、应记录。8 3分析测量8 3 1试验开始和结束时，应测定对照组和最高浓度组试验液的溶解氧浓度和 pH值。对照组溶解氧 浓度应符合标准的规定。在同一测试中，试验期间 pH值通常不能超过 1 5个单位。测定对照组容器 中的温度或环境空气温度，至少在试验开始和结束时分别测定温度，最好连续记录温度。8 3 2应测定试验液中受试物的浓度，至少在试验开始和结束时分别测定最高浓度组和最低浓度组试 验液中受试物的浓度 “。建议用测定浓度计算试验结果。如果能够提供有力证据证明试验期间受试物 的浓度能维持在配制浓度 (或初始测定浓度 )土 20的范围内，可以用配制浓度或初始测定浓度来计算。8 4限度试验限度试验的
12、浓度为 100 mg L或受试物在试验溶液中的最大溶解度 (二者中选浓度低者 )，以表明 EC；。大于其限度浓度。限度试验需用 20只潘 (最好分成 4组，每组 5只 )，对照组相同。如果试验结束 时，抑制率超过 10，还应进行完整的试验。并记录受试潘类的任何异常反应和行为。9质量保证与质量控制9 1 1对照组 (包括空白对照组和溶剂对照组 )潘类的受抑制率不能超过 10；其受抑制情况包括：活 动受抑制、有疾病症状或受损伤，例如变色、行为异常 (如飘浮于液面 )等。9 1 2试验结束时对照组和试验组的溶解氧浓度应不小于 3 mg L。10 数据与报告10 1数据1011 以表格形式列出 24
13、h和 48 h对照组和各试验组试验淹数、活动受抑制潘数及百分率。以 24 h和 48 h抑制百分率与受试物浓度作剂量一效应凸线，选择合适的统计方法 (如概率单位法 )计算24 h EC。 (可选 )和 48 h EC。及其95的置信区间 。1012 当获得的数据使用标准的方法无法统计时，无抑制作用的最高浓度和引起 100抑制的最低3GB T 21830-2008 浓度可用于推导 EC。 (可以认为其为两者浓度的几何平均值 )。10 2试验报告 试验报告应包括以下内容：10 2 1受试物a) 物理属性和相关理化性质；b)化学标识鉴别数据，包括纯度。10 2 2受试生物 潘类的来源和种类，提供者
14、(若已知 )，培养条件 (包括食物的种类、来源、喂食量以及喂食频率 )。10 2 3试验条件a)试验容器：试验容器的类型和容积，试验液的体积，每个容器中潘类的数量，每个浓度的平 行数；b)贮备液和试验液制备的方法，包括助溶剂、分散剂和乳化剂的使用及其浓度；c)试验用水：来源和水质特征 (包括 pH值、硬度、 Ca Mg、 Na K、碱度和电导率等 )。若使用重组 水，应提供其组成和制备方法；d)培养条件：温度、光照强度和光照周期、溶解氧、 pH值等。10 2 4结果 a)各观察时间点内对照组和试验组中潘类活动受抑制或行为异常的数量和百分数； b)参比物的试验结果； c)每个容器中受试物的配制浓
15、度和所有分析测定受试物浓度的结果，分析方法的回收率和检测限；d)试验期间水质测定结果，包括温度、 pH值和溶解氧；e)24 h EC；。( 可选)和48 h ECs。及其 95置信区间，以及剂量一效应曲线及其标准误差。用于计 算EC；。的统计程序；f)如果出现偏离，需说明偏离及对试验结果的影响。4GBT 21830-2008附录 A (规范性附录 ) 合格试验用水的部分化学特性A1 合格试验用水的部分化学特性见表 A 1。 表 A 1合格试验用水的部分化学特性物 质 浓 度颗粒物 20mg L 总有机碳 (TOc) 2mg L 游离氨 1tlg L 残留氯 10卜gI 总有机磷农药 50 ng L 总有机氯农药与多氯联苯 (PCB) 50 ng L 总有机氧 25 ng LGBT 21830-2008附录 B (资料性附录 ) 推荐的重组水和培养液B 1重组水 适宜的重组水示例见表 B 1。表B1 ISO试验用水 (见参考文献 1)贮备液 (单一物质 )每升水 4贮备液的加入量 mL物质 每升水 5的加入量 gCaCl22H20 1176 25MgSO7H20 493 25NaHC
